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 技术文章
Bioenno 003760说明书
点击次数:92 发布时间:2019-10-14

 

Bioenno Lifesciences Bioenno Tech,LLC的子公司   Bioenno Lifesciences成立于2010年,已在美国加利福尼亚州圣安娜建立了研究,工程和制造工厂。自2011年以来,我们一直在为医学界提供用于神经科学研究的行业领跑的医疗套件,并且一直在积极开发新技术。我们为知名组织的国际客户群提供服务,这些组织包括哈佛医学院,约翰霍普金斯大学,FDA,NIH,伦敦国王学院(英国),科隆大学(德国)和INSERM(法国)。

 

Bioenno 003760说明书

sliceGolgi Kit (Cat#003760)

  • $39800$398.00
  •  

 

 

Bioenno  还提供  sliceGolgi  套件,以及其他  固定剂 套件。该  sliceGolgi 套件的设计上运行的片/段高尔基染色。可以在自由漂浮的部分(厚度为50到400微米)上进行浸渍和染色。附加的  固定  试剂盒使用Bioenno醛来处理其他样品。这些试剂盒已经在大鼠和小鼠的脑部进行了广泛的测试,包括:

  • 使用组织斩波器快速准备新鲜收获的切片,例如急性切片。
  • 器官型切片培养,  例如 培养的海马切片和培养的皮质切片。
  • 注入人工脑脊液(ACSF)的切片 ,已完成电生理记录和给药。
  • 通过灌注或浸没从 用生物烯醛固定剂 (目录号:003780)固定的脑中获得的切片  。可以在室温(室温,15℃– 25℃)下在50〜400微米范围内对固定的大脑进行系统切片,并且可以对这些切片单独进行高尔基染色,单独进行免疫组织化学/免疫细胞化学(ICC)或对高尔基染色和ICC进行组合。
  • 额外的  固定 试剂盒可处理更多样品。Bioenno建议您购买sliceGolgi试剂盒和固定试剂盒。

所述  sliceGolgi套件 可以被施加到视网膜,脊髓,和培养的细胞以染色神经元过程。

所述sliceGolgi套件产生树突和棘(参见图)的两个可靠和高质量的标记。在50至200微米厚的切片中,神经元的浸渍  速度非常快,在某些情况下仅为2-3天。通常,浸渍需要4-7天,具体取决于切片的年龄和厚度。该试剂盒可以在室温下的黑暗区域保存长达12个月。  

高尔基染色和免疫组织化学/免疫细胞化学(ICC)的结合  

Bioenno Tech已成功将sliceGolgi试剂盒与ICC结合使用在同一大脑区域(参见图4-9)。为了进行高尔基染色和ICC的组合,首先对固定部分进行高尔基染色,然后再进行ICC:

(1)组织处理:先用生理盐水对动物进行心脏灌注,然后再用Bioenno Tech开发的  固定剂 (目录号:003780)进行灌注。从颅骨上解剖大脑,并在4ºC下固定1-3天。然后在室温下使用振动切片机或类似类型的切片机/切片机将脑切成50〜100微米的厚度。将切片收集在0.1M PB(pH 7.4)中,并在4ºC下可以在缓冲液中保存长达一周。  

固定部分可单独用于高尔基体染色,单独用于ICC,以及用于高尔基体染色和ICC的组合。

(2)  高尔基染色:  在室温下使用sliceGolgi试剂盒 对自由漂浮的切片进行高尔基染色  。神经元的浸渍可能需要2-5天。

(3)  ICC:  自由漂浮的切片可以接受标准的抗生物素蛋白-生物素复合物(ABC)方法。通过在含有H 2 O 2的 3,3'-二氨基联苯胺(DAB)中孵育切片,可以看到免疫反应产物。

注: 该  sliceGolgi套件 不适用于冷冻组织工作。固定的组织块在切割前无法冷冻。

产品特色

  • 适用于切片/切片的组织(50至400微米厚)
  • 在自由漂浮的部分上进行浸渍和染色
  • 新型醛  固定剂 和增强浸渍溶液
  • 神经元的浸渍很快(2-7天)
  • 结合了高尔基染色和免疫组织化学
  • 经过验证的结果/用户友好
  • 足以容纳多达  1,000个脑部切片 (50-400微米厚,尺寸约为1 x 1.5厘米)
  • 体外实验室使用  
  • 专门的技术支持
  • 12个月保修

产品说明和协议

  • sliceGolgi试剂盒协议
  • 固定试剂盒方案

使用sliceGolgi试剂盒(目录号003760)的可靠结果 

  • 使用sliceGolgi试剂盒的可靠结果 

树突状分支和棘突已被sliceGolgi Kit可靠地浸渍和染色。  

图1 –额叶皮层第II层中浸渍和染色的神经元

所述 sliceGolgi试剂盒 用于浸渍和染色神经元中一日龄12(P12)C57BL小鼠的额皮质。在200微米厚的切片中,神经元的树突棘(箭头)被正确标记。箭头指示丝状伪足状突起,即未成熟的棘。使用20倍物镜拍摄图像。

