Glycotech 平行板流室操作说明书

世界*实验材料供应商 GlycoTech正式授权上海起发为其中国代理， GlycoTech在一直是行业的*,一直为广大科研客户提供zui为的产品和服务,上海起发一直秉承为中国科研客户带来的产品，的服务，签约 GlycoTech就是为了给广大科研客户带来更加完善的产品和服务,您的满意将是我们zui大的收获

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GlycoTech始建于1991年，是美国国内的专注于糖复合物生物功能和医疗应用研究的生物公司。该公司建立有自己的研究项目，并开发了大量知识产权组合。另外，利用多年来发展的产品业务，GlycoTech建立了zui大的稀有糖类试剂和相关技术的数据库之一。

GlycoTech在过去的六年中一直与诺华制药公司（Novartis）维持着企业合作关系，目的在于共同开发一类可作为强效拮抗剂的糖配体小分子模拟物，这些模拟物能抑制移植诱导的再灌注损伤中发生的血液淋巴细胞的异常外渗现象。近期与Chiron公司签订了许可协议，允许其范围销售Glycotech专有的以抗糖类肿瘤标记物为基础的癌症诊断方面的产品。不仅如此，与国家卫生研究院，宾夕法尼亚大学，罗彻斯特大学和芝加哥神经外科和神经学科研研究院的合作项目也逐一得到开展。

GlycoTech正积极寻找其他的制药合作公司，可着重提供糖生物领域的一系列专业技术。GlycoTech公司的结构和发展策略都非常适合合作者快速得到*的专业知识，并且可以避免承担因公司内部发展引发固有财政责任的相关义务。

平行板流动室中的动态流动分析

流动检测可以在明确的壁面切应力下观察细胞粘附。细胞粘附的不同事件的可视化可以通过选择性图像采集和随后的图像处理来量化。流动测定法特别适合于研究粘附事件，该事件在比大多数静态粘附测定法更短的时间范围内发生得非常快。另外，可以研究初始事件之后的事件，例如细胞稳定和扩散，从而给出特定细胞 - 细胞或细胞 - 基底粘合剂行为的动力学的一些洞察。

 材料：

操作过程：

一、细胞单层制备

1.通过向每个培养皿中加入1ml5.5μg/ ml FN溶液来涂覆人纤连蛋白（FN）培养皿。

2.孵育30分钟。在室温下。

3.从每道菜中吸出溶液。

4. 根据达到汇合所需的时间，以0.5-3.0×10 ^5个细胞/ ml的接种密度向每个培养皿中加入2ml细胞悬浮液（Huvecs，CHO细胞）。

5. 1-5天后，在流动测定中使用具有融合单层的培养皿。饲养细胞每2-3天，但通常不48小时。的流量测定。

二、涂层基板制备

1.用标记笔在每个盘的中心划出用于涂布基材的涂布区域（5mm直径）。

2.加入20μl含10μg/ ml浓度底物的溶液至涂层区域。孵育1小时。

3.吸出液体，加入20μl1％BSA封闭1小时。

4.吸走BSA，加入20μl抑制剂1小时。

5.菜肴已准备好用于流动测定。

三、使用平行板流动室的流动分析

1.打开阶段培养箱和温热粘合介质至37°C 1小时。在开始流动测定之前。

2.将进口，出口和真空管路连接到流动室甲板上的流动系统装置。用介质填充系统并去除系统中的所有空气。

3.用细胞悬液填充入口储液器。对于使用细胞单层的测定，推荐10 ^6个 细胞/ ml。对于涂布的底物测定，使用10 ^5个细胞/ ml。

4.通过倒转甲板将碟子安装到流动室甲板上，在流道区域放置一小块培养基，然后将35毫米培养皿放在甲板上。真空将在甲板上举行。确保碟子在流路中没有气泡。

5.将组装好的腔室放在显微镜台上。

6.启动细胞的流式细胞注射器连接在0.1-4.0达因/厘米的范围内的剪切应力至出口流动室泵²。

7.让细胞流动足够的时间以获得足够数量的细胞与细胞单层或涂布的表面相互作用。一般3-10分钟。用来。

8.开始图像采集。在盘子上7-10个位置收集图像。通常，在给定实验条件下的3个盘子提供足够的数据以显示处理之间的统计差异。

9.在所有盘上获取图像后，执行图像分析以量化流动测定。

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