类风湿性关节炎动物模型CIA建立

（一）佐剂性关节炎(AA)的动物模型

1.模型概述： 此模型是细菌学家Freund于50年代创立，又称福氏佐剂关节炎，福氏佐剂分为*佐剂(CFA)和不*佐剂(IFA)。福氏佐剂是将液体石蜡与无水羊毛脂按2：1或6：4比例混合的混合液1ml，高压灭菌，加入8O℃ 灭活1h的减毒卡介苗或干燥结核菌10 mg制成。不加卡介苗的为不*佐剂。

2.模型制备：造模多采用大鼠，足跖部皮下注射法：将液体石蜡高压灭菌，BCG 80℃ 灭活1h，把BCG加入液体石蜡配成10 g•L－1的乳剂，充分碾磨、混匀，即得CFA，于大鼠左后足跖皮内注射CFA 01ml致炎［1515］。原发病变主要表现为致炎局部的炎症反应，续发病变一般于致炎后10～20天左右出现，20天左右达到高峰，病理改变为滑膜下组织炎症，滑膜增生，血管翳形成。软骨破坏。4周后，关节红肿减退，骨质减少，新骨形成，关节间隙变窄。形成不可逆的关节改变。

（二） Ⅱ 型胶原诱导的关节炎(CIA)模型

1.模型概述：CIA模型是Trentham等1977建立的实验性关节炎动物模型，20世纪80年代至90年代初期，国外大量重复实验并在临床表现、病理组织学和免疫学等方面进行了广泛深入的研究。鸡、小牛、大鼠的Ⅱ型胶原(CⅡ)均能引起关节炎。选择的动物一般为啮齿类和灵长类。CⅡ大量存在于关节软骨中，同时也存在于视网膜和玻璃体中，CⅡ是一种与免疫系统隔绝的蛋白质，但在某些病理条件下可作为一种自身抗原呈现出来。Trenthem发现50％的RA患者血清中存在有抗CⅡ的自身抗体，这表明CⅡ可诱导体内产生关节炎性质的自身免疫反应。根据这些理论人们用CⅡ免疫大鼠或小鼠，从而成功地建立了ClA模型。

      以Ⅱ型胶原免疫所致动物有两个要素，一是保持Ⅱ型胶原的自然状态，即完整的三股螺旋，另外就是有佐剂的参与。Ⅱ型胶原可以是同种的，也可以是异种的。Ⅱ型胶原免疫诱发关节炎的产生和发展都依赖于自身T 细胞和B细胞的激活。去除T 细胞或去除B细胞，动物都不能用Ⅱ型胶原免疫诱发关节炎病变。

2.模型制备：Ⅱ型胶原诱导的关节炎模型是DE Trentham 等于1977年创立的，将纯化的天然胶原溶于0.1M 的醋酸制成浓度1mg／ml的溶液，与等量的福氏佐剂或不*佐剂混合成稳定的乳剂。用1ml乳剂分4～6个部位注射大鼠背部皮内，注射部位会出现小溃疡(在7～1O天后自愈)，21天后，可将0．5mg胶原溶于0．5ml 1M 的醋酸中注入大鼠腹腔再次免疫。初次注射后14～60天后，出现关节红肿，通常发生于关节远端，后足踝关节是zui常累的部位。CIA 急性期病理改变可分为两期，免疫1O天后，关节内只有一些纤维沉积物而滑膜细胞无改变，12天后，肉眼可见踝关节红肿，2O％ 的膝关节出现红肿．光镜下滑膜细胞增多．层数增至3～7层，并向软骨骨面爬行，滑膜及滑膜下组织有纤维沉积。电镜下则见滑膜细胞变圆。细胞间接触减少，丝状伪足增多．细胞内溶酶体和内质网增大、增多。19天后进入第二期。增生滑膜由6～10μm 增厚至200～250μm，形成血管翳，其中有大量单核细胞、多形核巨细胞、巨噬细胞，在微血管周围形成微脓肿，可见到单核细胞侵入软骨连接处的软组织。6～7周后，炎症进入慢性期，水肿仍存在，浸润的细胞以CD 的T 细胞为主，关节内出现瘢痕，颗粒状增生组织，软骨及软骨下骨被破坏，zui后(6个月)，导致关节强直。

