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 技术文章
westbioscience大肠杆菌系统的优缺点
点击次数:43 发布时间:2021-02-22

 

所有West Bioscience定制的蛋白表达和纯化均在我们的加利福尼亚工厂进行,以确保的质量和的客户满意度。我们一直是提供高质量重组蛋白表达和纯化服务的,尤其是在定制蛋白设计领域。我们向客户交付了数千种蛋白质。

 westbioscience大肠杆菌系统的优缺点

 优点

  • 表达水平可能很高
  • 低成本
  • 快速增长
  • 可扩展
  • 简单的转换协议
  • 可以更改许多参数以优化表达式

 缺点

  • 低效的二硫键形成
  • 蛋白在细胞质中折叠不良
  • 包涵体形成
  • 体外重折叠方案效率低下–可能会抵消优势
  • 密码子的用法不同于真核生物
  • 少的翻译后修饰
  • 内毒素

克隆

我们将通过标准亚克隆或PCR克隆将您的插入片段克隆到表达载体中。  将用于将目的基因转移到表达载体中。将对克隆进行完全排序以进行验证。

 表达筛选

含有目的基因的表达载体将被转化到大肠杆菌的表达菌株中以产生蛋白质。几个单独的克隆将在小规模的诱导实验中进行筛选。表达结果将通过SDS / PAGE和蛋白质印迹进行分析。

 表达优化

表达条件将通过诱导时间,温度和培养基条件来优化。结果将通过SDS-PAGE和Western blot确认。

 蛋白质表征

将测试小规模的培养物,并对表达的蛋白质进行表征,以区分纯化标签的细胞位置,溶解度,产量和可及性。将设计生产和纯化蛋白质的详细策略。

 蛋白质生产

使用摇瓶将以升量进行大规模生产。如果您喜欢自己纯化蛋白质,则将收到细胞沉淀物以及带有SDS-PAGE和Western blot分析结果的完整报告。

 蛋白质纯化

 

可以使用多种方法纯化蛋白质,例如包涵体制备或亲和柱纯化。

 

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