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biochain Z7030031用户手册和说明
点击次数:57 发布时间:2019-10-31

 

 

biochain Z7030031用户手册和说明

小鼠内皮祖细胞体外生长

产品编号:Z7030031

介绍

内皮祖细胞(epc)是内皮细胞系中的一种原始细胞类型。它们是骨髓来源的细胞,具有类似于胚胎血管母细胞的特性。这些祖细胞迁移到血液中,能够分化成各种成熟的血管内皮细胞类型。

epc在血管生成和血管生成中起着重要作用。最近的证据表明

epc在肿瘤生长和转移中的作用。epc数目的改变与淋巴瘤、多发性骨髓瘤、lewis肺癌和肝细胞癌(hcc)有关。在各种疾病的发病机制中,包括冠状动脉疾病(cad)、缺血、肺动脉高压、脑血管疾病、急性心肌梗死、糖尿病、关节炎和伤口愈合中,epc的数量和功能也发生了变化。此外,epc对衰老和吸烟相关疾病有影响,提示epc在这些领域有潜在的应用。

 

 

epoc的规范与表征

从7-8周龄c57/bl6小鼠骨髓中分离出生物链小鼠内皮生长细胞(mepoc),并进行体外培养。我们的mepoc产品在第9-10次传代时作为冷冻保存或增殖细胞交付。该细胞被认为是晚期epc,因为它是cd 133-。每个冷冻瓶在1毫升冷冻培养基中含有大于5 x 10 5细胞。我们的mepocs具有与内皮祖细胞相同的纺锤状形态。

保管部

对于冷冻保存的细胞,在接收时立即将细胞从干冰转移到液氮中,并将细胞保存在液氮中,直到需要进行细胞培养进行实验。

航运

冷冻保存的细胞在干冰上运输;增殖细胞在室温下运输。

epoc培养说明

一、MEPOC生长培养基的制备

我们推荐使用Biochain的MEPOC生长培养基(CAT Z7030033)培养我们的MEPC。

一。在室温水浴中解冻MEPOC生长介质补充剂(CAT Z7030034)。

2.在Mepoc基本培养基(CAT Z7030035)的瓶子(500 ml)中加入整个体积(25 ml)的EPOC生长培养基补充剂,制备Mepoc生长培养基。生物链的mepoc生长培养基不含抗生素,但如果担心污染,可以在培养基中添加抗生素。

三。使用前,在37°C水浴中加热部分mepoc生长介质。

二。解冻冷冻细胞

一。在37°C水浴中加热EPOC生长培养基。

2.用70%乙醇擦拭冰冻小瓶的外部。在37°C的水浴中快速解冻冷冻细胞。

三。将细胞悬液无菌转移到15ml试管中。用1毫升生长培养基冲洗小瓶,并在15毫升试管中与细胞混合。以170克(或1400转/分)的速度离心5分钟,使细胞沉淀。除去上清液。加入5ml新鲜小鼠epc培养基,置于t25烧瓶中。

四。在37℃下,用5%的二氧化碳和95%的空气在加湿培养箱中培养细胞。每隔一天换一次。健康的培养物显示纺锤体形态,培养2-3天后细胞数量应加倍。

 

三、亚培养细胞

一。当细胞达到100%汇合时进行继代培养。

2.在通过细胞前一天更换培养基。

三。在37°C水浴中加热Dulbecco的PBS、0.05%胰蛋白酶/EDTA和MEPOC生长培养基。

四。用Dulbecco的PBS冲洗细胞。

5个。用胰蛋白酶/EDTA溶液(1.5毫升/25平方厘米)培养细胞3-5分钟,直到大约90%的细胞开始分离。轻轻地填充血管使细胞分离。

6.加入相当于胰蛋白酶/EDTA体积1/10的胎牛血清中和胰蛋白酶,轻轻摇动培养管混合。

7号。轻轻地重新悬浮细胞,并将细胞转移到15ml锥形管中。

8个。在室温下将细胞悬液在170 x g下离心5分钟。

9号。小心地去除上清液,不要干扰细胞颗粒。在生长培养基中重新悬浮细胞。

10个。将它们按1:5的比例放入新的培养皿中。

11号。在37℃下,用5%的二氧化碳和95%的空气在加湿培养箱中培养细胞。每隔一天换一次。

iv.在充满mepoc生长培养基的t25、t75、t125和t225烧瓶中提供增殖性epoc增殖性epoc。

当烧瓶到达时:

一。从烧瓶中倒出大部分培养基,并在烧瓶中留适量。

2.在37℃下,用5%的二氧化碳和95%的空气在加湿培养箱中培养细胞。第二天换成中号,以后每隔一天换一次。健康的培养基在培养2-3天后,纺锤形细胞形态和细胞数量应加倍。

 

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References

1. Asahara T, Murohara T, Sullivan A, Silver M, van der Zee R, Li T, Witzenbichler B, Schatteman G and Isner JM (1997). Isolation of putative progenitor endothelial cells for angiogenesis. Science. 275:964-967.

2. Gupta M (2007). Circulating endothelial cells and circulating endothelial cell progenitors as surrogate markers for determining response to antiangiogenic agents. Clin Colorectal Cancer 6(5):337-338.

3. Gao D, Nolan DJ, Mellick AS, Bambino K, McDonnell K, Mittal V. Endothelial progenitor cells control the angiogenic switch in mouse lung metastasis. Science. 2008 Jan 11; 319(5860):195-8.

 

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