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    jembio DNA连接酶说明书

    发布时间: 2022-05-19  点击次数: 110次


    jembio DNA连接酶说明书


    DNA连接酶(大肠杆菌)

    DNA 连接酶(大肠杆菌)催化双链 DNA 中并列的 5' 磷酸和 3' 羟基粘性末端之间形成磷酸二酯键。

    描述:

    • 催化具有粘性末端的双链 DNA 片段之间形成磷酸二酯键。

    • 5'-磷酰基与相邻的 3'-羟基的缩合伴随着 NAD+ 的水解。

    • 适用于全长cDNA(1、2)的高效克隆。

    单位定义:一个单位定义为产生 50% 的 λ DNA 的 Hind III 片段连接所需的酶量。

    在 20 µl DNA 末端浓度为 0.02 µM (50 µg/ml) 的测定混合物中在 16oC 下孵育。

    储存条件:储存于-20oC。

    反应缓冲液:30 mM Tris-HCl(22°C 时 pH 8.0)、1 mM 二硫苏糖醇、4 mM MgCl2、26 µM NAD+、50 µg/ml 牛血清白蛋白。

    最佳连接发生在 16°C。

    储存缓冲液:10 mM Tris-HCl(22°C 时 pH 7.4)、50 mM KCl、0.1 mM EDTA、10 mM 硫酸铵、1 mM 二硫苏糖醇和 50% (v/v) 甘油。

    质量控制:所有制备物都经过了内切核酸酶和外切酶活性的污染测试,以及连接反应中的功能测试。

    连接分析条件:30 mM Tris-HCl(22°C 时 pH 8.0)、4 mM MgCl2、1.2 mM EDTA、1 mM 二硫苏糖醇、0.026 mM NAD+、50 µg/ml 牛血清白蛋白和 λ DNA 的 Hind III 片段。在 16°C 下孵育 30 分钟。

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