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 技术文章
bellbrooklabs AptaFluor® HTS Assays
点击次数:20 发布时间:2020-05-06

bellbrooklabs AptaFluor® HTS Assays

BellBrook的AptaFluor®检测平台利用适体的功能来加速药物发现。新的AptaFluor SAH甲基转移酶测定法使用新颖的拆分适体方法,并具有TR-FRET读数来测量甲基转移酶活性。未来的检测将采用多种检测策略,以提供强大,易于使用的均相检测进行药物发现。

AptaFluor SAH甲基转移酶测定

AptaFluor SAH甲基转移酶测定法使用适体,可与甲基转移酶反应的产物SAH选择性结合。核糖开关的精美亲和力和选择性与阳性TR-FRET信号相结合,能够以无与伦比的灵敏度筛选和分析组蛋白甲基转移酶。

 

通过TR-FRET读数直接检测SAH

AptaFluor海报演示

AptaFluor®SAH甲基转移酶测定

AptaFluor –利用适体的力量进行药物发现

表观遗传调控已被证明是多种疾病的成因。甲基转移酶抑制剂的发现目前是一个活跃的领域。甲基转移酶使用S-腺苷甲硫氨酸(SAM)作为甲基供体甲基化各种底物,剩下的常见产物S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)。

AptaFluor SAH甲基转移酶测定法使用天然存在的适体或核糖开关,可选择性地与SAH(甲基转移酶反应的不变产物)结合。核糖开关的精美亲和力和选择性与阳性TR-FRET信号相结合,能够以无与伦比的灵敏度筛选和分析甲基转移酶。

通过直接检测均质形式的SAH,实际上可以使用任何甲基转移酶进行筛选和酶学研究。该测定法可作为协助研究人员进行命中鉴定和鉴定的工具,以寻求开发新的甲基转移酶抑制剂作为疾病治疗方法。

通过TR-FRET读数直接检测SAH

超敏感

最敏感的HTS甲基转移酶测定法的LLD为0.6 nM SAH。这大大减少了酶的使用,并允许在 SAM的K m或以下进行分析。

 

通过TR-FRET读数直接检测SAH

超敏感

最敏感的HTS甲基转移酶测定法的LLD为0.6 nM SAH。这大大减少了酶的使用,并允许在 SAM的K m或以下进行分析。

比较本海报中不同方法的测定灵敏度

使用生理SAM和AptaFluor甲基转移酶测定灵敏检测PRMT4

 

与低于100nM的生理SAM浓度一起使用

稳定

出色的试剂和信号稳定性降低了测定的可变性,并实现了自动化的工作流程。

强大的

在各种测定条件下均具有出色的Z'。

具有0.2 uM或2 uM SAM和组蛋白底物的PRMT4酶为阳性对照。PRMT4和组蛋白底物作为阴性对照。

简单的混合阅读

AptaFluor SAH甲基转移酶测定法采用简单的混合和读取格式。运行您的酶反应,添加淬灭试剂,添加AptaFluor试剂,并阅读板。

兼容各种MTase受体底物

MT受体底物的耐受性。在存在核小体(10 ng /μL),组蛋白H3-3(3 ng /μL),组蛋白H3(1-21)肽(10μM)和Poly d(IC)的情况下建立100 nM SAH-SAM标准曲线)(2.5 mU /μL); 控制孔缺少MT底物。

通用测定法–与几乎所有甲基转移酶一起使用

甲基转移酶和底物图

 

 

AptaFluor SAH甲基转移酶检测试剂盒

 

 

 

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