NipponGenetics品牌FastGene®qFYR荧光定量PCR仪中文产品说明书

1.产品描述(ProductDescription)

FastGene®qFYR是一款高性能、多功能的实时荧光定量PCR检测系统，专为满足现代分子生物学实验室对核酸定量分析的高标准要求而设计。该仪器集成了先进的温控技术与灵敏的光学检测系统，能够精准、快速地完成各类qPCR实验。

•品牌(Brand):NipponGenetics

•产品名称(ProductName):FastGene®qFYR荧光定量PCR仪(FastGene®qFYRReal-TimePCRSystem)

•货号(CatalogNumber):具体货号因目标市场及配置不同而有所差异，典型欧洲区货号为GP-qFYR，选购时请以实际订单或代理商提供信息为准。

•规格(Specification):标准配置包含主机一台、电源线一根、USB数据线一根以及配套的上位机分析软件安装包。

•适用场景:本仪器广泛适用于高等院校、科研院所、医疗卫生机构及生物技术公司的分子生物学实验室。其主要应用领域包括但不限于：基因表达量差异分析（RelativeQuantification）、绝对定量（AbsoluteQuantification）、基因型分型（Genotyping，如SNP检测）、高分辨率熔解曲线分析（High-ResolutionMelt,HRM）、病原体核酸检测以及食品与环境样本的微生物筛查等。

2.产品特点(ProductFeatures)

•光学检测性能

仪器配备高灵敏度光电倍增管（PMT）及精密的光路系统设计，能够实现宽动态范围的荧光信号采集。支持多通道荧光检测，兼容市面上主流的荧光染料及探针（如SYBRGreenI、TaqMan探针、MolecularBeacons等），可有效区分不同波长的荧光信号，满足多重PCR（MultiplexPCR）实验的需求。其出色的信噪比确保了即使在低拷贝数模板的情况下，依然能够获得稳定可靠的检测结果。

•精准且均匀的温控系统

采用半导体制冷技术（Peltier效应），配合先进的温控算法，实现了快速的升降温速率及优异的温度均一性。样品孔间的温度差异被控制在极小范围内，有效避免了因温度不均导致的扩增效率差异，从而显著提高了定量结果的重复性与可比性。同时，热盖采用先进的防蒸发设计，能够有效防止反应液在加热过程中的挥发与冷凝，确保长时程PCR反应的稳定性。

•开放且灵活的耗材兼容性

FastGene®qFYR摒弃了以往仪器对特定品牌耗材的强制绑定，展现出佳的开放性。它能够兼容多种规格的PCR反应耗材，包括0.2mL单管、8联管、12联管以及96孔PCR板（裙边、半裙边及无裙边）。这种灵活性不仅为实验人员提供了便利，也有效降低了实验室的长期耗材成本。

•直观易用的操作与分析软件

配套的专业qPCR分析软件界面友好、逻辑清晰。软件支持实验协议的灵活编辑与保存，提供多种数据分析模式（如绝对定量、相对定量、熔解曲线分析、基因分型等）。通过直观的图形化界面，用户可轻松完成标准曲线拟合、基因表达量计算、基因型聚类分析等操作，并一键生成符合发表要求的专业图表，极大提升了数据处理效率。

•紧凑的台式设计

仪器采用空间友好的紧凑型设计，占地面积小，能够轻松安置于通风橱或超净工作台内，为拥挤的分子生物学实验室节省宝贵空间。

3.储存条件与环境要求(Storage&EnvironmentalConditions)

为确保仪器的长期稳定运行及延长使用寿命，正确的储存与摆放环境至关重要：

•环境条件

仪器应放置于干燥、通风、无尘的室内环境。工作环境温度应保持在15℃至30℃之间，相对湿度应控制在20%至80%（无冷凝水）。

•电源与接地

必须使用带有良好接地的三孔插座，电源电压应为交流220-240V，频率50/60Hz。避免与大功率电器共用同一电路，以防电压波动影响仪器性能。

•摆放要求

仪器四周应保留至少10cm的散热空间，切勿堵塞机器背部的散热风扇。避免将仪器放置在阳光直射、靠近热源或有强电磁场干扰的位置。

•长期储存

若仪器需长期停用，应将其清理干净并放入原包装箱内，储存于温度为-20℃至50℃，相对湿度不大于85%的环境中。再次启用前，需在室温下静置至少24小时以适应环境湿度。

4.工作原理(WorkingPrinciple)

