Agrisera AS11 1739 说明书

世界*实验材料供应商Agrisera正式授权上海起发为其中国代理，Agrisera 在一直是行业的*,一直为广大科研客户提供zui为的产品和服务,上海起发一直秉承为中国科研客户带来的产品，的服务， 签约Agrisera 就是为了给广大科研客户带来更加完善的产品和服务,您的满意将是我们zui大的收获

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Agrisera公司于1980年在瑞典成立，Agrisera公司一直致力于发展科学研究所需的蛋白抗体研发与销售，产品主要有：多种植物蛋白酶抗体，呼吸作用（线粒体）相关蛋白的多克隆抗体，Arabidopsis thaliana，Chlamydomonas reinhardtii ，以及其它一些较为稀有的蛋白抗体

ADGP | ADP-glucose pyrophosphorylase

ADGP | ADP-葡萄糖焦磷酸化酶

AS11 1739 | 克隆性：多克隆 | 主体：兔子 | 反应物种：A.thaliana，C. reinhardtii，H. vulgare，Polytomella sp。，Z. mays

应用实例

用蛋白质提取缓冲液PEB（AS08 300）提取10μg来自拟南芥 （1），Hordeum vulgare （2），Zea mays （3）总蛋白的总蛋白。样品用1X样品缓冲液（NuPAGE LDS样品缓冲液（Invitrogen），补充有50mM DTT并在70℃加热5分钟，并在加载前保持在冰上，蛋白质样品在NuPAGE4-12％Tris-双凝胶（Invitrogen）LDS-PAGE，并使用槽转移在PVDF上印迹1小时至1.5小时。在2％封闭试剂（GE RPN 2125; Healthcare）或溶解于20mM Tris的5％非脂肪乳中转移后，在室温搅拌下，将含有0.1％（v / v）吐温-20（TBS-T）的137mM氯化钠pH7.6培养1小时，将印迹以1：5000稀释（封闭试剂）在室温下搅拌1小时，倾出抗体溶液，短暂漂洗2次，然后用TBS-T在室温下搅拌洗涤1×15分钟和3×5分钟，将印迹在二抗（抗兔IgG辣根过氧化物酶偶联，推荐二抗AS09 602）稀释t 在室温下搅拌1〜25 000封闭试剂1小时。印迹如上所述洗涤。使用TMA-6（Lumigen）检测试剂根据制造商的说明书将印迹显影5分钟。使用CCD成像仪（FluorSMax，Bio-Rad）和Quantity One软件（Bio-Rad）获得印迹图像。

进行2D凝胶电泳以排除该抗体对Rubisco的交叉反应性

将WT-Col-0 拟南芥叶子在液氮中冷冻，将可溶性蛋白质在含有50mM HEPES，5mM NaCl和10mM MgCl 2的缓冲液中提取。通过非还原蓝色天然PAGE（5-12.5％）分离10μg和17μg天然蛋白质复合物，然后通过还原SDS-PAGE（15％用6M尿素）在第二维中进一步分离，并吸印1小时至使用Höefer半干吸墨纸的PVDF膜。在室温（RT）搅拌下，用TTBS中的2％牛奶将斑块封闭3小时。将印迹在+ 4℃下以1：2000稀释过夜孵育一次抗体。倾析抗体溶液，并在室温下用TTBS在搅拌下将印迹洗涤3×5分钟。将印迹在室温下搅拌下，在1％乳/ TTBS中稀释至1:25000的二抗（来自Agrisera AS09602的抗兔IgG 抗性马匹萝卜过氧化物酶）中温育2小时。印迹在TTBS中在TTBS中洗涤3×5分钟，并在室温下用TBS洗涤1x5分钟，并用ECL根据制造商的说明书显影5分钟。曝光时间为30秒。

来自芬兰图尔库大学的Lauri Nikkanen感谢

藻类样品的




蛋白质印迹来自莱茵衣藻菌株CC-124 （1），衣藻衣藻菌株CC43-48（STA6）（2）和Polytomella sp。的总蛋白质（40μg）Pringsheim 198.80 （3）在5-12％丙烯酰胺/ 6M尿素SDS-PAGE上分离，并印迹到硝酸纤维素膜上。在搅拌下，在含有5％低脂奶的T-TBS（0.1％Tween in Tris Buffer Saline）中，在室温（RT）下1小时封闭印迹。将印迹在1：2 500的稀释度下在*抗体中在搅拌下在室温下孵育1小时。倾析抗体溶液，并在T-TBS，RT搅拌下将印迹洗涤两次15分钟。将印迹在稀释至1:25000的二次抗体（山羊抗兔IgG，偶联的辣根过氧化物酶，Agrisera，AS09602）中，在室温下搅拌孵育 1小时。如上所述洗涤印迹并使用自制的增强化学发光系统（Durrant，Nature 346：297,1990）进行显影。使用CCD成像仪（ImageQuant LAS4000）获得印迹图像。

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