qa-bio Endo F Multi-Kit说明书

产品描述

推荐使用Endo F Multi-kit对由于在蛋白质的三维结构中的聚糖位置而在非变性条件下对PNgase F裂解具有抗性的天然蛋白质进行去糖基化处理，因为已知这些酶对蛋白质构象的敏感性较低。

每一种酶的具有不同的N-连接的聚糖的特异性：
内切糖苷酶F1断裂这样的高甘露糖和某些杂合型N-聚糖
内切糖苷酶F2释放双触角和高甘露糖聚糖（以40X减小的速率）
内切糖苷酶F3将释放triantennarry和岩藻糖基双触角N-聚糖

应用：
–抗PNGase F切割的天然蛋白质的去糖基化–
聚糖类型的测定（高甘露糖，双触角，三/四臂触角）
–脱糖基化时通常会沉淀的脱糖基化蛋白
– X射线晶体学

这三种酶在寡糖的核心中的两个GlcNAc残基之间裂解天冬酰胺连接的（N-连接的）寡糖，生成截短的糖分子，其中一个N-乙酰氨基葡糖残基保留在天冬酰胺上，增强了蛋白质的溶解性。相反，PNGase F可以完整清除寡糖。

使用说明

1.向Eppendorf管中加入多达200μg糖蛋白。用去离子水将最终体积调整为34μl。
2.加入10μlEndo F2 / F3 5x反应缓冲液，250 mM乙酸钠pH 4.5。如果单独使用Endo F1酶，请使用Endo F1缓冲液，250 mM磷酸钠pH 5.5。
4.将2.0μl每种酶添加到反应中。在37°C下孵育3小时。
通过SDS-PAGE监控切割。