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medicago 10-0027说明书
点击次数:175 发布时间:2020-01-09

 

medicago 10-0027说明书

Protein L Ligand Leakage ELISA kit

蛋白L配体渗漏ELIS A试剂盒

Product no 10-0027 Standard kit

10-0028 XL kit containing extra Protein L Reference

使用前阅读:·本说明书推荐的样品制备方法(即。热处理)已成功地应用于一些目标分子,包括MAB和Fab。一些法布斯可能,怎么 永远,需要额外的优化。对sdAb分子进行热处理的初步实验尚未成功。

蛋白L参考品送冻,应保冻..

 

 

Table of content

Table of content.......................................................................................................................... 2

Background and intended use .................................................................................................... 2

Warnings and precautions.......................................................................................................... 3

Storage and stability ................................................................................................................... 3

Kit contents ................................................................................................................................ 3

Materials required but not supplied............................................................................................ 3

Sample preparation..................................................................................................................... 4

Reagent preparation.................................................................................................................... 6

Test procedure ............................................................................................................................ 7

Analysis of results...................................................................................................................... 8

Performance ............................................................................................................................... 8

Contact information.................................................................................................................... 8

 

 

 

 

背景和预期用途

 

蛋白质L配体泄漏ELISA试剂盒是一种定量的酶联免疫吸附试验。这种ELISA-试剂盒的目的是检测和量化从蛋白质L亲和力的洗脱液中的配体泄漏 含有免疫球蛋白(Ig)或Ig-碎片的色谱培养基。

 

蛋白质L配体泄漏ELIS A试剂盒有两个版本-标准试剂盒(10-0027)和XL试剂盒(10-0028)。XL试剂盒中含有五小瓶的蛋白质L参考,而不是一小瓶。 用于工艺适应目的。

 

蛋白质L最初是从大肠杆菌中分离出来的,并在色谱培养基中作为配体捕获Ig和Ig片段。蛋白质L与变量reg结合 抗体的kappa轻链离子,不干扰抗原结合位点。这使得蛋白L能够比其他抗体结合Pr结合更广泛的Ig类和亚类 奥廷斯。此外,蛋白L还结合抗体片段,如Fabs,单链可变片段和结构域抗体,其中含有kappa轻链。

 

蛋白L配体漏ELISA是一种夹心ELISA,在12条的模块中有96个微滴度井,包覆了一种亲和纯化的抗蛋白L抗体。一个样本中的蛋白质L的量 用标准曲线测定E,用蛋白质L提取参考样品。

 

为了将Ig或Ig碎片从蛋白L中分离出来,需要进行样品制备。对于mAbs和Fabs,样品是通过煮沸和离心制备的,然后再在条带中孵育。 埃尔斯。

请注意,对于像sdAb这样的小Ig碎片,这个样品制备程序不起作用..需要对sdAb的样品制备进行额外的优化。

需要稀释参考样品中的参考标准曲线(来自试剂盒中提供的蛋白质L参考)。参考样品应由不同的净化方法分离出来 请参阅下面样品准备部分的更多信息。如果样品不包含任何Ig或Ig碎片,则不需要煮沸样品。它们可以直接用于检测。

警告和注意事项1。在开始检测之前,仔细阅读说明书。使用与试剂盒一起提供的说明书的有效版本..2.不要从不同的工具包b中混合组件 阿切斯。3.遵循良好的实验室实践和当地安全准则。4.底物溶液(EC-蓝色增强液)对眼睛、呼吸道和皮肤有刺激性..停止溶液是一种酸w 希奇会引起灼伤。小心处理。5.不要用嘴吸管。6.不要使用超过到期日期的试剂盒组件。

 

储存和稳定性·将试剂盒组件存放在4oC。将蛋白质L参考品存放在-20oC或-80oC。稳定12个月

 

Kit contents

Component Quantity Handling

Anti-Protein L coated

microtiter plate

1 plate

96 wells

12 × 8-well strips

Ready to use. Let the plate reach room temperature

before opening the bag. If only part of the plate is used,

store unused strips in a sealed bag at +4ºC.

