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 技术文章
genebridges K006说明书
点击次数:68 发布时间:2020-12-22

genebridges K006说明书

 

Quick & Easy E.coli Gene Deletion Kit

快速简便的大肠杆菌基因删除试剂盒

用于快速敲除或修饰大肠杆菌染色体上的基因。

 

特征

  • Red / ET的忠实重组
  • 快速准确
  • 可能有多个淘汰赛
  • 方便地去除重组质粒

应用领域

  • 该试剂盒旨在在不到一周的时间内敲除或改变大肠杆菌染色体上的基因

大肠杆菌染色体上基因的靶向破坏

1.转化用表达质粒pRedET转化将被修饰
大肠杆菌菌株。

2. Red / ET重组
Red / ET表达是通过添加L-阿拉伯糖和温度变化来诱导的。含有50 bp同源臂的FRT-PGK-gb2-neo-FRT盒被转化。Red / ET介导的重组通过插入盒带破坏了靶基因座。

3.可选:去除选择标记
Flp介导的切除,仅留下一个FRT部位。(另请参见我们的FRT选择盒和Flp表达质粒和菌株)。

描述

Red / ET重组使碱基对可以准确,特异性和忠实的方式交换遗传信息。试剂盒随附有FRT侧翼的卡那霉素抗性标记盒,可用于替换大肠杆菌染色体上的基因。Red / ET重组可替代大肠杆菌染色体上长达30kb的片段。如果需要,使用FRT侧翼抗性盒替代靶基因可以随后通过FLP重组酶步骤去除选择标记。FLP表达质粒可以从Gene Bridges购买。通过重复插入试剂盒附带的功能盒或与Gene Bridges提供的其他功能盒组合,可以产生多个基因敲除。重组过程由于pRedET表达质粒的优化设计而受到严格控制。重组蛋白的基因在诱导型启动子的控制下,质粒带有温度敏感的复制起点,可在重组后方便地去除质粒。

内容

  • 两个Red / ET重组蛋白表达质粒pRedET(tet)和pRedET(amp)。通过用这些质粒转化,可以使任何大肠杆菌菌株变成Red / ET熟练的。
  • FRT位于卡那霉素抗性模板的侧面(FRT-PGK-gb2-neo-FRT),可用于您自己的实验。
  • 替代大肠杆菌染色体上甘露糖转运蛋白(manX)基因的阳性对照。
  • 详细的协议,质粒,图谱和序列的描述。

顺序

FRT-PGK-gb2-neo-FRT

AATTAACCCTCACTAAAGGGCGGCCGC GAAGTTCCTATTCTCTAGAAAGTATAGG AACTTC ATT CTACCGGGTAGGGGAGGCGCTTTTCCCAAGGCAGTCTGGAGCATGC GCTTTAGCAGCCCCGCTGGGCACTTGGCGCTACACAAGTGGCCTCTGGCCTCGCA CACATTCCACATCCACCGGTAGGCGCCAACCGGCTCCGTTCTTTGGTGGCCCCTT CGCGCCACCTTCCACTCCTCCCCTAGTCAGGAAGTTCCCCCCCGCCCCGCAGCTC GCGTCGTGCAGGACGTGACAAATGGAAGTAGCACGTCTCACTAGTCTCGTGCAGA TGGACAGCACCGCTGAGCAATGGAAGCGGGTAGGCCTTTGGGGCAGCGGCCAATA GCAGCTTTGCTCCTTCGCTTTCTGGGCTCAGAGGCTGGGAAGGGGTGGGTCCGGG GGCGGGCTCAGGGGCGGGCTCAGGGGCGGGGCGGGCGCCCGAAGGTCCTCCGGAG GCCCGGCATTCTGCACGCTTCAAAAGCGCACGTCTGCCGCGCTGTTCTCCTCTTC CTCATCTCCGGGCCTTTCGACCTGCAGCAGCACGTGTTGACAATTAATCATCGGC ATAGTATATCGGCATAGTATAATACGACAAGGTGAGGAACTAAACCATGGGATCG GCCATTGAACAAGATGGATTGCACGCAGGTTCTCCGGCCGCTTGGGTGGAGAGGC TATTCGGCTATGACTGGGCACAACAGACGATCGGCTGCTCTGATGCCGCCGTGTT CCGGCTGTCAGCGCAGGGGCGCCCGGTTCTTTTTGTCAAGACCGACCTGTCCGGT GCCCTGAATGAACTGCAGGACGAGGCAGCGCGGCTATCGTGGCTGGCCACGACGG GCGTTCCTTGCGCAGCTGTGCTCGACGTTGTCACTGAAGCGGGAAGGGACTGGCT GCTATTGGGCGAAGTGCCGGGGCAGGATCTCCTGTCATCTCACCTTGCTCCTGCC GAGAAAGTATCCATCATGGCTGATGCAATGCGGCGGCTGCATACGCTTGATCCGG CTACCTGCCCATTCGACCACCAAGCGAAACATCGCATCGAGCGAGCACGTACTCG GATGGAAGCCGGTCTTGTCGATCAGGATGATCTGGACGAAGAGCATCAGGGGCTC GCGCCAGCCGAACTGTTCGCCAGGCTCAAGGCGCGCATGCCCGACGGCGAGGATC TCGTCGTGACCCATGGCGATGCCTGCTTGCCGAATATCATGGTGGAAAATGGCCG CTTTTCTGGATTCATCGACTGTGGCCGGCTGGGTGTGGCGGACCGCTATCAGGAC ATAGCGTTGGCTACCCGTGATATTGCTGAAGAGCTTGGCGGCGAATGGGCTGACC GCTTCCTCGTGCTTTACGGTATCGCCGCTCCCGATTCGCAGCGCATCGCCTTCTA TCGCCTTCTTGACGAGTTCTTCTGAGCGGGACTCTGGGGTTCGAATAAAGACCGA CCAAGCGACGTCTGA GAGCTCCCTGGCGAATTCGGTACCAATAAAAGAGCTTTAT TTTCATGATCTGTGTGTTGGTTTTTGTGTGCGGCGCG GAAGTTCCTATTCTCTAG AAAGTATAGGAACTTC CTCGAGCCCTATAGTGAGTCGTATTA

 

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