Sumoylation控制试剂盒

 laebio K007说明书

Sumoylation Control Kits 

Catalog # K007 supplied with proteins

 Sumoylation控制试剂盒

蛋白质随附的Sumoylation Control Kits 产品目录号K007

描述：
该测定试剂盒包含用于常规检测磺酰化活性的试剂。包含Sumoylation标记（人类拓扑异构酶I蛋白），可以清楚地检测反应。已经证明该测定法可用于粗提物。强烈建议将活跃的人EI（Cat＃P001; P006），活跃的人E II（Cat＃P002; P011）和活跃的人SUMO I（Cat＃P003; P012）与该套件一起使用。

K007套件包含：

• SAE I和SAE II（人类EI）（货号P006）
• UBC9（人类E II）（货号P011）
• SUMO I（活动表格）。（货号P012）
• 人DNA拓扑异构酶I片段。（Cat＃B007）
• 抗拓扑异构酶I抗体。（Cat＃AP006）（冻干的抗体应在使用前用100ul H 2 O 复溶。）
• 10X磺酰化反应缓冲液。（Cat＃B006）（10x缓冲液包含200 mM Hepes pH 7.5、50 mM MgCl 2和20 mM ATP。）

上述试剂可用于50次磺酰化反应。

测定条件：
SUMO化测定在20微升的终体积在反应缓冲液含有20毫摩尔的Hepes pH为7.5，5mM的氯化镁进行2，2mM的ATP。我们建议添加新鲜的2mM ATP，以确保提供足够的能量。

拓扑异构酶I糖基化控制方案：

1. 为每个反应添加2ul 50 kd拓扑异构酶I片段（Cat＃B007）作为底物。
2. 在每个反应中，先向底物中加入2ul E2，然后加入2ul Sumo-1、2ul 10x反应缓冲液（Cat＃B006），2ul E1和2ul 20 mM ATP。后，添加H 2 O使其总量达到20 ul 。
3. LAE磺酰化蛋白的反应浓度如下：
   • EI：7.5 ug / ml
   • E II：50 ug / ml
   • SUMO-1：50 ug / ml
         对照分析的推荐条件是在37 o C下30〜60分钟。
    
4. 使用1000毫升稀释的提供的拓扑异构酶I抗体在10毫升（目录号AP006）中进行蛋白质印迹。应检测到四个主要的磺酰化带。

用Topo-I抗体（目录号AP006）对磺酰化的 50 Kd Topo-I蛋白（目录号B007）进行蛋白质印迹（12.5％凝胶）。泳道1：磺酰化的50Kd Topo-I片段；泳道2：未磺酰化的50Kd Topo-I片段。

Topo-I抗体（ Cat＃AP006）可检测至少四个主要的磺酰化的Topo-I片段 。

Sumoylation协议：

1. 准备合适的纯化底物蛋白。
2. 在每个反应中，先向底物中加入2ul E2，然后加入2ul Sumo-1、2ul 10x反应缓冲液，2ul E1和2ul 20mM ATP。后，添加H 2 O以使终体积达到20 ul。
3. LAE蛋白的反应浓度如下：
   • EI：7.5ug / ml
   • E II：50ug / ml
   • SUMO-1：50ug / ml

运输/存储：
该套件随干冰一起运输，应在-70 o C或更低的温度下存储。  

法律上的考虑：仅供研究使用。