HRP-conjugated anti-Protein

L pAb

1 × 130 µl Dilute 100x in PBS-Tween. Store protected from light.

Protein L reference (600

ng/ml)

1 × 200 µl in 10-0027

5 × 200 µl in 10-0028

Dilute in your reference dilution buffer (see below).

Store working aliquots at -20/-80ºC.

Avoid repeated freezing/thawing

EC-Blue Enhanced™ 1 × 13 ml TMB substrate, ready to use. Store protected from light.

Let the substrate reach room temperature before use.

Stop solution 1 × 7 ml Ready to use.

PBS-Tween tablet 1 × 6 tablets Dissolve 1 tablet in 500 ml ultra-pure water

Plate sealing tape 1 Remove tape cover, seal the plate during incubations.

 

所需材料但未提供

1。微吸管和吸管尖端,范围10-1000μl

2。玻璃、管子和机架

3。超纯水

4..参考样品(见样品制备)

5..水浴

6特克斯混合器

7离心机

8洗瓶或自动微滴板垫圈

9..微滴度平板阅读器在450n m处读取吸光度

 

 

参考样品(不含蛋白L的Ig/Ig-碎片样品)

由于不同的目标分子,在不同的浓度下,可能对测定性能有不同的影响,因此需要稀释t。 蛋白质L参考品(在试剂盒中提供)在参考样品中。参考样品应在等效缓冲液中以与试验样品相同的浓度含有相同的Ig或Ig碎片 要进行分析(即。从蛋白质L亲和层析介质中洗脱样品)。重要的是,参考样品的ig或igfragments应使用另一种p来制备 强化战略(即。不涉及蛋白质L亲和层析培养基,例如合适的离子交换柱)。参考样品和储存在适当的条件下,例如。- 用于几种不同的蛋白质LELISA测定。如果您的测试样本不包含任何Ig或Ig-碎片,请使用您的测试样本缓冲区作为参考样本。

 

如果需要,将参考样品的pH值调整到7.4。在PBS-Tween中稀释参考样品至少1:2,以与样品中的浓度相匹配。·使用这个解决方案(参考文献dilu) 缓冲液),以稀释试剂盒中提供的蛋白质L参考,以获得标准曲线(见下文)

 

测试样品-pH和稀释·

调整所有样品的pH值到大约7.4。

在PBS-Tween中稀释所有样品至少1:2。确保所有样品中含有等量的目标分子(Ig/) IgG-碎片),与参考稀释缓冲液中的浓度相同(见上文)。

·对于一些含有Ig-碎片的样品,可通过调整最终浓度来改进测定结果 吐温20%~0.05%。

需要通过煮沸和离心进一步制备含有Ig或Ig碎片的样品(见下文)。没有IgG或IgG碎片的样品可以直接使用。 e化验。

 

标准曲线样品·

蛋白质L参考品应稀释1:10,以达到标准曲线的高点(60ng/ml)。在参考稀释缓冲液中稀释蛋白质L参考。Th 在1:2的步骤中进行连续稀释。参见下表中的示例。旋涡每个样品,并更换吸管尖,然后再进行下一次稀释。

Standard (std) 60 ng/ml Add 60 µl Protein L reference to 540 µl Reference dilution buffer 30 ng/ml Add 300 µl std 60 to 300 µl Ref. dilution buffer 15 ng/ml Add 300 µl std 30 to 300 µl Ref. dilution buffer 7.5 ng/ml Add 300 µl std 15 to 300 µl Ref. dilution buffer 3.75 ng/ml Add 300 µl std 7.5 to 300 µl Ref. dilution buffer 1.88 ng/ml Add 300 µl std 3.75 to 300 µl Ref. dilution buffer 0 ng/ml 300µl Reference dilution buffer

如果需要,标准曲线可以以同样的方式进一步稀释(低于1.88ng/ml)。

 

