Akoya Biosciences空间生物学试剂与多重荧光解决方案

▎01 公司介绍

Akoya Biosciences专注于空间生物学与组织水平蛋白表型分析，提供多重免疫荧光染色试剂、预设计抗体组合、信号放大耗材以及适配成像系统的配套方案。产品体系围绕组织样本中的多个蛋白标志同时定位展开，覆盖福尔马林固定石蜡包埋样本、冻存样本及细胞制片等多种实验对象。

品牌相关试剂可配合多光谱成像与单细胞空间分析流程使用，形成从抗原修复、一抗孵育、酶标二抗或检测元件结合、酪胺信号沉积、光谱拆分到图像定量的一体化路径。研究场景包括肿瘤免疫微环境、炎症与免疫分型、神经系统蛋白分布、药物研究中的组织生物标志物验证等。

在上海起发实验试剂有限公司作为特约代理经销商的供应体系中，可对接Akoya常用Opal荧光试剂、PhenoCode Signature抗体与组合盒、抗原修复及封闭稀释缓冲液、多光谱DAPI复染耗材，并根据实验平台与标本类型提供选型建议。

▎02 核心优势

01｜多重蛋白同片检测能力  

通过分轮一抗、二抗或条码化检测元件结合，配合不同发射波长的Opal荧光底物，可在同一张组织切片上完成多个标志的先后显色。相比传统单标免疫组化，能够保留各标志的空间共定位关系。

02｜酪胺信号放大与光谱拆分适配  

Opal系列采用酪胺信号放大思路，在辣根过氧化物酶催化下将荧光底物沉积于靶位附近，提高弱表达蛋白的可检测性。配合多光谱成像系统时，可按各荧光通道建立光谱库，进行通道分离，减少串色影响。

03｜预设计组合与单组件并行  

既提供已搭配抗体、荧光底物、封闭液、稀释液和检测器的PhenoCode Signature组合盒，也提供单个Opal染料、单个PhenoCode Signature抗体、偶联试剂盒及抗原修复液，便于新建方法或补充已有面板。

04｜手动与自动化兼容  

部分Opal试剂与PhenoCode组合可按照手动染色缸、湿盒流程执行，也可在适配的自动染色平台上运行。放大稀释液、二抗聚合物、微波抗原修复步骤可按平台调整。

05｜FFPE样本工作流成熟  

从烤片、脱蜡、水化、抗原修复、封闭、一抗、酶标元件、Opal显色到微波剥离和DAPI复染，均有可落地的标准顺序，适合回顾性临床样本与队列组织芯片验证。

▎03 热门产品介绍

01｜Opal 520 Reagent Pack  

◇ 产品品名：Opal 520 Reagent Pack  

◇ 货号：FP1487001KT  

◇ 主要组成：Opal 520干粉1瓶；DMSO 1×100 μL。  

◇ 产品特点：用于多重免疫荧光中的520 nm通道信号建立。干粉形式便于运输与分批使用；随包提供DMSO用于复溶。资料所列峰值激发约494 nm，峰值发射约525 nm。按推荐方法可用于手动或自动多重免疫组化，单包标称最多约50张切片，实际用量受切片面积、孵育体积和平台影响。  

◇ 存储条件：未复溶Opal干粉避光存于－20℃；DMSO原瓶按标签要求存放，短期可于4℃稳定至标签有效期。复溶后Opal溶液避光存于4℃，自复溶日起90天内使用。工作液建议现配现用，不长期保存；若室温短暂放置应按标签与质控要求评估，不建议继续用于重要样本。  

◇ 工作原理：组织经抗原修复并加一抗后，使用HRP标记二抗或对应酶标检测元件结合靶位；加入Opal 520工作液，HRP催化酪胺底物在抗原附近沉积荧光分子。完成一轮显色后，通过微波或热处理剥离抗体复合物，再进行下一标志染色，最后以多光谱成像采集520通道信号并作光谱拆分。  

