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 技术文章
NanoBRET靶标参与细胞内激酶测定服务
点击次数:19 发布时间:2021-02-19

reactionbiology的NanoBRET靶标参与细胞内激酶测定服务

NanoBRET靶标参与细胞内激酶测定服务

Reaction Biology正在与Promega合作,使用NanoBRET技术提供目标参与分析。NanoBRET靶标参与细胞内激酶测定法可测量完整细胞中特定靶标激酶的化合物结合,是除细胞磷酸化测定法以外我们提供的两种基于细胞的激酶测定法之一。

NanoBRET分析采用能量转移技术,旨在测量活细胞中的分子接近性。NanoBRET靶标参与细胞内激酶测定法通过竞争性置换NanoBRET示踪剂来测定测试化合物的表观亲和力,该示踪剂可逆地结合到细胞中的NanoLuc荧光素酶激酶融合构建体上。细胞内靶标的结合和选择性在生理上是相关的,并且对于化合物的药理机制是至关重要的。生物化学和生物物理分析可以在体外识别激酶抑制剂,而NanoBRET分析则是确定化合物与细胞中靶激酶直接相互作用的强大工具。

  • 该测定提供化合物与激酶靶标结合亲和力的实时数据,包括占用时间
  • 完整的细胞就离子和ATP的浓度,pH或辅因子而言,为化合物激酶的相互作用提供了一个相关的环境。另外,为了在细胞内部发挥作用,化合物必须克服细胞膜。
  • 适用于高通量筛选
 

NanoBRET检测原理

该测定法是一种化合物竞争测定法,它依赖于荧光素酶标记的激酶和荧光示踪剂之间的生物发光共振能量转移(BRET)。定量和特异性是NanoBRET系统的关键属性。

 

分析细节

用于DDR1的nanobret激酶测定法用于参考抑制剂IC50数据

实例研究:ATP竞争性酪氨酸激酶抑制剂对DDR1的抑制作用。

将瞬时表达NanoLuc-DDR1融合载体的HEK293细胞接种到384孔板中,并用示踪剂K-4和化合物处理1小时。BRET信号在EnVision 2104多标记酶标仪上测量。

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