karlan  PAF7413说明书

产品详细信息：检测试剂盒： 检测试剂盒产品列表：auto PAF-AH
目录编号：	PAF7413
产品名称：	auto PAF-AH
描述：	血清（血浆）血小板活化因子（PAF）乙酰水解酶测定法。该测定法采用分光光度法，不需要任何样品预处理或使用任何放射性同位素。
数量：	每个（400个测试）
PDF档案：	PAF7413.PDF

血清（血浆）血小板活化因子 (PAF) 乙酰水解酶测定

仅供研究使用。不得用于诊断或治疗程序。

AZWELL 自动 PAF-AH

血清（血浆）血小板活化因子 (PAF) 乙酰水解酶测定

血小板活化因子 (PAF) 是由多种哺乳动物 cel 型合成的具有生物活性的磷脂。它是过敏和炎症反应的介质。PAF 被 PAF 乙酰水解酶 (PAF-AH) 转化为无生物活性的 lyso-PA，后者催化酯化醋酸盐在sn-2 位 PAF-AH 还降解与 PAF 结构相似、与动脉粥样硬化密切相关的氧化磷脂。这些观察结果表明，PAF-AH 在反应性、炎症性和动脉粥样硬化性疾病中起重要作用。在多种疾病中观察到人血浆或血清 PAF-AH 活性的变化。AZWELL 自动 PAF-AH是一种准确且方便的测定血清（血浆）PAF AH 活性的方法 [参考文献 1]。

[试剂]

R1: 200 mmol/L HEPES 缓冲液，pH 值  7.6.

R2A: 20 mmol/L 柠檬酸一水合物缓冲液，pH 4.5。

R2B: 1-肉豆蔻酰基-2-（4-硝基苯基琥珀酰基）磷脂酰胆碱，90 mmol/L。

[申请]

用于测定血清或血浆中 PAF-AH 的活性

[含量测定方法]

1. 方法

分光光度法

2. 原理[参考 1]

PAF-AH 水解  sn-底物的 2 位（1-肉豆蔻酰基-2-（4-硝基苯琥珀酰基）磷脂酰胆碱），产生 4-硝基苯琥珀酸酯。该化合物在水溶液中立即降解并释放 4-硝基苯酚。采用分光光度法监测释放，并通过吸收变化测定活性。

3. 特征

(1) 它不需要任何预处理  样品。

(2) 不需要放射性同位素。

(3) 适用于自动分析仪。

(4) 为液体产品（非冻干品），2-8 ℃ 可稳定 11 个月

(5) R2 溶液制备后可持续 14 天。

(6) 该测定法在高达 1500 IU/L 时呈线性。

(7) 不受多种酯酶的影响。

(8) 不受血红蛋白、胆红素或乳糜微粒的影响。

使用该测定法和自动分析仪，可以在数小时内测量成千上万份样本的活性。

[制备和程序]

1. 试剂制备

R1：使用提供的缓冲液。2–8 °C 下储存。R2：使用前按 19:1 的比例混合 R2A 和 R2B（例如：R2A，19 mL + R2B，1 mL）。在 2–8 ℃ 下储存。

小心！ 一旦 R2A 和 R2B 混合， 混合物 (R2) 必须在两个

周。请勿长期保存。

2. 测试程序

AZWELL 自动 PAF-AH预期用作试剂  基于上述原理的血清（血浆 PAF-AH 活性）测定。本试剂可与各种自动分析仪配合使用。以下是 Hitachi 7170 型自动分析仪的示例  (Hitach Ltd.,Tokyo,Japan)。使用试剂盒时，请阅读并遵守仪器制造商的说明手册。

程序 1（用于自动分析仪）

(1) 将下表参数输入自动分析仪程序后，自动进行下述分析程序。

测试样品 (2<unk>L) + R1 (240<unk>L) <unk>37 °C,5 min [0–5 min] <unk> 加入 R2 (80<unk>L) <unk>37 °C,5 min [5–10 min] <unk> 测量吸光度 [6–8 min] <unk> 计算 PAF AH 活性

吸光度：405 nm 和 505 nm 之间的差异试剂空白：纯化水或生理盐水

 (2)  Hitachi 917 自动分析仪参数

项目 输入

测试 [PAF-AH]

试验代码 [速率-A] [10] [21] [28] [0] [0]

波长（次/主峰） [505] [405]

样品体积 [2.0]

R1 体积 [240]

R3 体积 [80]

校准

校准方法 [线性]

标准

标准差（1）浓度-位置-体积 [0] [水 (99)][2.0]

K 因子

  确定您自己的 K 系数                       程序 2

(1) 2<unk>L 样品和 240<unk>L R1 等份试样为

混合，并在 37 ℃ 下预孵育 5 min。然后加入 80<unk>L R2 开始反应。加入 R2 后 1 和 3 min，在 405 和 505 nm（分别为主要和亚波长）处测量吸收。将 2<unk>L 水等份试样用作空白对照。