◇ 使用方法：  

　① 烤片、脱蜡、梯度乙醇水化，按样本与一抗要求选择AR6或AR9等抗原修复液进行热修复并冷却。  

　② 用Antibody Diluent／Block或实验验证过的封闭液处理切片，减少非特异性结合。  

　③ 加已优化浓度的一抗，按抗体说明书孵育、洗涤。  

　④ 加HRP标记二抗聚合物，如Opal系统配套的Ms＋Rb HRP聚合物，室温约10分钟，TBST洗涤。  

　⑤ 取Opal 520干粉用附带DMSO按标签体积复溶；用1X Plus Amplification Diluent手动按约1:100配制工作液，自动平台按对应自动化放大稀释液约1:150配制；每张切片加100～300 μL，室温约10分钟，TBST洗涤。  

　⑥ 按修复液与微波参数进行抗体剥离，再进行下一标志；全部标志完成后用Spectral DAPI复染核，抗淬灭封片。  

　⑦ 在PhenoImager等兼容多光谱系统建立520通道光谱库，采集并定量。

02｜Opal 570 Reagent Pack  

◇ 产品品名：Opal 570 Reagent Pack  

◇ 货号：FP1488001KT  

◇ 主要组成：Opal 570干粉1瓶；DMSO 1×100 μL。  

◇ 产品特点：提供约550 nm激发、570 nm发射的荧光通道，适合与520、620、690等Opal染料搭配构建多色面板。干粉包装，复溶后用于TSA多重显色。资料中可执行手动与自动化流程，常用于肿瘤免疫、淋巴细胞分型、巨噬细胞与粒细胞标志共染。  

◇ 存储条件：未复溶干粉避光－20℃；短期室温暗处不超过7天通常不影响性能。复溶后溶液若以DMSO或ddH2O配制，避光4℃保存，按标签在3个月内使用。工作液4℃避光配制后24～48小时可用，但不建议冷冻；若需当天多轮使用，应减少光照并尽快完成成像。  

◇ 工作原理：与Opal 520相同，基于HRP催化酪胺沉积。570通道荧光分子在靶位累积，提高低丰度蛋白可视性。每完成一轮后利用抗原修复缓冲液与微波热处理去除前序一抗、二抗及酶标复合物，使后续标志不受残留抗体干扰，实现同片多轮叠加。  

◇ 使用方法：  

　① 切片脱蜡水化后，用AR6或AR9进行抗原修复；不同一抗对酸碱修复条件要求不同，应预先单标优化。  

　②  hydrophobic barrier pen圈定组织，加Antibody Diluent／Block如ARD1001EA封闭约10分钟。  

　③ 加一抗，按验证浓度与时间孵育，TBST洗3次。  

　④ 加Opal Polymer HRP Ms＋Rb如ARH1001EA，室温10分钟，TBST洗3次。  

　⑤ 用1X Plus Amplification Diluent产品号FP1498手动按1:100，或用1X Plus Automation Amplification Diluent产品号FP1609自动按1:150配制Opal 570工作液；每片加100～300 μL，室温10分钟，TBST洗3次。  

　⑥ 将切片放入含AR缓冲液的Opal染色罐如STJAR4，微波高火约45秒、低火约15分钟进行剥离，冷却后开始下一标志。  

　⑦ 末轮完成后用Spectral DAPI复染，抗荧光淬灭封片，在PhenoImager系统按570光谱库采集。

03｜PhenoCode Signature Activated TIL Status Human Protein Panel  

◇ 产品品名：PhenoCode Signature Activated TIL Status Human Protein Panel  

◇ 货号：PCSPP003  

◇ 主要组成：资料所列组件包括Anti-Hu Pan-Cytokeratin、Anti-Hu CD3e、Anti-Hu CD8、Anti-Hu Ki67、Anti-Hu Granzyme B等PhenoCode Signature抗体；对应HRP条码检测器PCSD066、PCSD080、PCSD026、PCSD047、PCSD041；Opal 480、570、620、690及TSA-DIG、780试剂；10X Spectral DAPI即FP1490；1X Antibody Diluent／Block即ARD1001EA或200035；1X Plus Automation Amplification Diluent即FP1609；PhenoCode Signature Diluent即PCSA1001；N Blocker、J Blocker、S Blocker、PhenoCode Signature Blocker 1与Blocker 5；DMSO及其他辅助试剂。  

