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 技术文章
TriAltus Bioscience CRISPR蛋白
点击次数:174 发布时间:2020-01-14

Trialtus Bioscience,LLC(www.trialtusbioscience。。com)为生命科学家提供了用于生产和纯化基因工程蛋白的工具。我们新颖的亲和标签系统只需一步即可提供超高纯度和高产量的蛋白质。CL-7亲和标签蛋白纯化系统已获得阿拉巴马大学伯明翰分校(UAB)的TriAltus Bioscience的许可,现已可商购。

活化的Im7树脂包含高度特异性的弹性Im7结构域,该结构域与融合到目标蛋白的CL7标签(约16 kDa)结合。用适当的蛋白酶切割后,靶蛋白从与Im7结合的CL7中释放。1、2、5和15毫升体积的沉降树脂(50%悬浮液)可用。

 

TriAltus的ImM7活化树脂最多可进行100次活化,在重复使用过程中保持1:1的摩尔结合比。Im7活化树脂已用于纯化多种蛋白质-包括膜和多亚基蛋白质。

简便性–在单个纯化步骤中,此方案可产生具有高产量,高纯度和高活性水平的纯化蛋白。

可重用性-该IM7树脂是可重复使用,在容量没有可观察到的损失。

弹性- 该IM7树脂保留了1:在各种条件下,包括各种盐和去污剂浓度多个再活化后1摩尔的结合比。

规格书

颗粒大小| 交联的garose 6B 珠(45 - 165 μM )

PH值稳定性| Im7蛋白在pH 3-10的珠子上稳定。但是,CL7 / Im7结合仅在pH 4.2 – 10时稳定。

盐稳定性| ≤ 4M NaCl的测试

装订容量| 35-40 mg CL7 / mL 树脂

储存/运输浓度| 50/50缓冲液/树脂浆料。在2、4、10和30毫升浆液中分别加入1、2、5和15毫升的沉降树脂。

推荐工作温度| 4°C 或室温

活化细节| 要除去CL7蛋白并重新活化树脂,请用Gdn-HCl洗涤色谱柱,将其交换为生理缓冲液。

附加信息:靶蛋白特性(例如蛋白大小,构象和浓度);流速(即较低的流速可能会增加结合能力);其他参数(例如pH和温度)会影响色谱柱的结合能力。

中国科学家使用TriAltus Bioscience的CL-7纯化系统纯化CRISPR相关蛋白

阿拉巴马州伯明翰(2018年8月29日)— TriAltus Bioscience,LLC今天宣布,中国湖北大学的科学家只需一步即可成功地从大肠杆菌中共表达和纯化了核糖核蛋白复合物,包括Cas9和Cas12a CRISPR相关蛋白。使用该公司许可的CL-7净化技术。湖北科学家于7月下旬发表了他们的工作结果。

TriAltus Bioscience执行官兼联合创始人Bob Shufflebarger说:“该团队在CRISPR蛋白方面的成功独立验证了我们的CL-7纯化系统,可以有效地纯化用于治疗研究的一些最重要的蛋白。” “我们相信这项技术将加强科学研究,解决使用基因工程蛋白质的一些挑战,并最终帮助降低与生物制药生产相关的行业成本。”

湖北省科学家在论文中写道:“通过利用超高亲和力CL7 / Im7纯化系统,我们在体内和体外实现了具有深层核酸酶活性的纯Cas RNP的一步纯化,表明该方法具有很高的实用价值。具有大规模,低成本,短时间制备CRISPR相关核酸酶的潜力。”

该论文还指出:“ [此方法简便,经济高效,可用于制备其他CRISPR相关核酸酶。”

CRISPR-簇状规则间隔的短回文重复序列的首字母缩写-是一种基因编辑工具,可有效且特异性地改变生物体内的基因。CRISPR相关(Cas)蛋白(例如Cas9和Cas12a)是CRISPR系统的必需组件,研究人员正越来越多地使用它们来寻找治疗癌症,HIV和镰状细胞病等疾病的潜在方法。

TriAltus Bioscience联合创始人,UAB的生物化学和分子生物学教授Dmitry Vassylyev博士领导了发明CL-7技术的团队。瓦西里耶夫(Vassylyev)在五个臭名昭著的具有挑战性的生物分子上测试了该方法,结果卓著。该研究成果于2017年发表在《美国国家科学院院刊》(PNAS)上。

 

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