网站首页公司简介网站新闻产品目录产品中心下载中心技术文章询价留言联系方式
产品搜索: OCT包埋剂,ALZET微渗泵,EK酶,3MM滤纸 polysciences trlink cygnus crystalchem sysy
 产品目录
 热卖产品
78pei40000上海起发BIOHUB 78PEI MAX 40K转染试剂
78pei25000BIOHUB品牌PEI转染试剂
试剂盒进口清关
化合物清关服务
AGC-003上海起发抗体清关服务
HTI SCAT-1血液采集管清关服务
EUN001Kerafast EUN001
Pranovo Biotech 特约代理
MRC-Holland 中国代理
TimTec LLC 特约代理
Chiron 特约代理
Nova Biomedical 特约代理
 联系我们
公司名称:上海起发实验试剂有限公司
电话:021-50724187 021-50724961
手机:15921799099
联系人:杨经理
邮编:201203
邮箱:fige007@163.com
公司网址:www.qfbio.com
 技术文章
moradec AH-101-AF说明书
点击次数:55 发布时间:2021-02-24

moradec AH-101-AF说明书

aHFc-NC-MMAF

Anti-human IgG Fc-MMAF Antibody with Non-Cleavable Linker

Catalog Number AH-101-AF

Lot # 20200723-2

描述

HFc-NC-MMAF是抗人IgG Fc特异性抗体,通过不可裂解的连接子与一甲基auristatin F(MMAF)结合。抗体部分是人IgG Fc区的特异性多克隆抗体。单甲基澳瑞他汀F(MMAF)是一种细胞毒性小分子,通过阻断微管蛋白的聚合来抑制细胞分裂。连接MMAF与抗体的不可裂解连接子在细胞外液中是稳定的,但进入细胞后可以通过非特定机制裂解。

 

申请方案

我们建议您对细胞进行滴定,以确定基于细胞的活力检测的数量。同样重要的是确定2°ADC本身的浓度,而不会对每个细胞系造成显著的细胞毒性(即小于10%的细胞死亡)。您可以选择细胞毒性检测的试验方法。以下是使用CellTiter-Glo发光法作为检测方法进行细胞活力测定的两个示例。

  • 在细胞活力试验中使用恒定量的HFc-NC-MMAF:
    1. 在培养基中将细胞新鲜分裂成不透明的多孔板。在96孔板中每孔加入100μl细胞。典型范围是96孔板中每孔约5000至20000个细胞。然而,应确定每个细胞系的细胞数量。
    2. 在培养基中稀释含单克隆一抗(mAb)的人Fc。然后在培养基中对一级mAb进行系列稀释。
    3. 在每个孔中加入2 l稀释的一级mAb。一级mAb的终浓度应介于100 nM-0.01 nM(或15 ng/μl-1.5 pg/μl)之间。在抗体存在下孵育细胞5-10 min。
    4. 同时,在培养基中制备2°ADC HFc-NC-MMAF稀释液。应确定每种细胞系中每种特定mAb的HFc-NC-MMAF稀释度。然而,检测孔中HFc-NC-MMAF的推荐初始浓度为6.6 nM(或1 ng/l)。例如,在这种情况下,将2.9 l11.3 M(或1.7 g/l)HFc-NC-MMAF稀释于97.1 l培养基中,然后在用一级mAb预孵育的96孔板中每孔加入2 l稀释的HFc-NC-MMAF。
    5. 此外,每个测定板中还应包括未用一级mAb或2°ADC处理的对照孔,以获得正常细胞生长值。
    6. 根据培养方案孵育多壁平板72小时。
    7. 向96孔板的每个孔中加入100 lCellTiter-Glo试剂。
    8. 在定轨振荡器上混合内容物2 min,以诱导细胞裂解。在室温下孵育10 min。
    9. 读取发光强度。

 

  • 在细胞活力试验中应用原代人IgG/HFc-NC-MMAF的恒定比率:
  1. 在培养基中将细胞新鲜分裂成不透明的多孔板。在96孔板中每孔加入100μl细胞。典型范围是96孔板中每孔约5000至20000个细胞。然而,应确定每个细胞系的细胞数量。
  2. 在培养基中稀释含单克隆一抗(mAb)的人Fc。然后在培养基中对一级mAb进行系列稀释。
  3. 在每个孔中加入2 l稀释的一级mAb。一级mAb的终浓度应介于30 nM-0.01 nM(或4.5 ng/μl-1.5 pg/μl)之间。在抗体存在下孵育细胞5-10 min。
  4. 同时,在培养基中制备2°ADC HFc-NC-MMAF稀释液。HFc-NC-MMAF应在连续稀释中制备,作为一级mAb。然后,在用mAb预孵育的96孔板中,每孔加入2 l稀释的HFc-NC-MMAF。
  5. 每个测定板中应包括未经一级mAb或2°ADC处理的对照孔,以获得正常细胞生长值。由于高浓度的2°ADC本身可对细胞产生细胞毒性,因此在不存在一级mAb的情况下获得HFc-NC-MMAF的细胞毒性特征尤为重要。
  6. 根据培养方案孵育多壁平板72小时。
  7. 向96孔板的每个孔中加入100 lCellTiter-Glo试剂。
  8. 在定轨振荡器上混合内容物2 min,以诱导细胞裂解。在室温下孵育10 min。
  9. 读取发光强度。

 

示例数据

已经证明,赫赛汀抗体-药物偶联物(T-DM1)对Her2过表达的肿瘤细胞(但不是Her2正常表达或Her2阴性细胞)具有强效杀伤活性1。在存在和不存在HFc-NC-MMAF的情况下,在表达不同量Her2标记物的4种乳腺癌肿瘤细胞系中检测了裸赫赛汀的细胞毒性。SKBR3和HCC1954为

 

Her2过表达细胞,MCF7具有正常的Her2表达,MDA-MB468为Her2阴性。体外SKBR3对未偶联赫赛汀处理轻微敏感,而HCC1954、MCF7和MDA-MB468对未偶联赫赛汀1耐药。未偶联抗人IgG Fc抗体(HFc)未改变赫赛汀对这些细胞系的表观效应(图A)。相反,在存在6.6 nM HFc-NC-MMAF的情况下,赫赛汀对Her2过表达的SKBR3和HCC1954细胞均表现出强效细胞毒性,而对MCF7或MDA-MB468细胞几乎没有杀伤作用(图B)。同样,在存在恒定比例(1:1)的HFc-NC-MMAF/赫赛汀的情况下,赫赛汀对Her2过表达的SKBR3和HCC1954细胞均显示出强效细胞毒性(图C)。2°ADC HFc-NC-MMAF单独给药对这些细胞的毒性极小(图D)。

储存

以1.7 mg/mL PBS溶液的形式提供。储存于-20 ℃或-70 ℃手动除霜冰柜中。避免反复冻融循环。

 

参考文献

1. Lewis Phillips GD等人用抗体-细胞毒性药物偶联物曲妥珠单抗-DM1靶向Her2阳性乳腺癌。(2008),Cancer Res,68(22),第9280-90页。

返回首页 | 关于我们 | 联系我们
上海起发实验试剂有限公司 版权所有 总访问量:2195233 地址:上海浦东川沙镇川沙路6619号上海起发实验试剂有限公司 邮编:201203
电话:021-50724187 021-50724961 传真:021-50724961 手机:15921799099 联系人:杨经理 邮箱:fige007@163.com
GoogleSitemap 网址:www.qfbio.com 技术支持:化工仪器网 管理登陆 ICP备案号:沪ICP备11048721号-2

化工仪器网

推荐收藏该企业网站