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InGex.com是Ingex有限责任公司的所在地，也是TGIRT™-III独立酶和TGIRT™模板切换RNA-seq试剂盒的*授权销售商。

​TGIRT™-III Enzyme

TGIRT™-III酶

*规格:

•  10 Reactions (TGIRT10)
•  50 Reactions (TGIRT50)
•  5 x 50 µl (TGIRT5x50)
•  10 x 50 µl (TGIRT10x50)

单位定义：

• TGIRT的一个单元^® -III逆转录酶（RT）活性是酶的使用聚在60℃下聚合1纳摩尔的dNTP的在1分钟（RA）所需要的量/寡（dT）₄₂作为底物。

酶浓度：

• 200单位/μl

酶储存缓冲液：

• 20mM Tris-HCl（pH7.5），500mM KCl，1mM EDTA，1mM DTT，50％甘油

酶性质和新型活性：

• 比逆转录病毒逆转录酶更高的热稳定性，持续性和保真度，允许从高度结构化或严格修饰的RNA进行全长的端到端cDNA合成。¹

• 新的端对端模板切换活动，其能够在逆转录过程中连接RNA-seq或PCR适配器，并且不再需要单独的RNA 3' - 衔接子连接步骤。¹这种模板切换活动大大促进了链特异性RNA-seq文库的构建，其偏倚偏差小于使用随机六聚体引物的方法，或者使用RNA连接酶进行衔接连接。^1,4,7,8

• 退火引物有效的cDNA合成 将退火的引物应具有推测的T _米 > 60 ^ö下用在反应混合物中基板在室温下，通过加入dNTP的反应开始30分钟酶的建议预孵育。新应用的*条件应通过测试25至450 mM NaCl的盐浓度范围来确定。

酶的建议用途：

1. 综合股特异性转录组分析。⁸
2. 全细胞，外来体，血浆和其他无细胞RNA的RNA-seq。^7,8
3. miRNA和其他小型非编码RNA的分析。^1,11,14
4. 通过高通量测序鉴定RNA碱基修饰。^4,5,12,13
5. RIP-seq，HITS-CLIP，CRAC，​​核糖体分析。^1,9
6. 使用诸如SHAPE和DMS修饰之类的方法进行RNA结构映射。^1,15
7. 长cDNA的合成 ¹
8. RT-qPCR的。¹
9. 用于表征RNA-蛋白质相互作用的irCLIP。⁹
10. DMS-MaPseq用于全基因组或靶向RNA结构体内探测。¹⁵
11. FFPE肿瘤样本分析（咨询InGex）
12. 通过TGIRT®模板切换的单链DNA-seq（参见InGex）

酶的优点：

1. 综合转录组分析比传统方法更少的偏差。

   根据zui近的出版物，核糖核酸裂解的片段化通用人参考RNA样品的TGIRT-seq 概括了与非链特异性TruSeq v2相比较的人转录本和尖峰的相对丰度，优于链特异性Tru-Seq v3。TGIRT®-seq比TruSeq v3显着更强的链特异性，并消除TruSeq固有的随机六聚体启动的取样偏差。TGIRT®-seq显示更均匀的5'至3'基因覆盖，并识别比TruSeq更多的剪接点。TGIRT®-seq可以在与结构化小ncRNA（包括tRNA）相同的RNA序列中同时进行mRNA和mRNA的分析，这些tRNA基本上不存在于TruSeq数据集中。⁸

2. 全细胞，外来体，血浆和其他细胞外RNA的RNA-seq。

   快速处理时间（通过PCR步骤对RNA-seq文库构建<5小时）; 需要少量RNA（低ng范围）; 全面的转录谱，包括mRNA和lncRNA以及小ncRNA，包括tRNAs，pre-miRNAs和其他结构化小ncRNA的全长读数; 较常规方法较少的偏差和较大的链特异性。^7,8

3. 比逆转录病毒RT更高的持续性和链置换活性。

   • 使用锚定寡核苷酸（dT）引物构建多聚腺苷酸化RNA的RNA-seq文库，具有比没有核糖核酸步骤的逆转录病毒RT更均匀的5'至3'覆盖率。¹
   • 通过基于毛细管电泳的方法，如SHAPE或DMS结构图，通过显着的长度读取长度和比逆转录病毒RT更少的过早停止来实现RNA结构测绘。¹
   • 使得可以获得tRNA和其他小的ncRNA的全长的端到端cDNA，这些cDNA对于逆转录病毒RT是难治的。^4-7
4. 通过TGIRT®模板切换的RNA-seq文库构建，如miRNA分析，RIP-seq，HITS-CLIP，CRAC，​​核糖体分析等方法。

   快速处理时间（通过PCR步骤对RNA-seq文库构建<5小时）; 需要少量RNA（低ng范围）; 不需要RNA连接酶，通过在该过程中具有较少的步骤，偏倚较小并且更有效。

参考文献：

1. 1. Mohr，S.，Ghanem，E.，Smith，W.，Sheeter，D.，Qin，Y.，King，O.，Polioudakis，D.，Iyer，VR，Hunicke-Smith，S.Swamy， Kuersten，S.and Lambowitz，AM Thermostable group II intron reverse transcriptase fusion proteins and their use in cDNA synthesis and next generation RNA sequencing。RNA 19，958-970，2013。
   2. Collins，K。和Nilsen，T. Enzyme engineering through evolution：热稳定重组II内含子逆转录酶为RNA研究和生物技术提供了新的工具。RNA 19,1017-1018,2013。
   3. Enyeart，PJ，Mohr，G.，Ellington，AD和Lambowitz AM移动组II内含子及其逆转录酶的生物技术应用：基因靶向，RNA-seq和非编码RNA分析。 DNA 5：2，2014。
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   5. Shen，PS，Park，J.，Qin，Y.，Li，X.，Parsawar，K.，Larson，MH，Cox，J.，Chen，Y.，Lambowitz，AM，Weissman，JS，Brandman，O. ，和Frost，A.Rqc2p和60S核糖体亚基介导新生链的mRNA非依赖性伸长。科学347，75-78，2015年。
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   7. Qin，Y。，Yao，J。，Wu，D。，Nottingham，R.，Mohr，S，Hunicke-Smith，S.，Lambowitz，AM，High-throughput sequencing of human plasma RNA by using thermostable group II intron reverse酶。RNA 22，111-128，2016。
   8. Nottingham，RM，Wu，DC，Qin，Y.，Yao，J.，Hunicke-Smith，S.，and Lambowitz，AM RNA-seq of human reference RNA samples using a thermostable group II intron reverse transcriptase。RNA，22,597-613，2016。
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   14. Burke，JM，Kincaid，RP，Nottingham，RM，Lambowitz，AM和Sullivan，CS DUSP11对三磷酸化转录物的活性促进Argonaute与非病毒性病毒微小RNA的结合并调节细胞非编码RNA的稳态水平。基因与发育30，2076年至2092年，2016年
   15. Zubradt，M.，Gupta，P.，Persad，S.，Lambowitz，AM，Weissman，JS和Rouskin，S.DMS-MaPseq for genome-wide or targeted RNA structure probing in vivo。自然方法10.1038 / nmeth.4057，2016。

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