Promega●V5071●Trypsin/Lys-C 混合酶，质谱级【产品说明书】

🔍产品基础信息

品牌：Promega

货号：V5071、V5072、V5073

英文名：Trypsin/Lys-C Mix, Mass Spec Grade

中文名：Trypsin/Lys-C 混合酶，质谱级

规格：20ug、100ug（冻干粉剂型）

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融

核心用途：蛋白质组学分析、生物治疗蛋白肽图鉴定、质谱样品前处理

配套需求：建议搭配 100mM NH₄HCO₃（pH7.8）或 Tris-HCl（pH8.0）缓冲液使用

📝产品详细介绍

1. 成分与制备工艺

Trypsin/Lys-C 混合酶，质谱级是 Promega 专为质谱分析开发的双酶复合试剂，由甲基化修饰Trypsin与重组 Lys-C 蛋白酶按优化比例混合而成 。其中Trypsin源自猪胰腺基因的毕赤酵母重组表达体系，经 TPCK 处理去除凝乳蛋白酶活性，并通过甲基化修饰封闭赖氨酸残基，从根源上减少酶分子自切 ；Lys-C则基于 A. Lyticus菌氨基酸序列，采用大肠杆菌重组技术制备，纯度达 99% 以上且无杂酶污染 。

2. 酶切机制与反应特性

双酶协同实现互补切割：Lys-C特异性水解赖氨酸（Lys）和Arg羧基端肽键，而 Lys-C 仅识别赖氨酸位点 。这种组合不仅解决了单一酶对酸性残基邻近位点的切割盲区，还能在 6~8M 尿素等强变性环境中保持活性 —— 即使面对疏水性强、结构紧密的膜蛋白，也可通过变性剂辅助打开空间结构，实现高效酶切 。

标准反应条件为 37℃孵育 3~4 小时（高浓度尿素体系）或过夜（常规体系），酶与底物比例推荐 1:25（w/w），反应 pH 耐受范围 7.5~8.5 。值得注意的是，该酶混合物在 2M 盐酸胍中仍能保留 48% 活性，对样本中常见的酶抑制剂（如血清 α1 - 抗Lys-C）具有天然耐受性 。

3. 适用场景与实例

蛋白质组学研究：HeLa 细胞提取物酶切实验显示，V5071 可识别的肽段数量比单一酶提升 22%，蛋白鉴定总数增加 18% ；

生物治疗蛋白分析：在单克隆抗体肽图鉴定中，能精准检测脱酰胺等翻译后修饰，肽段覆盖率达 95% 以上 ；

低质量样本处理：针对福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）样本，可在抑制剂存在下仍获得合格质谱数据 。

🎯核心优势详细介绍

1. 双酶协同，肽段覆盖率显著提升

单一酶常因底物序列特性出现切割漏点，而 Lys-C 的加入可补充赖氨酸位点的强制切割。例如对人血清白蛋白的酶切实验中，V5071 产生的可鉴定肽段数达 112 个，较单独酶（89 个）提升 26%，且无新增非特异性切割峰 。这种优势在膜蛋白、多结构域蛋白分析中尤为突出。

2. 甲基化修饰，自切率降低 90%

普通酶在反应中易发生自水解，产生干扰质谱信号的杂肽。V5071 的酶经甲基化修饰后，37℃孵育 3 小时的自切片段仅占总酶量的 3%，远低于未修饰酶的 32% 。这一特性使酶切产物无需额外纯化即可直接上样，大幅简化实验流程。

3. 抗抑制剂与强变性耐受，适配复杂样本

临床样本（如血清、组织匀浆）中含有的蛋白酶抑制剂常导致常规酶失效，而 V5071 可耐受 1μg/mL 的 α1 - 抗Lys-C（常规酶耐受上限为 0.2μg/mL） 。同时，其在 6M 尿素中仍保持 85% 活性，特别适合难溶蛋白的酶切处理 。

