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 技术文章
kainos FGF-23 ELISA试剂盒说明书
点击次数:179 发布时间:2020-12-18

kainos FGF-23 ELISA试剂盒说明书

 

FGF-23 ELISA试剂盒是两点酶联免疫吸附测定试剂盒,用于测量血清中的FGF-23。两种特异性鼠单克隆抗体与全长FGF-23结合。一种抗体固定在微量滴定板孔上以进行捕获。另一抗体与HRP(辣根过氧化物酶)缀合以进行检测。

在反应中,将含有FGF-23的样品与固定的抗体在微量滴定孔中孵育。样品中的FGF-23被抗体捕获。在该反应结束时,将孔洗涤以除去未结合的FGF-23和其他组分。

在第二次反应中,将这种固定化的FGF-23与HRP标记的抗体孵育,形成“三明治”复合物:
 

抗FGF-23抗体-N末端FGF-23 C末端-HRP标记的抗FGF-23抗体



在该反应结束时,将孔洗涤以除去未结合的组分。

在酶反应中,将固定在孔上的三明治复合物与底物溶液一起孵育,然后通过分光光度滴定板读数器进行测量。与孔结合的复合物的酶促活性与样品中FGF-23的量成正比。

通过将吸光度与FGF-23标准品的每种浓度作图来绘制标准曲线。从该曲线确定样品中FGF-23的浓度。

问答环节

A.产品信息

1)FGF-23 ELISA试剂盒中包含的测试数量/价格

产品名称货号#包装尺寸价钱
FGF-23 ELISA试剂盒CY-400096次测试100,000日圆
FGF-23标准1CY-405380 mL×15,000日圆

注意:此价格不包括运输和手续费

2)FGF-23 ELISA试剂盒规格

该试剂盒使用“夹心” ELISA和抗人FGF-23小鼠单克隆抗体来测量血清FGF-23的水平。该试剂盒具有高灵敏度,低检测限为3 pg / mL,定量范围为3-800 pg / mL。

 

包装尺寸

FGF-23 ELISA试剂盒的包装大小为:
数量包装尺寸(长x宽x高)大约 重量
1套25x37x29厘米6.0公斤
2套25x37x29厘米6.5公斤
3套35x42x30厘米7.5公斤
4套35x42x30厘米8.0公斤
5套35x42x30厘米9.0公斤
10套37x66x32厘米15.0公斤

C.使用注意事项

1)测试样品的储存条件是什么?

使用新鲜的血清样品。如果您不能立即测试样品,请将其保存在-70°C以下。避免解冻/重新冻结周期。

在我们的实验室测试中,在冰箱中放置13天后,给定样品的活性降至86.6%。样品可以在-80°C下保持稳定约三年,但在-20°C下不能保证稳定性。

我们已经确认多六个融化/重新冻结周期可能不会影响活性,但是我们建议小批量冷冻样品以大程度地减少融化/重新冻结周期。

2)我可以使用血浆样品吗?

虽然可以使用FGF-23 ELISA试剂盒测试血浆和血清,但我们建议使用血清。

3)我可以使用试剂盒测试动物样本吗?

FGF-23 ELISA试剂盒可用于测量小鼠,大鼠或猴子的血液FGF-23水平。

4)试剂盒中是否包含任何基于汞的防腐剂?

FGF-23 ELISA试剂盒不使用硫柳汞等基于汞的防腐剂。标准溶液,稀释溶液,酶标抗体溶液和浓缩洗涤溶液均使用Kathon™CG作为防腐剂。

5)操作注意事项

必须为每次测试准备校准曲线。
如果测试了多个样品,则反应时间必须保持一致。

一级反应必须在搅拌板的同时进行。搅拌前应将板密封。

在洗涤过程中必须遵守以下预防措施:

请勿在板上放置洗涤液。

一旦从孔中充分去除了清洗溶液,请立即进行下一步。

 

试剂

  1. 1)FGF-23抗体包被的微孔板(FGF-23微孔板)
      96孔微孔板(12条,每条8孔)被FGF-23鼠单克隆抗体包被。
  1. 2)HRP标记的FGF-23抗体(FGF-23结合物)
      12 mL鼠抗辣根过氧化物酶结合的FGF-23单克隆抗体,带有防腐剂。
      该试剂应在2-10℃下保存并避光。
  1. 3)FGF-23标准品(Std1〜Std7)
      12 mL(Std1)和0.5 mL(Std2〜Std7)缓冲的FGF-23含防腐剂。
      7瓶FGF-23在具有防腐剂的缓冲碱中。
  1. 4)分析稀释剂(Assay Diluent)
      12 mL缓冲液。
  1. 5)显色剂(底物)
      12 mL的过氧化氢尿素四甲基联苯胺TMBZ。
  1. 6)FGF-23洗涤缓冲液(10倍浓缩液)
      53 mL含防腐剂的缓冲表面活性剂10倍浓缩液。
      使用前,用去离子水将内容物稀释至10倍并充分混合。
  1. 7)终止溶液(停止溶液)
      12 mL 0.5 mol / L硫酸。
  1. 8)
      套件中包括三个平板封口机。

*这些试剂应在2-10℃黑暗条件下保存。
 使用前,将所有试剂置于室温下。

 

测定方法

  1. 1)在所有要使用的孔中加入50μL分析稀释剂。
  1. 2)在每个孔中加入50μLFGF-23标准品或样品,并用板密封剂覆盖板。
  1. 3)在平板混合器上于室温下孵育平板120分钟。
  1. 4)拆下平板封口机。
      除去反应溶液后,向每个孔中加入300μL洗涤缓冲液,然后丢弃洗涤缓冲液。
      重复此过程4次。轻拍纸巾或类似吸收材料上的孔板,以除去孔中残留的水滴。
  1.   [注1]
      为了避免在添加洗涤缓冲液时孔变干,请使用多通道移液器或类似设备快速工作。
  1.   [注2]
      确保移液器吸头不会划伤孔底部,以尝试从孔中除去溶液。
  1. 5)在每个孔中加入100μLFGF-23偶联物,并用板密封剂覆盖板。
      在平板混合器上于室温下孵育平板60分钟。
  1. 6)以相同的方式重复4)。
  1. 7)将100μL底物添加到每个孔中,并用板密封剂覆盖板。
      在黑暗中于室温下孵育平板30分钟。
  1. 8)拆下平板封口机。
      立即将100μL终止溶液添加到每个孔中。
      用微量滴定板读数器在10分钟内读取450 nm(第二波长600-650 nm)的吸光度。

加入50μL分析稀释液。
  
加入50μLFGF-23标准品或样品。
  
在平板混合器上于室温下孵育120分钟。
  
抽吸并清洗4次。
  
加入100μLFGF-23偶联物。
  
在平板混合器上于室温孵育60分钟。
  
抽吸并清洗4次。
  
在每个孔中添加100μL底物。
  
在黑暗中于室温下孵育30分钟。
  
加入100μL终止溶液。
在10分钟内读取吸光度。

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性能

校准曲线

线性(人血清)

灵敏度
(n = 8,平均值±2 SD

互通

内部测试

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