FastGene®qFYR的核心工作原理基于实时荧光定量PCR技术，即在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。

其具体工作流程可分为以下两个层面：

•生化反应层面

在PCR扩增过程中，随着目标DNA片段的指数级复制，与其结合的荧光染料（如SYBRGreenI）会发出越来越强的荧光信号；或者，当引物与模板特异性结合并延伸至探针水解点时，原本被淬灭的荧光基团被释放，从而产生荧光信号（如TaqMan探针法）。扩增产物的量与荧光信号强度呈正相关。

•仪器检测层面

仪器通过底部的发光二极管（LED）作为激发光源，发射特定波长的光线照射反应体系。反应体系中的荧光基团受激发后发射出波长更长的发射光。这些发射光经过滤光片筛选后，由高灵敏度的光电探测器（如PMT）接收并转化为电信号，再经放大和模数转换后传输至计算机。配套软件将电信号转化为直观的“荧光强度-循环数（Ct值）"扩增曲线，进而通过数学算法自动计算出待测样品的初始模板浓度。

此外，仪器在进行高分辨率熔解曲线（HRM）分析时，会在扩增结束后以极慢的速率连续升温，实时监测双链DNA熔解过程中荧光强度的微小变化，从而根据熔解峰的形状和位置差异，精确辨别不同长度的DNA片段或单个碱基突变。

5.解决实验中的痛点(ProblemsSolved)

在传统的核酸定量分析中，科研人员常常面临诸多困扰，而FastGene®qFYR正是为了解决这些实验痛点而生：

•克服终点PCR定量不准确的问题

传统终点PCR只能在工作结束后通过电泳估算产物量，准确性极差。本仪器通过在指数扩增期实时监测荧光，精确捕捉Ct值（阈值循环数），实现了真正的“初始模板定量"，大大提高了数据的精确度与可信度。

•有效鉴别扩增特异性，杜绝假阳性

常规的琼脂糖凝胶电泳无法检测非特异性扩增（如引物二聚体），容易导致下游数据分析出错。FastGene®qFYR不仅可以通过熔解曲线分析（MeltingCurveAnalysis）在反应结束后验证扩增产物的特异性，其高分辨率的HRM功能甚至能识别单碱基差异，极大提升了基因检测的严谨性。

•突破低丰度模板的检测瓶颈

当处理临床微量样本或环境微生物DNA时，模板浓度往往极低。本仪器凭借其超高灵敏度的光学检测系统，能够实现宽达10个数量级的动态范围检测，即便是单拷贝的目标基因也能被稳定检出。

•简化复杂实验的操作流程

基因分型或多重荧光分析通常涉及繁琐的手动操作和多步骤验证。本仪器通过多通道同步检测及配套软件的自动化聚类分析算法，将复杂的SNP分型或相对表达量计算简化为“一键式"操作，显著降低了人为误差，提升了实验通量。

•消除耗材依赖性，节约实验成本

很多老旧机型强制要求使用昂贵的原厂专属耗材。FastGene®qFYR充分考虑到实验室的预算限制，其光学引擎经过特殊调校，可适配市面绝大多数的透明或白色PCR耗材，让科研人员不再受制于单一供应商。

6.使用方法(UsageInstructions)

为了获得最佳的实验结果，请严格按照以下步骤操作FastGene®qFYR荧光定量PCR仪：

第一阶段：实验前准备

1.试剂解冻与混匀：将所需的MasterMix、引物、探针及模板DNA/RNA从冰箱取出，置于冰上解冻。轻柔涡旋混匀后，短暂离心以收集管底液体。

2.避光操作：若使用探针法或SYBR染料，所有涉及荧光试剂的操作均应在避光条件下进行，以防荧光猝灭。

3.体系配制：在冰上配制PCR反应混合液。以20μL体系为例，通常包括：10μL2xMasterMix，上下游引物（10μM）各0.5μL，模板2μL，补加ddH₂O至20μL。

4.分装与上机：将反应混合液分装至0.2mLPCR管或96孔板中，加盖光学平盖或透明封板膜，再次短暂离心去除气泡。

第二阶段：仪器参数设置

1.开机与连接：接通仪器电源，开启主机开关。启动电脑上的FastGeneqFYR控制软件，通过USB线或局域网建立仪器与电脑的连接。

2.新建实验协议(Protocol)：

•点击“NewExperiment"创建新实验。

•输入实验名称，选择实验类型（如AbsoluteQuantification,RelativeQuantification,MeltingCurve,HRM等）。