4. 无动物源性污染，符合生物药质控标准

重组 Lys-C 的使用避免了天然提取酶可能携带的病毒、支原体污染，酶虽源自动物基因但通过酵母表达，无宿主动物蛋白残留 。每批次产品均通过 HPLC 纯度检测（≥98%）和质谱干扰测试，符合 FDA 对生物治疗产品分析的要求。

5. 批次稳定性优异，实验重复性有保障

Promega 对 V5071 实施严格的批次间质控：连续 10 个批次的酶切效率变异系数（CV）≤5%，37℃活性保留率均≥90% 。这种稳定性对高通量实验和长期项目研究至关重要，可有效减少因试剂差异导致的结果波动。

❓ 常见疑问与解答

Q1：V5071 与 V5072、V5073 的区别是什么？

A：三者核心成分相同，仅规格不同：V5071 为 20μg 单支装，适合小样本预实验；V5072 为 100μg 单支装，性价比更高；V5073 为 5×20μg 分装，可避免反复冻融影响活性 。实验效果无差异，可根据样本量选择。

Q2：酶切后如何终止反应？是否影响质谱检测？

A：推荐两种方式：① 加入终浓度 0.1% 的TFA调节 pH 至 2.0；② 95℃加热 10 分钟。两种方法均不会产生质谱干扰峰，前者更适合后续反相色谱分离 。

Q3：冻干粉如何复溶？复溶后可保存多久？

A：用无核酸酶水或试剂盒配套缓冲液复溶至 1μg/μL，建议现配现用。若需短期保存，可分装后 - 20℃存放 1 周，避免反复冻融（会导致活性下降 30%/ 次） 。

Q4：能否用于胶内蛋白消化？操作时有哪些注意事项？

A：适用！需注意：① 胶块需用乙腈脱水至透明；② 还原烷基化后需清洗去除试剂；③ 酶与胶内蛋白比例可提高至 1:10（w/w），孵育时间延长至 16 小时 。实测对 10ng 胶内蛋白的鉴定率达 90% 以上。

Q5：与普通测序级酶相比，V5071 的价格更高，值得购买吗？

A：从综合成本看更划算！普通酶需额外购买 Lys-C 并优化比例（耗时 2~3 天），且自切产物多需纯化（增加试剂成本）。V5071 的预混配方可直接使用，酶切效率提升减少了样本损耗，尤其适合珍贵样本分析 。

Q6：反应体系中能否添加表面活性剂？

A：推荐搭配 Promega ProteaseMax™表面活性剂（货号 V2071），终浓度 0.1% 即可提升难溶蛋白的酶切效率 30%，且该表面活性剂可在 95℃加热 5 分钟降解，无质谱干扰 。避免使用 SDS（浓度＞0.1% 会抑制活性）。

Q7：低 pH 环境下能否使用？

A：最佳反应 pH 为 8.0，若需在酸性条件（pH5.0 以下）酶切，建议搭配 Promega AccuMAP™低 pH 消化试剂盒，其配套的耐酸 Lys-C 可与 V5071 协同工作 。

Q8：产品保质期多久？过期后还能使用吗？

A：未开封产品在 - 20℃保存可稳定 2 年（以标签标注为准）。过期后酶活性会下降，实测过期 3 个月的产品酶切效率降低 40%，不建议用于定量分析 。

Q9：是否提供质量检测报告？

A：每批次产品均附带 COA（分析报告），包含 HPLC 纯度、SDS-PAGE 电泳图、活性测定数据等，可通过 Promega 输入货号和批次号查询 。

Q10：出现酶切效率低的情况，可能是什么原因？

A：常见因素包括：① 样本未充分变性（可增加尿素浓度至 8M）；② 酶与底物比例过低（建议调整至 1:20）；③ 缓冲液 pH 偏离 8.0；④ 存在金属离子抑制剂（可添加 1mM EDTA） 。

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（注：本文内容基于品牌公开资料及行业常规信息整理，具体以品牌信息文档为准。）

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