将抗 MuLV p30单克隆包被抗体吸附到微量滴定板上。样品或标准品中存在的MuLV核心抗原 ( p30 ) 与吸附在板上的抗体结合；添加抗MuLV p30 多克隆抗体并与第一抗体捕获的抗原结合。

在孵育和洗涤步骤之后，添加HRP 偶联的二抗并与抗 MuLV p30 多克隆抗体结合。在洗涤步骤中去除未结合的HRP偶联二抗，并将与HRP反应的底物溶液添加到孔中。

与样品中存在的MuLV核心抗原的量成比例地形成有色产物。通过添加酸终止反应并在 450 nm 处测量吸光度。从重组MuLV p30核心抗原制备标准曲线，然后确定样品浓度。