图2 –新皮质第三层中锥体神经元的树突分支

所述sliceGolgi试剂盒用于浸渍和染色定位于额顶皮质的运动区在20x物镜锥体神经元的树突倾斜和主支路(干)。C57BL鼠标已经有12天了。  

图3 –下丘脑外侧的神经元

所述sliceGolgi试剂盒用于浸渍自由浮动的条件下在100微米厚的切片的神经元。从P12 C57BL小鼠的下丘脑外侧区域取出带有轴突末端的染色神经元(20倍物镜)。在树突分支上发现许多丝状伪足样突起(箭头)。  

图4  –  sliceGolgi Kit与免疫组织化学/免疫细胞化学(ICC)的组合使用

高尔基体染色和ICC的结合可以同时显示树突棘和免疫反应产物。通常,首先对自由浮动部分进行高尔基染色处理,然后再进行ICC处理。为了进行高尔基体染色,通过升主动脉向动物灌注0.9%的盐溶液,然后是新鲜制备的固定剂(目录号:003780,Bioenno Tech)。从颅骨上解剖大脑,后固定1-3天(4ºC)。然后,使用震动刀将大脑切成50-100μm的厚度,并将切片收集到0.1 M PB(pH 7.4)的组织培养孔中。该sliceGolgi套件      (目录号:003760)用于浸渍(2-5天,RT)并对树突(黑色)染色。为了进行ICC,对自由浮动的切片进行标准的抗生物素蛋白-生物素复合物(ABC)方法。通过将切片在含有0.01%H 2 O 2的 0.04%3,3'-二氨基联苯胺(DAB)中孵育8-10分钟,可以看到免疫反应产物。该图像是使用4倍物镜从2个月大的C57小鼠的海马体上拍摄的。

图5  –  在同一大脑切片上进行的高尔基染色和ICC

高尔基体染色和ICC结合:1)向C57小鼠心内灌注盐水,然后用Bioenno开发的醛固定剂 (目录号:003780)进行心脏灌注。2)使用sliceGolgi试剂盒对自由漂浮的切片(50微米)进行高尔基染色。浸渍时间仅在22±1ºC下为2天。3)使用标准抗生物素蛋白-生物素复合物方法处理小白蛋白(PV)的ICC。单克隆小鼠抗PV抗体(1:20,000,MAB1572,Chemicon)的孵育时间为22±1ºC过夜。图像是使用4倍物镜从丘脑拍摄的。   

图6  –  树突状分支和PV免疫反应性神经元

高尔基体染色和ICC在同一大脑切片上进行。使用sliceGolgi Kit在自由漂浮的切片(100 µm)上进行高尔基染色。在22±1ºC下的浸渍时间为3天。图像是从4个月大的C57小鼠的下眼部拍摄的(63倍物镜)。 

图7 –高尔基染色的树突和免疫标记的神经元

所述sliceGolgi试剂盒用于浸渍和染色皮层神经元的树枝状分支在皮层的层III。免疫反应性神经元在同一区域可见。图像是从4个月大的C57小鼠拍摄的(63倍物镜)。  

图8 –高尔基染色的皮质神经元和免疫标记的神经元

所述sliceGolgi试剂盒用于浸渍和染色神经元的树枝状分支在皮质的更深的层。在厚度为100 µm的切片中,神经元的浸渍仅在22±1ºC下进行了2天。免疫反应性神经元在同一区域可见。该图像是使用20倍物镜从2个月大的C57小鼠上拍摄的。  

图9 –  在同一大脑切片上进行的高尔基染色和ICC

该sliceGolgi套件来标记树突分支。顶部面板中以20倍物镜显示的方框区域被放大了(63倍),以突出显示树突棘(箭头)和免疫标记的神经元(箭头)。这些图像是从2个月大的C57BL小鼠的额前额叶皮层(体感区)拍摄的。  

关于SliceGolgi套件的常见问题解答

·       我正在使用sliceGolgi套件。组织可以在固定剂中保存多长时间?

试剂盒或其他固定剂试剂盒(目录号:003780)提供的固定剂会影响神经元的染色。长时间(几天到几周)暴露于固定剂将导致许多轴突被染色,这将阻碍树突棘的标记。

如果给动物灌注固定剂,通常无需固定。如果必须将组织后固定,则将后组织尽可能短地固定。

·        我正在使用sliceGolgi套件。我可以在Bioenno固定剂固定的组织块上进行浸渍吗?

是。可以在组织块或自由漂浮的部分上进行浸渍。如果您打算在组织块上而不是在切片上进行浸渍,请在dH2O中冲洗组织块几个小时(更换dH2O数次)以去除多余的固定剂,然后使用浸渍溶液。

·如何将sliceGolgi试剂盒应用于器官切片培养物中?

从二氧化碳培养箱中取出培养物,在室温下用0.1 M PB冲洗膜(培养物位于膜上)数秒钟(在冷缓冲液中冲洗会导致棘突缩回),并将膜浸入试剂盒提供了固定剂。通常,暴露于固定剂中2-4小时会适合〜350 µm切片。长期固定(例如整夜或几天)可能会增加神经元轴突的标记。

·       如何使用sliceGolgi试剂盒进行高尔基体染色和免疫组化(IHC或ICC)的结合?

