Avidity BirA生物素蛋白连接酶标准反应试剂盒说明书

Avidity，LLC于1996年由Millard Cull，Larry Lansing，Ron Gill博士和Mark Seville博士创立，基于生物素对抗生物素蛋白或链霉亲和素的非凡亲和力开发肽标签和分子生物学产品。在Affymax担任研究人员的同时，Millard参与了AviTag技术的发现，发现了其商业潜力，并获得了Affymax的*权利。他开始使用Avidity作为试剂公司，将AviTag技术的使用权授予其他公司，并销售与该技术一起使用的产品。

带有AviTag标签的人类全长ORF克隆已经被构建在多种T7和CMV启动子表达系统,可以立即购买使用。AviTag标签蛋白可以被体内或体外的生物素连接酶生物素化，而且抗生物素蛋白或链霉亲和素可以专一地与生物素结合，正基于这两个反应，AviTag?技术可以应用于蛋白的固定，纯化和显影。 虽然Avidity是一个小公司，科学带来的好处及其AviTag已得到认可。目前， AviTag技术已经在22个国家的世界制药公司和研究人员中得到认可。 

随着Avidity成熟，该公司正在扩大其科学视野，并调查使用生物发光 - 如在深海生物体中发现 - 使其产品对科学界更有用。Prolume有限公司的Bruce Bryan博士于2004年接触AvidTag与Prolume的高斯荧光素酶和绿色荧光蛋白（GFP）结合使用。*款高斯AviTag产品于2007年11月发布。

此外，Avidity正在与几家公司合作，通过将非常灵敏的光学传感器与基于荧光素酶的测定相结合，开发出新一代高度移动，简单，廉价且功能强大的诊断功能。结合BP蛋白质组学（新型测定生物化学），Prolume（发光/荧光分子和硬件创新专家），黑森林工程（光学器件工程），Avidity正在开发用于检测和鉴定的蛋白质和DNA微阵列生物芯片和生物传感器的疾病病原体和复合高通量筛选（HTS）。

  BirA生物素蛋白连接酶标准反应试剂盒

货号：BirA500 

品名：BirA-500: BirA biotin-protein ligase standard reaction kit

产品信息

生物素蛋白连接酶（BirA的EC 6.3.4.15）activates形成生物素生物素和5′- adenylate转移到生物素蛋白的生物素接受（如avitag™肽）。它也抑制功能的生物素操纵子。该基因编码的蛋白是由BirA的基因。

BirA生物素 - 蛋白质连接酶（EC 6.3.4.15）以和靶向的方式通过ATP中间体（生物素5'-腺苷酸）共价加入生物素受体肽/蛋白质中的d生物素。酶促生物素化蛋白质的下游应用是多样的，重要和有力的。*的生物素 - 抗生物素蛋白/链霉抗生物素蛋白相互作用通常用于亲和层析或蛋白质固定在表面或底物上。通过抗生物素抗体或抗生物素蛋白/链霉亲和素 - 报道酶结合物（-HRP，碱性磷酸酶）或荧光探针进行蛋白质检测成为可能。生物素化MHC分子的多聚体形式是免疫生物学中的常用工具。

当与我们的AviTag TM生物素受体肽氨基酸序列组合使用时，生物素化发生在天然大肠杆菌BCCP底物的两倍，比其他肽序列的生物素化多达一个数量级。因此，与其他可用序列相比，AviTagTM序列需要较少的BirA酶和较短的生物素化孵育时间才能完成。如果蛋白质不稳定或蛋白酶活动是关注的，这对下游成功可能是重要的。

我们的BirA酶是由birA基因编码的大肠杆菌野生型，并通过传统方法纯化至大于99％的纯度。

该酶的其他名称包括：生物素连接酶;生物素操纵子阻遏蛋白;的birA;生物素全酶合成酶;生物素 - [乙酰-CoA羧化酶]合成酶;生物素 -[乙酰辅酶A羧化酶]连接酶;生物素 -[乙酰-CoA羧化酶]合成酶;乙酰CoA高脱羧酶合成酶;乙酰CoA高脱羧酶合成酶;生物素：apocar​boxylase连接酶;生物素全酶合成酶;HCS。

试剂盒组成：

l 两瓶，每瓶20uL，1mg/mL BirA生物素蛋白连接酶（共40ug）

l 两瓶，每瓶1.5mL，BiomixA（0.5M双甘酯缓冲溶液，pH8.3）

l 两瓶，每瓶1.5mL，BiomixB（100mM ATP，100mM镁(OAC)2，500uM d-生物素）

l 两瓶，每瓶1.5mL，额外的BIO-200（500uM d-生物素）

储存条件：

试剂盒，干冰运输，-80度保存。如解冻后使用，4度保存。解冻后的酶可以在液氮中重新储存，-80度储存。

其他组份，biomixa，biomixb和bio-200，-20度长期保存。biomixa和bio-200，在4度可短期储存。Biomixb，-20度保存或者更低温度储存。

稳定性：生物素蛋白连接酶BirA，4度存放一个月，活性保留>80。长期保存-80度，每次解冻，酶活性降低10%。

实验步骤：

以700 µl纯化好的 MHC/peptide 复合物（1-2mg）为例，加入：100 µl BiomixA，100 µl BiomixB，100 µl d-biotin，10 µl BirA enzyme (30 µg)，0.5 ul pepstatin (2 mg/ml in DMSO)，0.5 µl leupeptin (2 mg/ml in dH2O)室温孵育过夜（反应液中不要有EDTA）

https://www.avidity。。ｃｏｍ/avitag/bira-500-bira-biotin-protein-ligase-standard-reaction-kit

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