注意:确保总是以与测试样本相同的方式对待您的标准曲线样本。如果你的测试样品含有Ig或Ig-碎片,需要煮沸作为样品准备,你的参考。 标准曲线样品也应在相同的条件下煮沸。

 

空白样品

PBS-Tween可作为空白样品..另一种选择是使用与测试示例相同的缓冲区。在这种情况下,处理空白样品的方式与您的测试样品相同(调整pH) ,用PBS-Tween稀释,煮沸)。

煮样本

这一步是必要的,只有当你的样本包含Ig或Ig-碎片..没有Ig或Ig-碎片的样品可直接用于测定..

 

煮沸试验样品、空白样品和参考标准曲线样品。使用带螺旋帽的管子。

如果使用加热块,不要使用小瓶与裙子。含镁样品应煮沸1次 5分钟。含有Ig-碎片的样品应煮沸1小时..

离心样品2分钟。

在将样品加入盘子之前,在不打乱颗粒的情况下,仔细混合样品。

注:样品制备方案可以通过改变煮沸时间和稀释度来优化不同的Ig-碎片。一般来说,较小的目标分子需要较长的沸腾时间。

试剂制备·微滴度条准备使用。

·1PBS-Tween片应溶于500毫升超纯水中。

所需PBS-Tween的数量取决于洗涤过程。 再来一次。确保为所使用的程序准备足够的PBS-Tween。应在PBS-Tween中稀释HR P共轭抗蛋白LpAb。使用前不久稀释。

EC-Blue增强TMB底层 已经准备好使用了。

停止解决方案已准备好使用。

检查法,检验法,试验过程

使用前让所有试剂达到室温.

.1.准备参考标准品和试验样品(pH-调节,稀释,煮沸和离心)..仔细混合样品,无需再悬浮 在把它们添加到井中之前,先把球团磨碎。建议运行所有样品一式两份(见下面建议的板块布局)..

2.添加100μl/井的参考标准,空白样本,和Pr 分离测试样本。

3.封板,室温孵育2小时..

4.将盘子倒空,用350μl PBS-Tween/井用ELIS A板垫圈清洗3次,或用灌注井的方法清洗3次 用洗好的瓶子到顶部。将平板倒置在吸水纸上,使其在洗涤后完全清空。

5.在每口井底部加入100μl稀释的结合抗体。小心 不要用抗体溶液污染井壁。

6.封板,室温孵育2小时..

7.清空盘子,用350μl PBS-Tween/wel洗6次 我使用ELIS A板垫圈,或者用一个清洗瓶把井填到顶部。将平板倒置在吸水纸上,使其在洗涤后完全清空。

8.添加100μl EC-Blue E 每口井都有Nhanced(TMB底物溶液)。加入基板后仔细敲击板。

9.在室温下孵育10分钟。让盘子远离阳光直射 在孵化过程中。

 

10.在每口井中加入50μl的停止溶液。保持所有样品加入底物和停止溶液之间的相同时间间隔。在加入停止溶液后,小心地敲击板。 一定要混合底物和停止溶液。

11.在450n m处的光密度的光度测量应在15分钟内进行。

 

结果分析

蛋白质L浓度·计算空白样品

测试样品和参考标准曲线的A450平均值。

·以减数校正背景 空白样品的平均吸光度值。在x轴(对数标度)和A450上绘制蛋白质L浓度(ng/ml)从参考标准曲线中获得的值。 y轴。

如果使用计算机曲线拟合,最宜使用四参数或五参数Logistic方程.

.通过findi从图表中获取样品中的蛋白质L浓度(ng/ml) 相应的蛋白质L浓度在你的x轴上,从你的样本值A450在y轴上。

记住调整样品稀释度,以获得你的ORI中的浓度。 原始样本。

 

性能.对于不含Ig或Ig-碎片的样品,试剂盒的测量范围至少为0.5-60ng/ml的蛋白L..对于含有Ig的样品,检测的灵敏度可能降低 或者ig-碎片。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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