固定的部分首先在自由流动的条件下进行高尔基染色,然后再进行ICC。为了使合并的反应成功,请尽可能短地固定组织,并在2到3天内完成神经元的浸渍,因为长期暴露于固定剂和/或浸渍溶液中会阻碍许多抗原的表位。除了进行良好的高尔基染色外,用于ICC的抗生物素蛋白HRP检测系统也应该非常灵敏。Bioenno  DAB-Kit  和  DAB-Co Kit  在以下步骤下可以很好地工作:

1)用生理盐水灌注动物,然后用Bioenno固定剂(试剂盒中提供500毫升;或从固定剂试剂盒,目录003780中)灌注20〜25分钟。从颅骨上解剖大脑,然后将其储存在0.1M PB(pH 7.4)中,然后在室温(〜22ºC)下进行振动刀切片(〜50微米)。可以在0.1M PB(pH 7.4)中收集切片。 如果灌注不好,将组织后固定1〜3小时。

2)在室温下使用sliceGolgi试剂盒对自由浮动的切片进行高尔基染色。在2到3天内完成浸渍。将切片在0.01 M PBS-T中短暂洗涤,然后染色(2〜4分钟)和后染色(〜1分钟)。 如果需要5到7天的神经元浸渍,接下来的ICC将非常困难。

3)用PBS-T清洗切片数分钟,然后用H2O2(将30 µl原来的30%H2O2倒入10 ml PBS-T中)20分钟,然后用PBS-T清洗。

4)进行标准ICC:将切片在一抗体中孵育过夜,在PBS-T中洗涤10〜15分钟,然后用生物素偶联的第二抗体和抗生物素蛋白-生物素复合物洗涤。免疫反应产物可通过在含有H2O2的DAB或DAB钴(例如Bioenno DAB或DAB-Co Kit)中孵育切片来观察。

如果使用生物素标记的一抗体,则可以忽略上述生物素偶联的第二抗体。 

5)安装,风干,照常清理部分。具有Permount®安装介质的盖玻片。

SliceGolgi套件引用的一些出版物 

  • 跑步诱导的记忆增强与老C57BL / 6小鼠海马区CA1细棘的保存有关 
    徐本科,孙安邦,何云,冯谦,刘连,陈云才,罗焕敏(2017),  衰老神经生物学,52,106-116
     
  • 神经性限制性沉默因子
    Katelin P Patterson,Jeremy M Barry,Megan M Curran,Akanksha Singh-Taylor,Gary Brennan,Neggy Rismanchi,Matias Page,Yoav Noam,Gregory 的神经元限制性沉默因子的功能和结构效应介导了发育性高热惊厥引起的持久性记忆障碍 L Holmes和Tallie Z Baram(2017),  神经科学杂志3748-16
     
  • 急性同时应激后多种应激激素的收敛协同作用介导了持久的记忆障碍
    。YuncaiChen,Jenny Molet,Julie C.Lauterborn,Brian H.Trieu,Jessica L.Bolton,Katelin P.Patterson,Christine M.Gall,Gary Lynchand Tallie Z.Baram(2016),   神经科学杂志。 36(44),11295-11307
     
  • NRP1在小脑的轴突引导和亚细胞靶标识别中的双重功能
    Ludovic Telley,Christelle Cadilhac,Jean-Michel Cioni,Alexandre Dayer,Andrea B.Huber,Fabrice Ango(2016),  Neuron, 91(6),1-16
     
  • FOXP2由相对MEF2C控制皮质电路和声音通讯突触接线
    易传陈,萧颖郭乌尔里希Bornschein,高桥弘,师陈芸,关明吕,郝宇阳,桂月陈婧-林瑞,李益新,周云嘉,成信中,钱成廷,沃尔夫冈·埃纳德,沃夫·海弗,斯万特·派博,安·米·格雷比尔和刘富钦(2016)。 自然神经科学, 19,1513–1522
     
  • 靶向促肾上腺皮质激素释放激素表达神经元的转基因小鼠品系中记者表达模式的多样性。 
    陈云才,珍妮·莫莱,本杰明·冈恩,凯里·雷斯勒,塔莉·巴拉姆(2015)。 内分泌学,  156(12),4769-4780
     
  • CB 1受体在中性多刺神经元上的遗传拯救可防止兴奋性纹状体突触的丧失,但不能预防HD小鼠的运动障碍。
    Naydenov,AV,Sepers,MD,Swinney,K.,Raymond,LA,Palmiter,RD,&Stella,N.(2014年)。 疾病的神经生物学,  71,  140-150
     

 

脑组织,树突,树突棘,GFP, gfp, 高尔基 考克斯, 高尔基氏 浸渍, 高尔基氏 染色, 高尔基氏 方法,浸渍,快速 高尔基氏,脊柱,染色,超级 高尔基氏, 超高尔基氏,突触

 

 

 

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