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 技术文章
生物制药残余DNA抽提试剂盒 (NaI法DNA提取试剂盒)简介
点击次数:105 发布时间:2021-02-04

   

生物制药残留DNA提取试剂盒( biohub B48202 )

生物制药残留DNA提取试剂盒(NaI法)
残留DNA提取试剂盒遵照中国药典记载的NaI法,适用于疫苗和治疗用生物制品所含宿主细胞残余DNA的提取。
残留DNA提取试剂盒可以提取样品中含有的极微量的DNA,回收率较高。DNA的提取操作时间为60-90 分钟。提取的DNA可以通过qPCR进行定量。
 
 生物制药残余DNA抽提试剂盒 (NaI法DNA提取试剂盒)
 
特点
 
 
● 遵照中国药典登载的NaI*1
● 高回收率
● 单管操作(无需换管) ,耗时仅60-90 min
● 不需要Phenol和Chloroform等有机溶剂
● 兼容多种DNA
*1 为使DNA检测方法与标准保持同步,中国药典(The Chinese Pharmacopoeia)宣布建立残留细胞DNA检测国家标准。NaI法将作为残留DNA提取方法,被新增至2020版的中国药典中。
◆ 原理
1. 使样品中的蛋白质和脂质溶于NaI
2. Isoproanol与糖原选择性地共沉淀DNA。
◆ 使用方法
 

q 1、每个样品添加500uL或稀释至2 mL微离心管

q 2、加20uL洗涤剂组合液到每管,并轻轻的涡旋

q 3、选项:如果高浓度的蛋白质干扰DNA提取和DNA分析,每个样品中吸取添加20uL消化蛋白酶K(10mg/ml),在60°C, 20min,然后在95°C灭酶 5min

q 4、加500uL NaI溶液到每个微管中,并轻轻的涡旋

q  5、50°C孵育10分钟

q 6、加900uL异丙醇涡旋

q 7、室温孵化30min

8、离心机12000转15min

9、轻轻倒出或吸出上清液

q 10、添加1.8ml洗涤缓冲液(含酒精),涡旋

11、离心机12000转10min

q  12、轻轻倒出或吸出上清液

q 13、风干DNA

q 14、添加20-60uL水轻轻涡旋溶解DNA

q 15、纯化的DNA可进行PCR、实时定量PCR、酶切、DNA测序、荧光染色法

注意事项:
1) 用于稀释NaI溶液的蒸馏去离子水须去除DNA。
2) 配制好的洗涤溶液(B)在4℃至少能保存一周。如果需要少量的洗涤溶液(B),加入糖原 溶液到无菌离心管中至合适体积即可。
3) 在保存期间NaI溶液会结晶,加热溶液至50℃可帮助溶解。
4) 提取步骤应在DNA 变性之前,因此重要的是使用无菌技术尽可能降低DNA 污染。预先包装好的无菌吸管、无菌试管和手套都要经过此步骤。
 
5)   请于各步骤使用搅拌器将溶液搅拌均匀。样品溶液里含有DNA酶时,进行步骤2之前请先进行步骤3。步骤4里样品溶解不完全时,请把保温温度升至40-60℃帮助溶解。但是含有部分蛋白(γ-球蛋白)或高浓度蛋白的样品(>50mg/ml),加热可能会导致蛋白聚集,请注意。
 
 
◆ 应用案例
DNA spiking test(加标回收实验)
DNA Extractor  Kit( biohub B48202 )可以高产量提取残留DNA,甚至少量残留DNA。
 
◆ 试剂盒构成
内容物
内容量
NaI法溶液
25ml
洗涤剂组合液
1ml
洗涤缓冲液(无酒精)
30 mL
糖原溶液
100uL
备注:每种成分不单独出售

试剂盒不包含:

乙醇(洗涤缓冲液)

异丙醇(用于DNA沉淀)

2ml微复合管(离心或等效的)

微型离心机(离心或等效的)

 

 
biohub B48202产品信息
 
产品编号
产品名称
储存
包装
 B48202
DNA Extractor™ Kit for Residual DNA, CP Method(Sodium Iodide Method)
残留DNA提取试剂盒(NaI法)
2-10℃
50 tests
 
■ 保存
2 - 10℃,试剂盒的保存期为2 - 3 年。
 
 
在工业生产的疫苗和治疗用生物制品(干扰素、白细胞介素、单克隆抗体、重组蛋白)中,宿主细胞残余DNA污染直接影响终产品和整个生产过程的质量和产量,可能引起动物致瘤、感染病毒DNA等严重后果,中国药典、WHO、EU、FDA对宿主细胞DNA残留限量都有规定。传统的DNA提取方法蛋白酶K-SDS法在SDS的稳定和促进下降解细胞中的蛋白质特别是核酶,再经有机溶剂萃取得到高质量的DNA,但毒DNA和生物制品宿主细胞残余DNA的提取试剂盒。使用新型提取步骤,用(NaI)作为促溶剂,稳定且灵敏度高、时间短,无有毒溶剂,无需复杂和费力操作,即可从样品中得到高质量和高回收率的DNA。
 
 
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