•在“PlateSetup"中根据实际耗材设置样品排布，并录入标准品浓度梯度、未知样品信息及对照组（如NTC）。

3.设定温控程序：

•预变性(InitialDenaturation)：通常设置为95℃下保持2-10分钟，以激活热启动酶。

•循环阶段(CyclingStages)：设定变性（如95℃，15秒）、退火（如60℃，30秒，此时开启荧光采集）、延伸（如72℃，30秒）的循环次数（通常为40-45个循环）。

•熔解曲线阶段(MeltCurveStage)：若需进行产物验证，可添加此阶段，通常从60℃缓慢升温至95℃，连续采集荧光信号。

4.保存并运行：确认参数无误后，点击“Save"保存实验方案，然后将耗材放入仪器托盘，点击“Run"开始运行。

第三阶段：上机运行与实时监控

1.运行状态：仪器启动后，软件界面将实时显示当前的温度、剩余时间以及荧光信号。

2.扩增曲线监控：在“AmplificationPlot"窗口中，您可以实时观察到各孔的扩增曲线逐渐升起。软件会自动计算并标记Ct值。

3.中断操作：如遇紧急情况需终止实验，可点击软件中的“Stop"按钮或按下仪器上的紧急停止键。

第四阶段：数据分析与报告导出

1.自动分析：实验结束后，软件会根据预设的实验类型自动进行数据分析。

2.结果查看：

•绝对定量：查看标准曲线（StandardCurve）的相关系数（R²）及扩增效率（E%）。

•相对定量：查看基因表达图（GeneExpressionMap），对比不同组别间的表达差异。

•熔解曲线/HRM：查看熔解峰（Peak）或HRM差值曲线，评估产物特异性。

3.报告导出：点击“Export"或“Report"按钮，可将原始数据、分析图表及结果表格导出为PDF、Excel或图片格式，便于归档与发表。

7.常见问题与解决方案(FAQ)

在使用FastGene®qFYR的过程中，您可能会遇到一些技术问题。以下是我们整理的常见问题及其解决方案，供您参考：

问题1：仪器无法开机或软件无法连接到仪器。

•解决方案：首先检查电源线是否插好，确认实验室插座是否有电。其次，检查USB连接线是否松动，尝试更换电脑上的USB接口。若仍无法连接，重启仪器和电脑，并确认软件驱动程序已正确安装。

问题2：实验结束后，部分孔位没有产生扩增曲线（无荧光信号上升）。

•解决方案：首先检查反应管内是否有液体，确认是否漏加模板或试剂。其次，检查该孔的荧光通道设置是否与所用染料匹配。如果是探针法，需确认探针是否失效或存在引物设计不合理导致的扩增失败。

问题3：扩增曲线呈现“锯齿状"或波动较大，不平滑。

•解决方案：这通常是由于反应体系中存在微小气泡导致的。下次实验时，务必在加样后短暂离心以去除气泡。此外，确保使用光学级别的封板膜，并用力压紧，防止温度变化导致膜轻微起伏。

问题4：阴性对照（NTC）出现了过早的扩增（即“前带现象"）。

•解决方案：NTC出现扩增通常意味着引物之间存在非特异性结合（如引物二聚体）。建议优化引物设计，提高退火温度，或引入一步法巢式PCR策略。同时，检查实验室环境是否存在气溶胶污染，必要时应更换新的试剂和工作区域。

问题5：标准曲线的线性相关系数（R²）低于0.99，扩增效率不在90%-110%的理想范围内。

•解决方案：检查标准品稀释过程是否操作失误，导致浓度梯度不准确。确认标准品本身是否降解。适当优化退火温度或引物/探针浓度，以提高反应的特异性和一致性。

问题6：熔解曲线中出现多个熔解峰（主峰旁边有小峰）。

•解决方案：这表明扩增产物中存在非特异性产物或引物二聚体。建议提高引物设计的特异性，适当提高退火温度，或在MasterMix中添加少量的甜菜碱等助剂以增强聚合酶的特异性。

问题7：HRM分析结果中，不同基因型的聚类区分不明显。

•解决方案：确认所使用的饱和染料是否适合HRM分析（普通SYBRGreenI不适合高分辨率分析，需使用专用HRM染料）。检查PCR产物的长度，通常100-300bp的片段HRM效果佳。适当放慢熔解阶段的升温速率，提高数据采集密度。

