线性PEI MAX 40K转染说明书

线性PEI MAX 40K转染说明书

化学名：线性聚乙烯亚胺，线性PEI，聚乙烯亚胺，线性，MW 40000，转染级  

线性聚乙烯亚胺 分子量40000

订货号＃： 78PEI40000   规格：100mg 500mg  5g

品牌：BIOHUB                     CAS＃： 49553-93-7

分子量： 40,000（~22,000自由基）

溶于：水           不溶于：常用有机溶剂（乙醇，丙酮，四氢呋口南）   

外观：白色至灰白色自由流动的固体  

处理：手套和通风橱             储存：在室温下避光干燥储存

PEI MAX 40K（在游离碱中也称为PEI 22K）是一种功能强大，值得信赖且经济实惠的瞬时转染试剂。在HEK293和CHO大多数表达系统中，PEI MAX都能提供稳定的高表达（96孔板至100L生物反应器）。现在每年有更多的研究人员和公司来使用PEI MAX进行细胞转染，因为相对于大多数转染试剂而言 PEI MAX既能等到稳定的高表达又能使转染成本降低少40%。

PEI MAX 比更PEI 25K易于使用，并且比PEI 25K有更高的转染效率，通常PEI 25K转染过程通常需要几个小时才能完成准备，而PEI MAX 40K可在两小时内完成整个转染过程。另外，PEI 25K含有4-11％的残留丙酰基，这可能阻碍聚合物主链与DNA的有效结合，而PEI MAX 40K的丙酰基*脱落，意味着PEI MAX每批产品的性能更加稳定。

PEI 25K（KE1075）和PEI MAX 40K（KE1098）的比较

配置：1：称取100mg PEI MAX，加新鲜的细胞级别的水90ml，搅拌溶解。

2：调整pH值至7.0 ，定容至100ml，用0.22um的滤器过滤，分装后储存于4℃，保质期可以达到12个月。

转染操作流程：

◆ 瞬时转染方法

1. 接种细胞： 转染前一天，用胶原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数（不建议用胰酶）。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到 70~80%。

2. 准备 DNA-PEI 复合物： DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 1.5-5 μL 线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液 的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如 NEST  5 mL /14 mL 离心管。

3. 转染细胞： 直接向每个孔中加入 DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物。转染 1.5 h 后，添加½体积的包含 30%血清的生长培养基。

4. 孵育细胞和分析结果： 在 CO2培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后 5 h 即可检测到转入基因的表达。 请自行确定适合检测时间。

◆ 稳定转染方法

1. 接种细胞： 转染前一天，用胶原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数（不建议用胰酶）。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到 70~80%。

2. 准备 DNA-PEI 复合物： DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表 1 所示，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 1.5-5 μL 线性PEI转染试剂(这个需要客户自行摸索配比，每一批转染试剂和每一批DNA比例可能会稍有不同）。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如 NEST  5 mL /14 mL 离心管。

3. 转染细胞： 直接向每个孔中加入 DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物。转染 1.5 h 后，添加½体积的包含 30%血清的生长培养基。

4. 孵育细胞和分析结果： 在 CO2培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后5h 即可检测到转入基因的表达。

5. 转染 24 h 后，将细胞传代至新鲜的生长培养基中（将细胞稀释 10 倍 以上），在 CO2培养箱中 37℃孵育过夜。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约 1~2 周可 筛选到耐药性克隆，在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。 „

特别提醒

1. 对于某些类型的细胞如 HEK-293、HEK293T、NIH/3T3 和 COS 细胞，在转染前两天铺板可显著 提高转入基因的表达水平。如果选择转染前两天铺板，可适当降低铺板密度，以确保转染时细胞的汇合度仍为 70~80%。

2. 对于接触抑制敏感的细胞，可适当降低铺板密度。

3. 即使在有蛋白（如 10%的血清）存在的情况下，DNA-PEI复合物仍能转染细胞，但是 DNA-PEI复合物必须在无蛋白存在的条件下形成。我们推荐使用 Opti-MEM ITM 培养基以达到宜转染效率。其他的无蛋白培养基则需测试与线性PEI转染试剂的兼容性。

4. 对大多数细胞来而言，每 1 μg DNA 使用 3.0 μL PEI MAX转染试剂都能获得较高转染效率。使用 者也可尝试每 1 μg DNA 使用 1.5~4 μL 体积线性PEI MAX转染试剂进行优化。

    5.本手册只是一个基本操作手册，具体转染过程中需要根据实验进行优化，优化方向为混合时间，转染时间，DNA混合比列
    6.PEI MAX(MW 40,000) 为Polysciences公司生产的化合物产品，每批产品出厂前都经过严格的检测,保证每批产品都*、稳定且高品质,但由于作为转染试剂使用过程中有很多实验室因素(配置方法，PH,水纯度,称量的准度,dna RNA纯度,细胞状态，细胞品系…)造成溶解出现问题或者转染效率出现差异,所以厂家只受理该产品纯度，分子量及重量缺失破损等相关投诉，针对极个别客户溶解问题和转染效率问题我们只能友善解决,所以不能保证您能获得满意答复，对于产品产品转染效率不高，转染批间有差异，转染不了等问题，不作为评价我们售后工作的依据。如果我们提供的PEI手册都无法解答您的问题,建议您可以多看文献,多调整一下转染条件,找出适合自己细胞的转染方法。如果无暇摸索条件,您也可以直接购买我们配置好细胞转染液,这样免去您很多烦恼,谢谢理解

转染试剂和DNA配比数据

转染效率