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 技术文章
bellbrooklabs Transcreener® HTS Assays
点击次数:42 发布时间:2020-04-23

 

 

bellbrooklabs Transcreener® HTS Assays

使用核苷酸的直接检测和均一的荧光读数对酶进行通用的高通量筛选测定。

TRANSCREENER ADP 2分析

激酶测定

ATP酶测定

TRANSCREENER AMP 2 / GMP 2分析

磷酸二酯酶测定

连接酶和合成酶检测

糖基转移酶测定

甲基转移酶测定

交易者GDP检测

GTPase检测

GAP检测

GEF分析

糖基转移酶测定

TRANSCREENER UDP 2分析

糖基转移酶测定

传送者 CGAMP检测

cGAS分析

TRANSCREENER ADO CD73分析

CD73检测

成千上万个目标的分析。

  • Transcreener检测依赖于核苷酸的直接免疫检测,与复杂的酶联检测方案相比,它不易受到干扰的影响。
  • 四种类型的Transcreener核苷酸检测测定法使您可以更快,更高效地筛查数千种目标酶。
  • 您可以选择FP,FI和TR-FRET读数;所有产品均带有深红色荧光,并在主要的多模式阅读器上具有经过认证的性能。
  • 均质,混合和读取格式可用于终点分析或连续监测酶活性。
  • 过夜的试剂和信号稳定性意味着可以在大型自动化屏幕中获得可靠,可靠的筛选数据。

Transcreener:工作原理

Transcreener是一种通用的测定方法,可用于整个核苷酸依赖性酶家族。无需对大量特定的反应产物(例如磷酸化的蛋白质或脂质)使用单独的测定法,而是可以将单核苷酸检测测定法用于产生共同核苷酸产物的所有酶。例如,ADP检测可用作任何蛋白质,脂质或碳水化合物激酶的通用激酶测定方法。

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Transcreener分析法依靠使用能够基于单个磷酸基团区分核苷酸的抗体直接,高度特异性地检测核苷酸。产物核苷酸相对于底物的选择性(例如,激酶测定的ADP相对于ATP的选择性)为150倍至1000倍以上。这种精湛的选择性允许在底物核苷酸过量的情况下检测核苷酸酶产物(例如,在激酶测定中存在过量ATP的情况下进行ADP检测),这是测量酶初始速度的必要条件。

为了产生信号,Transcreener分析使用均质的竞争性免疫分析形式,其中抗体与高亲和力荧光示踪剂配对。示踪剂被检测到的核苷酸置换会导致其荧光性质发生变化。FP分析是简单的方法。它只需要示踪剂和未修饰的抗体;极化的变化是由示踪剂移动时增加的旋转迁移率引起的。对于TR-FRET和FI格式,抗体与分子结合,该分子在结合时会改变示踪荧光的强度,而在置换示踪剂时会失去这种效果。

Transcreener:为什么直接检测对HTS更好

与任何其他核苷酸检测分析法相比,转导分子测定法试剂更少,机制也更简单,后者通常需要偶联酶才能将核苷酸转化为可以通过报告酶产生信号的产物。每种偶联和报告酶都是被筛选化合物的潜在靶标,这会增加假阳性或缺失命中的风险,并需要额外的孔来进行反筛选。(某些ADP检测方法甚至使用激酶作为偶联酶,这进一步使它们在激酶抑制剂筛选中的使用变得复杂。)

混合阅读简单

直接检测还意味着该方案是简单,灵活的方案:运行您的酶反应,在停止混合的情况下添加Transcreener试剂,并读取板。或者可以在酶反应开始时添加Transcreener检测试剂,以连续监测酶活性。例如,通过“跳跃稀释”激酶测定法测量抑制剂的停留时间。一些耦合方法需要额外的液体添加和温育步骤,这会使化验自动化变得复杂,并使其无法以连续模式运行。

用生化分析方法测量药物靶标停留时间的指南

用生化分析方法测量药物靶标停留时间的指南

 

出色的试剂稳定性-简化筛选

所有Transcreener抗体和示踪剂以及测定信号在室温下至少稳定8小时。这样可确保即使在大型的自动屏幕中,数据质量也不会受到影响,因为在这种情况下,检测混合物可能会在室温下长时间存放在分配台中。由于偶联酶的不稳定性,其他核苷酸检测测定法具有更严格的解冻后储存要求。此外,与某些耦合酶测定法产生的瞬态信号不同,Transcreener荧光信号至少会持续一整夜-持续数天-因此,在添加检测试剂后很长时间即可读取板。出色的试剂和信号稳定性使Transcreener分析非常可靠,易于在自动化HTS环境中使用。

Transcreener:您可以用它做什么

成千上万的细胞反应使用核苷酸,包括大多数催化蛋白质翻译后修饰(例如磷酸化和甲基化)的酶。由于它们在信号转导中的核心作用,许多PTM酶已成为药物靶标。尽管蛋白激酶受到广泛的关注,但是乙酰基转移酶,甲基转移酶和糖基转移酶也是经过临床验证的靶标,并且还有更多与PTM相关的药物正在研发中。开发了Transcreener检测试剂盒,以使HTS能够靶向PTM酶以及其他类型的核苷酸依赖性酶,包括ATPase,GTPases和磷酸二酯酶。

Transcreener Assays已开发并不断改进,可用于工业HTS环境。自2006年推出以来,它们已在全球使用的所有主要多模式读板器中,在96,384或1536孔板上的超过6,000万孔抑制剂筛选,分析和机理研究中使用。在激酶测定中使用ADP检测占了这些孔的一半以上,这些用户中的大多数在将Transcreener与其他测定方法进行比较后决定使用Transcreener。对于许多非典型目标-糖基转移酶,解旋酶,羧化酶,GTP酶,连接酶,仅举几例-没有很好的选择,并且Transcreener确实是一项真正的使能技术。没有它,屏幕可能不会前进。

无论目标是什么,在底物转化率的整个范围内,底物转化率均小于10%(通常低得多)时,所有Transcreener分析均会产生大于0.7的Z'值。它们在很大程度上不受酶测定中使用的大多数试剂的影响,并且信号至少在一夜之间是坚如磐石的。我们已经与主要的多模式仪器供应商合作,包括Tecan,BMG,Biotek和Molecular Devices,以优化仪器的硬件和软件设置,以利用每种Transcreener Assays实现佳性能。每种Transcreener分析的技术手册中都总结了佳的过滤器设置和仪器设置,更多的详细信息请参见应用手册。这样可以确保无论您喜欢哪种荧光检测模式或阅读器,

 

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