（三）卵蛋白诱导性动物模型

模型制备：鸡卵蛋白溶液(20mg／ml)、卡介苗和福氏不*佐剂(三者比例lml：2ml：lm1)混合在1500r／min匀浆器下制成混合乳剂。将混合乳剂1ml在兔肩胛间区分5个部位皮下注射，2周及4周分别加强免疫1次，然后双膝关节腔内各注射5mg卵蛋白。病理学观察发现，在双膝注射卵蛋白后第1天关节直径和表面温度大幅度上升．以后缓慢下降，至14～21天后达到平台期。镜下可观察到滑膜细胞明显增生，排列紊乱并有WBC 浸润，淋巴细胞大量增生，纤维组织亦增生，部分软骨缺损。其免疫过程大致为，在致敏兔关节腔内注射一定量抗原后，产生的免疫复合物沉积在关节滑膜上，注射后数小时，滑膜上大量多核细胞浸润。然后诱导细胞介导的免疫反应，引起大量单核细胞浸润，从而形成慢性滑膜炎、滑膜增生，淋巴细胞生发中心形成针对免疫抗原的*性抗体。随后，关节软骨上生成血管翳，侵蚀骨和软骨，其病理过程类似RA。

（四）PIA

      PIA是以体液免疫和细胞免疫异常为特征的血清阳性的实验性关节炎，是由CD4 T细胞介导，Pristante使多克隆T细胞扩增，进一步引起淋巴结变，浸润滑膜。因此选择性T细胞浸润炎症性关节是PIA易感性的重要因素。

（五）DIA

     由DDA诱导的关节炎大鼠也是研究关节炎的动物模型。当皮下注射2 mg溶于PBS的DDA时，可以在Lewis和DA大鼠中诱导多关节炎，但发病率低，病情严重程度较轻；而注射2 mg混合非*弗氏佐剂的DDA，能诱导严重多关节炎，Lewis大鼠发病率为100％。DIA组织学表现为关节部位细胞浸润，滑膜充血，肉芽组织增生，软骨破坏和骨质变形。用DIA大鼠淋巴细胞能成功转移同系鼠发生多关节炎。

（六）ACII

     为佐剂角又菜胶诱导的关节炎动物模型，其诱导的方法是：以小鼠为例，在实验条件下。选择有效、敏感小鼠，先在皮下注射CFA，随后在不同时间，于足跖皮下注射角叉菜胶。实验表明，大鼠与小鼠之间对免疫诱导的应答不同，在DAB／1小鼠表现为足爪及踝关节的肿胀，于注射角叉菜21d后更明显，不依赖于应用炎性剂的特点，其组织病理变化与大鼠相似，都有皮下充血、淋巴细胞浸润及肉芽肿的形成。ACⅡ模型主要用于炎**物的筛选等。

虎 克自身免疫性疾病实验动物模型

    Hookelabs是的自身免疫性疾病实验动物模型及其相关产品研发和生产企业，其创始人Suzana Marusic博士曾在惠氏制药长期担任炎性靶点验证实验室的主管，负责哮喘和自身免疫性疾病的研究，研发制备出高度相似性的哮喘和实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型，并以此验证了多个药物靶点。Suzana Marusic凭借其多年来在T细胞分离培养、细胞免疫、外周耐受机制及免疫相关疾病和肿瘤研究的丰富经验，创立了虎克实验动物模型公司，致力于为科研和药物研发提供的自身免疫性实验动物模型建立试剂盒，以及相关的实验动物组织和血清。公司目前的实验动物模型主要包括胶原诱导的关节炎模型、实验性自身免疫性脑脊髓炎模型、系统红斑狼疮、炎性肠病等模型的制备试剂盒，以及多种免疫状态下动物组织和血清样本。虎克实验动物模型提供的模型制备试剂盒以预充免疫原的注射器为主，操作简单，结果可靠，可重复性高。

上海起发实验试剂有限公司专业从事生命科学研究领域产品代理及部分生物产品自主研发，以为科研人员提供高品质科研产品为己任，是您值得信赖的科研伙伴！
     

一、胶原诱导的类风湿关节炎模型CIA

类风湿关节炎Rheumatoid arthritis (RA)是一种常见的自体免疫性疾病，多见于关节部位，但在心脏结缔组织、血管、肺、眼皮肤及肾脏均有发现。RA发病中女性多余男性（约2：1），其症状包括疼痛、肿胀感和僵硬、粘连、关节面糜烂、骨吸收关节变形甚至失去功能。

虎克实验室在RA实验动物模型的建立上有着丰富的经验，其核心动物模型胶原蛋白诱导的类风湿关节炎模型（CIA）即是常用的类风湿关节炎模型，该模型常用DBA/1小鼠建立，但是也可用B10.R111 小鼠, B10.Q 小鼠及Lewis 大鼠建立。

1、虎克公司提供的CIA模型诱导试剂盒

四种试剂盒区别在使用不同来源的胶原蛋白诱导，斜线后为相应的免疫佐剂。

2、CIA免疫流程

3、CIA模型评价指标

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