◇ 产品特点：面向人FFPE样本的可配置多重免疫荧光组合，基础5个标志覆盖上皮、T细胞、细胞毒T细胞、增殖与颗粒酶B功能状态，缓冲与检测器余量可支持增加1个自选标志，形成6重左右工作流。抗体带独特条码，配合条码化HRP检测器，减少传统二抗多轮加入的复杂操作。资料标称最多约20张切片，适合小队列方法建立与微环境初步验证。  

◇ 存储条件：PhenoCode Signature检测器按资料要求－20℃保存，避免超过5次冻融；抗体、封闭剂、稀释液、Opal试剂与DAPI分别按各组件标签温度存放，Opal干粉避光－20℃、复溶后避光4℃，DAPI与含酶组件避免反复室温暴露。到货后应核对每支管标签有效期与冻存条件，分装使用。  

◇ 工作原理：每个PhenoCode Signature抗体携带可识别寡核苷酸条码，与对应HRP标记检测器结合；一抗结合组织抗原后，通过条码‑检测器形成HRP局部富集，再加入Opal荧光底物完成酪胺沉积。不同标志按次序进行杂交、显色与温和重置，配合多光谱成像和DAPI核复染，获得TIL活化状态的空间分布数据。相比反复加物种二抗，条码方式可减少部分交叉结合步骤。  

◇ 使用方法：  

　① 根据组织类型确定增加标志，如从PhenoCode Signature菜单选S650系列单抗体，或使用PCSP0200偶联自选抗体；若增加第6个荧光通道，可按成像通道补充Opal 520等产品。  

　② 切片按FFPE常规烤片、脱蜡、水化，选择各标志兼容的AR6／AR9修复方案。  

　③ 用套装内Blocker与Antibody Diluent／Block进行组织封闭，按PhenoCode Signature Diluent配制一抗。  

　④ 依次加入条码化一抗，结合对应HRP检测器，用FP1609等放大稀释液配制Opal工作液显色；每轮之间按协议重置，未使用条码二抗的传统步骤可并入微波剥离。  

　⑤ 全部标志完成后用FP1490 Spectral DAPI按1X或资料浓度复染，抗淬灭封片。  

　⑥ 在PhenoImager HT、Fusion等兼容系统建立各Opal与DAPI光谱库，进行细胞分型、CD8＋Granzyme B＋活化TIL比例、Ki67增殖指数及PanCK区域共定位分析。自动平台如Leica BOND RX须按对应软件版本与协议验证。

▎04 解决实验中的常见问题

01｜单标免疫组化难以还原细胞邻域关系  

常规DAB单标一次主要显示一个标志，多个标志需连续切片，会受到切片位置偏移影响。Opal多重与PhenoCode组合在同一张切片完成多标志，可分析CD3、CD8、Granzyme B、Ki67与PanCK的空间距离和共表达比例。

02｜弱表达蛋白信号不足  

部分免疫检查点、活化分子或基质标志在FFPE中表达量低。Opal采用酪胺沉积方式放大局部荧光，可在优化一抗浓度和显色时间后提高信噪比，但仍需以单标预实验确定背景区间。

03｜多色荧光串色与通道重叠  

多激光或宽场多色常因发射谱重叠造成误判。Opal配合多光谱系统可先建单染料光谱库，再对混合切片做线性拆分；选择520、570、620、690等间隔通道并预留DAPI核通道，有助于降低补偿压力。

04｜人工多轮二抗操作繁琐  

传统多标需不同物种二抗轮流加入，容易因物种交叉产生背景。PhenoCode Signature以条码抗体加对应HRP检测器替代部分二抗轮次，减少手动换二抗步骤，也便于在自动染色仪上固化流程。

05｜回顾性临床样本方法重复性差  

FFPE保存时间、固定时长、修复液pH、微波功率均会影响抗原回收。Akoya的AR6、AR9、统一放大稀释液、封闭块与Opal标准化包装可将变量收拢；特约代理上海起发实验试剂有限公司可按样本类型提供货号清单与批次核对，减少因组分混乱造成的重复失败。

