biontex Proteofection常见问题解答

PROTEOfectene®和PROTEOfectene® AB是含有 Proteofectene®AB 的脂质制剂，专为抗体的蛋白转染而开发。

您感兴趣的蛋白质或抗体中存在的任何杂质、污染物或添加剂都可能影响PROTEOfectene®或PROTEOfectene® AB 的递送效率。因此，使用尽可能纯的蛋白质/抗体。
如果与感兴趣的蛋白质相比存在过多的稳定剂，例如去污剂，则可以抑制递送。稳定剂如甘油或其他类似的添加剂不会干扰蛋白质的传递。

抗体溶液中的 BSA 会抑制抗体递送！0.1% 到 2% BSA 是抗体溶液中的常见浓度——这意味着 1 mg/ml 到 20 mg/ml。在这些溶液中，BSA 的比例大大超过了抗体。BSA 在抗体PROTEOfectene® AB 复合物形成期间与抗体竞争，因此抑制抗体递送。

如果防腐剂如叠氮化纳以高浓度存在，则可能会导致细胞毒性。如有必要，可通过透析去除。

PROTEOfectene®是一种基于脂质的制剂，可与蛋白质形成非共价复合物。这些复合物被细胞内化，蛋白质被释放到细胞质中。
只需将您感兴趣的蛋白质与PROTEOfectene®在 1xPBS 中孵育10-15 分钟，用无血清培养基稀释，然后将混合物应用于您的细胞，3-48 小时后，您就可以检测蛋白质活性了。

由于它们的特定特性，某些蛋白质可能无法通过PROTEOfectene®有效递送。因此，在生理条件下带正电荷的碱性蛋白质很难被引入细胞。另一个原因可能是前蛋白的杂质（例如去污剂、防腐剂、稳定剂）。

与使用转染 DNA 的基因表达研究相比，蛋白质转染 (Proteofection) 的速度非常快，因为它绕过了转录和翻译等细胞过程。此外，避免了潜在有害的随机 DNA 整合到目标细胞的基因组中。PROTEOfectene®可以将活性蛋白质直接输送到细胞中，用于涉及细胞周期、细胞凋亡和许多其他因素的各种问题的研究。

R-藻红蛋白 (100 µg/ml) 与PROTEOfectene® 一起提供作为阳性对照。以 1:2 的蛋白质：脂质比使用它（对于 1 μg 蛋白质，需要2 μl PROTEOfectene®）。
R 藻红蛋白已被输送到许多不同的细胞中，因此成功输送的可能性很高。提供此对照蛋白是为了帮助您设置实验，并且应该用于您实验的每个新细胞系。如果细胞毒性是一个问题，阳性对照使用户能够确定递送的蛋白质是否影响细胞活力。

FITC 标记的 IgG（阳性对照，100 μg/ml）是一种荧光标记的抗体（免疫球蛋白）作为阳性对照。以 1:1 – 1:2 的抗体：试剂比例使用（对于 1 μg 抗体，需要 1-2 μl PROTEOfectene® AB）。提供此对照抗体是为了帮助您设置实验，并且应该用于您实验的每个新细胞系。FITC-IgG 已被输送到许多不同的细胞中；因此，成功运输的可能性很高。