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 技术文章
proteos哺乳动物细胞表达
点击次数:57 发布时间:2020-12-03

 

全长IgG抗体,F(ab)和(Fab')2抗体片段以及抗体融合蛋白的表达和纯化。我们的抗体生产能力包括构建体设计,瞬时哺乳动物细胞表达,利用内部或客户提供的表达载体以及亲和纯化。我们提供分子和酶促方法来生成F(ab)和(Fab')2抗体片段。

 

抗体生产

通过SDS-PAGE进行蛋白A纯化的IgG分析

Proteos提供全长IgG抗体,F(ab)和(Fab')2抗体片段以及抗体融合蛋白的生产。我们的抗体生产能力包括构建体设计,利用内部或客户提供的表达载体进行瞬时哺乳动物细胞表达以及亲和纯化。提供的其他纯化服务包括在一次生产运行中最多10克抗体的尺寸排阻色谱,通过透析进行的缓冲液交换,内毒素测试,分析SEC和SDS-PAGE(还原和非还原)。

我们行业的瞬态表达平台利用表达Epstein-Barr病毒(EBV)核抗原1的完全授权的HEK(人类仓鼠卵巢)和CHO(中国仓鼠卵巢)细胞系,以及包含EBV复制起点(OriP)的专有表达载体允许游离质粒扩增和高水平重组蛋白表达。

我们还提供细胞系扩增,冷冻保存和客户提供的细胞系库。总库将专门为客户的瞬时或稳定蛋白质生产项目而维护,并将根据其要求销毁或退还。

我们利用经过优化和经过充分验证的哺乳动物细胞表达方案,在无血清摇瓶培养体积为30 mL至60 L批次大小的情况下获得一致,可再现的蛋白表达。仅无支原体,高存活率,低传代培养用于转染,并使用Beckman Coulter Vi-cell XR监测培养密度,存活率和平均细胞直径。Vi-cell XR使用锥虫蓝染料排除方法,平均50次测量结果以计算每个样品的参数。这使我们能够高度准确地监测培养,这对于蛋白质生产项目的质量和可重复性至关重要。每个项目随附的定制技术报告中均包含所有细胞培养数据。

从构建体设计开始,抗体生产的典型生产时间为6-8周。  

全面的生产服务:

  • 全套分子生物学服务可与我们的任何表达平台一起提供,包括构建体设计,融合伴侣和亲和标签选择,带有密码子优化的基因合成,亚克隆,无内毒素质粒DNA分离和序列验证。
  • 在小于100 mL的培养规模上进行表达验证和优化;非常适合并行表达测试多种抗体。
  • 以30毫升的培养规模平行生产8组抗体的中等通量生产。最多可以并行生产48个抗体。
  • 在1 L至4 L的培养规模上进行中试规模生产和产量测定;大规模生产之前通过纯化进行过程验证的理想选择。
  • 在摇瓶培养体积不超过60 L的HEK或CHO细胞中制备规模的重组全长IgG,抗体片段或抗体融合蛋白。
  • 抗体表达服务可以与Proteos的纯化服务结合使用,以实现完全定制的蛋白质生产过程。

其他抗体服务:

  • 酶促处理全长IgG以生产F(ab)或F(ab')2抗体片段
  • 从血清,腹水或其他BSL-1生物体液中纯化IgG
  • 抗体同型测定
  • 抗体标记(HRP,生物素,FITC等)
  • 抗原产生 

proteos哺乳动物细胞表达

Proteos可在哺乳动物细胞中表达重组蛋白和抗体,包括适当的翻译后修饰。这些翻译后修饰通常是有效分泌和功能所必需的,这就是为什么在需要生物功能蛋白的情况下,优选哺乳动物细胞生产的原因。

我们行业的瞬态表达平台利用表达Epstein-Barr病毒(EBV)核抗原1的完全授权的HEK(人类仓鼠卵巢)和CHO(中国仓鼠卵巢)细胞系,以及包含EBV复制起点(OriP)的专有表达载体允许游离质粒扩增和高水平重组蛋白表达。

我们还可以在客户提供的细胞系中提供细胞系扩增,储存和瞬时表达。

我们经过优化和充分验证的哺乳动物细胞表达方案可在无血清摇瓶培养体积为每批30 mL至60 L的范围内提供一致,可再现的蛋白质表达。仅使用无支原体,高存活率,低传代培养物进行转染,并使用Beckman Coulter Vi-CELL XR监测其培养物密度,存活率和平均细胞直径。Vi-CELL XR使用锥虫蓝染料排除方法,平均50次测量值以计算每个样品的参数。这使我们能够高度准确地监测培养,这对于蛋白质生产项目的质量和可重复性至关重要。每个项目随附的定制技术报告中均包含所有细胞培养数据。

从构建体设计到纯化的蛋白质,典型的生产时间为6-8周。

服务包括:

  • 全套分子生物学服务可与我们的任何表达平台一起提供,包括构建体设计,融合伴侣和亲和标签选择,带有密码子优化的基因合成,亚克隆,无内毒素质粒DNA分离和序列验证。
  • 在小于100 mL的培养规模上进行表达验证和优化;并行测试多个重组蛋白靶标的理想选择。
  • 在1 L至4 L的培养规模上进行中试规模生产和产量测定;大规模生产之前通过纯化进行过程验证的理想选择。
  • 在摇瓶培养物中,HEK或CHO细胞中重组蛋白的制备规模生产,批量最大可达到60L。
  • 交付选项包括细胞糊剂,条件培养上清液,浓缩缓冲液交换的培养上清液或膜制剂。
  • 哺乳动物细胞表达服务可以与Proteos的纯化服务结合使用,以实现完全定制的蛋白质生产过程。

 

 

 

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