▎05 购买产品常见疑问与解答

01｜如何确认所需Opal货号？  

先统计目标标志数量与成像系统通道。若系统支持480、520、570、620、650、690、780等Opal通道，再按单标志选对应Reagent Pack；单独补充520可选FP1487001KT，单独补充570可选FP1488001KT。多色组合应预留DAPI与空白光谱片。

02｜手动与自动染色货号是否通用？  

Opal干粉试剂可在两类流程使用，但放大稀释液不同：手动资料常用1X Plus Amplification Diluent产品号FP1498，自动常用1X Plus Automation Amplification Diluent产品号FP1609。购买前说明所用染色仪型号，由上海起发实验试剂有限公司核对清单。

03｜PhenoCode组合能否自行加减标志？  

PCSPP003等Signature组合提供基础抗体与余量缓冲，可增加1个自选标志；若菜单外抗体，可购Antibody Conjugation Kit for PhenoCode Signature产品号PCSP0200进行偶联，或委托技术方条码化。增加新Opal通道需确认成像系统光谱覆盖。

04｜干粉Opal到货后短期未入－20℃能否用？  

资料对部分Opal规定未复溶干粉暗处室温少于7天通常不影响性能；但到货后应尽快按标签转入－20℃避光。若运输延迟或温度记录异常，应先与上海起发实验试剂有限公司沟通，不擅自用于关键队列。

05｜复溶后颜色不均或有凝胶感怎么办？  

Opal干粉与DMSO复溶后颜色可有差异，不一定代表失效。若4℃保存后出现凝胶感，可按标签室温回温约10分钟，轻涡不超过10秒，瞬时离心后观察；仍浑浊或超期则不再用于正式片。

06｜FFPE老样本信号弱如何选修复液？  

可先按目标蛋白文献与抗体说明选择AR6酸性或AR9碱性修复；同一多色面板中不同标志修复条件不一致时，需要设计预实验确定折中方案。购买时可一并确认AR6、AR9、STJAR4染色罐及对照片耗材。

07｜能否用于小鼠组织？  

Opal通用多重流程可配合鼠源一抗及对应二抗；PhenoCode Signature部分人用组合以人抗体为主，鼠样本需另选物种验证抗体。勿将人源检测抗体直接默认用于鼠组织，应提供种属与克隆信息给特约代理核验。

08｜多光谱成像系统不兼容某些Opal怎么办？  

不同PhenoImager、Vectra及第三方多光谱设备通道范围不同。订货前提供仪器型号、滤片组和已有光谱库，由上海起发实验试剂有限公司对照Opal 480／520／540／570／620／650／690／780参数筛选，避免购入无对应采集能力的染料。

09｜产品到货验收包括哪些？  

核对外箱温控、产品货号、瓶数、干粉／液体状态、有效期、SDS与说明书；Opal检查DMSO是否随包，PhenoCode组合检查抗体、检测器、Opal底物、DAPI、封闭液是否齐全。缺件或结霜异常应拍照并联系售后。

10｜实验失败如何排查？  

按单标到多标顺序复核：一抗浓度、修复液pH与温度、HRP聚合物时间、Opal稀释比、微波剥离功率、洗涤次数、DAPI浓度与封片抗淬灭性能。保留未显色对照、同型对照与单染料光谱片；由上海起发实验试剂有限公司协助对接Akoya技术资料与补货建议。

▎06 供应与经销服务

上海起发实验试剂有限公司作为Akoya Biosciences特约代理经销商，可提供上述Opal Reagent Pack、PhenoCode Signature单抗体与组合盒、抗原修复液、放大稀释液、封闭液、Spectral DAPI及PhenoImager配套耗材的询价、货期确认、到货验收与技术资料转交。订购时建议提供：样本类型、切片数量、目标标志、仪器型号、手动或自动流程、种属与预计项目周期，以便按真实货号整理包装清单。

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更多产品信息，请联系中国区域代理商：上海起发实验试剂有限公司

（注：本文内容基于品牌公开资料及行业常规信息整理，具体以品牌信息文档为准。）

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