STEMCELL：如何使用 STEMmatrix™ BME 包被培养器皿用于人多能干细胞培养

概述

STEMmatrix™ BME（基底膜提取物）是一种可溶性基质，提取自小鼠 Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) 肿瘤，并已通过人多能干细胞 (hPSC) 验证。它富含细胞外基质蛋白（如 IV 型胶原、层粘连蛋白等）和生长因子（如 EGF、bFGF 等）。

当与无饲养层 hPSC 维持培养基（如 mTeSR™1、mTeSR™ Plus 或 eTeSR™）配合使用时，STEMmatrix™ BME 能有效维持人胚胎干细胞和诱导多能干细胞处于未分化状态。细胞将保留典型的形态特征和未分化标志物（如 OCT4、TRA-1-60）的表达，并具备向三个胚层分化的潜能。

本指南将分步介绍如何使用 STEMmatrix™ BME 包被培养器皿。该流程与包被 Matrigel™ 或 Geltrex™ 等其他常用基底膜基质非常相似。

材料与试剂

进行操作前，请准备以下试剂与耗材：

•   STEMmatrix™ BME（货号 #200-0960）。

•   稀释培养基：含 15 mM HEPES 的 DMEM/F-12 培养基（货号 #36254）。

•   耗材：50 mL 聚丙烯锥形管（如 Falcon® 锥形管，货号 #38010）、经组织培养处理的培养器皿（如 Falcon® 6 孔板，货号 #38016）。

•   细胞培养基（可选）：mTeSR™1（#85850）、mTeSR™ Plus（#100-0276）、eTeSR™（#100-1215）或 TeSR™-E8™（#05990）。

操作步骤

准备说明：本方案演示如何配制 25 mL 终浓度为 100 µg/mL 的 STEMmatrix™ BME 工作液。此体积足以包被 4 块 6 孔板（1 mL/孔） 或 3 个 100 mm 培养皿（8 mL/皿）。若使用其他规格器皿，请按比例调整体积。务必使用经组织培养处理的器皿，并全程遵循无菌操作。

1.  解冻：将 STEMmatrix™ BME 冻存管置于 2–8°C 冰浴中过夜，使其缓慢解冻。建议将 BME 分装后于 -20°C 保存，切勿超过产品保质期。解冻后应立即使用，不可重冻。

2.  混匀与防凝：轻轻旋摇冻存管以确保 BME 均匀分散。用 70% 乙醇喷洒管口并风干。全程保持 BME 及所有耗材在冰上操作（BME 在温度高于 4°C 时会开始凝胶化）。若发生凝固，可将冻存管放回冰浴 1–2 小时使其重新液化。

3.  计算稀释体积：请根据批次特定的蛋白浓度（参见分析证书 CoA），利用公式 C₁V₁ = C₂V₂ 计算所需 BME 体积。例如，若目标终浓度为 100 µg/mL，终体积为 25 mL，储存液浓度为 9.8 mg/mL，则所需 BME 体积约为 255.1 µL，所需稀释培养基体积约为 24.75 mL。

4.  分装：按计算量将 BME 分装至预冷的离心管中。若枪头堵塞请及时更换，全程保持冰上操作。若不立即使用，可分装后于 -20°C 保存（勿超期）。

5.  配制工作液：取一个预冷的 50 mL 锥形管，加入冰浴的稀释培养基，再加入一管分装的 BME，充分混匀。立即将稀释后的 BME 工作液加入培养器皿中（具体体积参考下文推荐）。轻轻前后晃动培养皿，使液面均匀覆盖整个底面。注意：若包被不均匀，该器皿不可用于 hPSC 培养。

6.  孵育：在室温（15–25°C）下静置孵育至少 1 小时。注意避免溶液蒸发。

7.  移除多余液体：倾斜器皿使多余溶液聚集于边缘，用血清移液管或吸头小心吸除。操作时避免划伤包被表面。

8.  使用：包被完成后，可直接向器皿中加入细胞培养基（例如 6 孔板每孔加 2 mL），随后接种细胞。

推荐包被体积

不同规格的培养器皿所需的稀释后基质体积如下：

•   24 孔板：每孔 0.3 mL

•   12 孔板：每孔 0.5 mL

•   6 孔板：每孔 1 mL

•   100 mm 培养皿：每皿 8 mL

•   T-25 cm² 培养瓶：每瓶 3 mL

•   T-75 cm² 培养瓶：每瓶 8 mL

储存提示：若暂不接种细胞，可用封口膜密封器皿，于 2–4°C 保存最多 1 周。使用前需在室温下平衡 30 分钟。

文档编号：PR00100 版本：1.0.0

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（注：本文内容基于品牌公开资料及行业常规信息整理，具体以品牌信息文档为准。）