问题8：荧光信号强度过低，导致Ct值偏大（>35）。

•解决方案：模板浓度可能过低，尝试增加模板用量或减少稀释倍数。检查PCR反应体系，确保MasterMix比例正确。确认所用染料的激发/发射波长是否被仪器的滤光片支持。

问题9：仪器运行过程中报错“温度过高"或“温度传感器故障"。

•解决方案：检查仪器后部散热风扇是否被遮挡，确保周围通风良好。关闭仪器，等待10分钟后重新启动。若错误依旧，请联系售后技术支持。

问题10：使用白色耗材与透明耗材得到的Ct值存在差异。

•解决方案：这是正常现象。白色耗材具有反光特性，能提高荧光信号的均一性，通常Ct值会比透明耗材提前0.5-1个循环。在同一实验中，务必保持所有样品使用同一种类型的耗材。

问题11：相对定量（如2^-ΔΔCt法）计算结果出现异常高或低的值。

•解决方案：检查内参基因（Housekeepinggene）在各样品中的表达是否稳定。若内参基因本身表达量波动较大，则不适合作为归一化标准。尝试更换更稳定的内参基因。

问题12：反应液在管盖处蒸发，导致管内液体减少。

•解决方案：热盖温度设置过低会导致蒸发。将热盖温度调整至105℃左右，并确保在程序运行前热盖已充分预热。确保PCR管或封板膜与耗材底座紧密贴合。

问题13：软件崩溃或实验数据意外丢失。

•解决方案：FastGene软件具有自动保存功能，数据通常暂存在安装目录的“AutoSave"文件夹中。建议定期手动备份实验数据。避免在实验运行时强行关闭软件进程。

问题14：扩增曲线在后期出现下降趋势（向下弯曲）。

•解决方案：这可能是由于试剂中荧光染料浓度过高导致的荧光自淬灭，或是反应体系中某些成分（如镁离子浓度）在长时间高温下发生变化。尝试稀释模板或优化反应体系成分。

问题15：进行多重荧光检测时，不同通道之间的荧光信号发生串扰（Cross-talk）。

•解决方案：在软件设置中，启用“颜色补偿（ColorCompensation）"功能，并运行标准补偿矩阵进行校正。确保引物和探针的浓度比例适当，避免某一通道荧光过强而溢出至相邻通道。

问题16：PCR板的边缘孔位与中心孔位的Ct值存在系统性偏差。

•解决方案：这被称为“边缘效应"，通常由热传导差异引起。本仪器的温控均一性佳，若出现此情况，多半是热盖压力不均或耗材变形所致。确保使用高质量的平整耗材，并在实验前校准热盖压力。

问题17：无法导出PDF格式的报告。

•解决方案：检查电脑是否安装了PDF虚拟打印机。若未安装，请先下载并安装AdobePDF或类似的虚拟打印驱动程序。

问题18：基因分型（SNP）实验中，纯合子和杂合子未能全分开。

•解决方案：调整探针的终浓度，过高的探针浓度可能导致杂合子信号偏向某一种纯合子。优化退火温度，或使用高分辨率的探针分型试剂盒。

问题19：仪器底部滤光片表面有灰尘或污渍。

•解决方案：滤光片的清洁度直接影响荧光检测。在断电状态下，使用专用的镜头纸或无尘棉签蘸取少量无水乙醇，轻轻单向擦拭。切勿使用粗糙纸张或用力按压。

问题20：如何验证仪器的光学系统是否校准正常？

•解决方案：使用仪器自带的“OpticalCalibration"功能，放入专用的校准耗材（如带有稳定荧光染料的毛细管或板），运行校准程序。建议每3-6个月进行一次光学校准，或在移动仪器后必做校准。

关键词：荧光定量PCR仪、FastGeneqFYR说明书、NipponGeneticsqPCR、Real-TimePCRSystem中文指南、qPCR原理与应用、荧光定量PCR操作步骤、HRM高分辨率熔解曲线分析、qPCR常见问题解答、FastGene仪器耗材兼容、绝对定量与相对定量PCR、TaqMan探针法qPCR、SYBRGreenqPCRprotocol、分子生物学核酸定量设备、PCR熔解曲线troubleshooting、基因表达量分析仪器、SNP基因分型操作步骤、实验室PCR仪维护与保养、qPCR荧光信号异常处理、FastGeneqFYR软件使用教程、高精度荧光定量PCR系统。

更多产品信息，请联系中国区域代理商：上海起发实验试剂有限公司

（注：本文内容基于品牌公开资料及行业常规信息整理，具体以品牌信息文档为准。

🔖产品目录