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 技术文章
FinaBio CRM 作为载体蛋白优于 KLH
点击次数:46 发布时间:2020-05-18

Andrew Lees博士于2006年创建了Fina Bio公司,以帮助新兴市场疫苗制造商学会为疫苗生产价格合理的蛋白质多糖偶联物。Fina Bio公司现在是全球生物技术和疫苗行业联合疫苗实验室和咨询服务的主要供应商。Fina Bio公司位于马里兰州生物技术走廊的中心,毗邻美国国立卫生研究院(NIH)、美国食品和药物管理局(FDA)以及许多全球生物制药公司。Fina Bio公司有一个设备齐全的实验室,用于分子生物学和蛋白质表达、偶联和偶联疫苗的鉴定。Fina Bio公司的科学家与约翰霍普金斯大学和马里兰大。

FinaBio CRM 作为载体蛋白优于 KLH

CRM 优于 KLH 作为载体蛋白 197,使用 Fina Biosolutions 的 CRM,EcoCRM 改善免疫应答和疗效。197®

钥孔血蓝蛋白 (Keyhole limpet hemocyanin,KLH) 因其极强的免疫原性和易于获得而常被用作载体蛋白。然而,由于其多丝起源和较差的表征,天然 KLH 不是理想的载体。相比之下,遗传解毒的白喉毒素 CRM 是 58.4 kDa 的重组蛋白,也具有高度免疫原性。通过 MALDI-TOF 质谱可以很容易地表征药物和肽 CRM 偶联物。我们的研究表明,用 Fina Biosolutions 的 CRM,EcoCRM 制成的结合物的免疫原性等于或优于 KLH 的结合物。®197 197 作为一种极大的外源蛋白,KLH 诱导自身和与其连接的分子产生极高的抗体滴度。然而,KLH 是从海蜗牛的血液中获得的,使得规模扩大和临床使用具有挑战性。它是一种混乱的、有点不明确的聚合蛋白,这使得很难对其进行表征。此外,KLH 在低盐和中性 pH 溶液中的溶解度较差,KLH 结合物的质量控制存在问题。目前尚无使用 KLH 作为载体蛋白的许可疫苗。相反,CRM 是一种基因解毒的白喉毒素,在细菌中重组产生,为 58.4 kDa 的定义明确的蛋白。CRM 用于多种许可疫苗,包括 Prevnar。Fina Biosolutions 开发了一种独特的大肠杆菌菌株,其以高产率将 CRM 表达为一种可溶性、适当折叠的细胞内蛋白。该蛋白以大肠杆菌 CRM 的商品名“EcoCRM”上市。EcoCRM 可用于研究和临床。

 

我们一致发现 EcoCRM 偶联物诱导的抗体应答等于或大于 KLH 偶联物。此外,与 KLH 不同,CRM 结合物可通过 SDS PAGE 和质谱进行表征。®197 我们的研究表明,用 EcoCRM(Fina Bio 的 CRM)制备的结合物的免疫原性与用 KLH 制备的结合物相当。

 

 

 

A. MALDI-TOF 法表征载体蛋白和结合物。与半抗原偶联前 (A1) 和偶联后 (A2) 分析 EcoCRM® 载体蛋白。使用在高质量线性模式下操作的 Applied Biosystems/MDS SCIEX 54800 MALDI TOF/TOF 分析仪分析样品。

 

B. 抗体半抗原 IgG 反应。在第 0、14 和 28 天,用 1 mg 明矾佐剂配制的 100µg 未结合 KLH(对照)、Hapten-KLH 或 Hapten-EcoCRM s.c. 免疫 BALB/c 小鼠(n≥4 只/组)。ELISA 法测定抗半抗原滴度。

 

 

Example 2. Peptide Conjugates

肽 PepL1 与 FinaBio 的即用型结合物 CRM-马来酰亚胺或 KLH(由肽合成公司)结合。即用型结合物 CRM-马来酰亚胺极大地促进了 EcoCRM 结合物的合成。如图所示,与 KLH 结合物相比,CRM 结合物产生了极好的抗肽抗体应答。小鼠在接种疫苗后产生免疫反应,并用靶向伯克霍尔德菌表面 OMP 的肽-蛋白 +/-佐剂增强免疫反应。AddaVax 佐剂 (~MF59)。FinaBio 的 Ready-to-conjugate CRM 对结合物的响应显著高于 KLH。还应注意,即使不存在佐剂,CRM 结合物也具有免疫原性。

 

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