(2) 每分钟吸光度的变化用于

采用样品吸光度变化 (<unk>EA)、空白吸光度变化 (<unk>EB) 和 4-硝基苯酚消光系数之间的差异计算活性。

(3) 活性计算

PAF-AH 活性 (IU/L) = (<unk>EA–<unk>EB) <unk>V<unk>10⁶/(<unk><unk>sv<unk>d)，其中：

V：反应混合液的终体积 (<unk>L)

10⁶：从摩尔到微摩尔的转变

<unk><unk>4-硝基苯酚 sv 的消光系数：样品体积 (<unk>L)

d：光路 (cm)

[样本]

• 血浆或血清可作为样本。采血后应尽快测定样本。
• 将样品保存在 2–8 °C。如果储存时间超过 24 小时，则冷冻样品。请勿反复冻融。

[绩效]

1. 灵敏度

(1) 试剂空白：小于 0.01 abs/min

(2) 灵敏度：0.02-0.06 abs/min，活性为 500 IU/L

2. 专属性

预期含量值的 90-110%

3. 重现性

变异系数：小于 5%

4. 以下潜在干扰物质几乎不影响含量测定值。[参考 2]

(1) 血红蛋白，高达 500 mg/100 mL

(2) 葡萄糖，上限 1000 mg/100 mL

(3) 尿酸，上限 50 mg/100 mL

(4) 尿素，高达 200 mg/100 mL

(5) 结合胆红素，上限 20 mg/100 mL

(6) 游离胆红素，上限 20 mg/100 mL

(7) 抗坏血酸，上限 50 mg/100 mL

[测量范围][参考文献 2] 10–1500 IU/L

[相关][ref 1] 样本：人血清

N = 100

R = 0.979

y = 15.877x + 14.884

X 轴：放射性同位素检测值

Y 轴：Azwell Auto PAF-AH 的值

[日本参考正常值]

低于 800 IU/L[参考 2]

[注意事项]

• 避免将试剂暴露于阳光直射下。将试剂储存在 2-8 ℃ 下。避免冷冻。请勿使用任何过期试剂。请勿混合任何不同批号的试剂。

2. 一旦制备 R2（R2A-R2B 混合物），将持续不超过 14 天。

3. 应小心处理样本以避免感染，因为样本可能含有传染性病原体，如 HBV、HCV 和 HIV。

• 用盐水或水稀释样品，如果样品活性超出测量范围，则再次测量其活性。
• 凝血可能堵塞样品探针。试验前除去任何可见凝块。
• 样品中的气泡可能会影响数值，因此避免起泡。
• 请勿重复使用试剂瓶，请勿将制剂、供试品溶液和试剂用于本文所述以外的任何目的。

8. R2A 或 R2 溶液的 pH 值为 4.5。丢弃时请用大量水冲洗，或根据您所在机构的规则或相关法律进行丢弃。

• R2B 中涉及的溶剂为易燃液体（乙醇）。避免在靠近火源处使用。
• 避免接触眼睛。如果发生这种情况，立即用大量水冲洗眼睛，然后去看医生。

[储存 ]

2–8 °C

[有效期]

11   月   之后 生产。   （失效日期   日期 i 在包装上注明。）

[供应体积]

R1: 60 mL ´ 2

R2A: 19 mL ´ 2

R2B: 2.2 mL ´ 1

[注]

仅供研究使用。不得用于诊断或治疗程序。

[参考文献]

[1] Kosaka T.、Yamaguchi M.、Soda Y.、Kishimoto T. Tago A.、Toyosato M. 和 Mizuno K. (2000) A 分光光度法 含量测定 针对 血清 血小板活化因子乙酰水解酶活性。Clinica Chimica Acta 296,151-161.

[2] Azwell,Inc. 的内部数据

[K 因子]

我们建议您使用自动分析仪或分光光度计、4-硝基苯酚和试剂 R1 和 R2A（不含 R2B 底物）测定您自己的 K 因子或 <unk>（摩尔消光系数），以精确估计 PAF-AH 活性。

标准分光光度计方案

如果您使用标准分光光度计进行 PAF-AH 测定，请参阅以下程序。

程序

(1) 混合 2<unk>L 样品和 240<unk>L R1 等份试样，并在 37 ℃ 下预孵育 5 min。事件

然后加入 80<unk>L R2 开始反应。加入 R2 后 1 和 3 min，在 405 nm 处测定吸收。2<unk>L 水等份试样也用作空白对照。

• 每分钟吸光度的变化用于计算活性，使用样品吸光度变化 (<unk>EA)、空白吸光度变化 (<unk>EB) 和 K 因子之间的差异。PAF-AH 活性 (IU/L) = (<unk>EA–<unk>EB) <unk>K

请确定您自己的 K 系数。您可以精确地制备自己的 4-硝基苯酚溶液，但是，您也可以使用以下设计用于设置 K 因子的市售试剂盒。

WAKO Chemicals，433-97501，K 因子校准品 4-硝基苯酚 (5 mL x 4)。可从 Wako Chemicals USA,Inc. 获得（www.wakousa。。ｃｏｍ)

如何计算 K 因子

(1) 测定对硝基苯酚溶液的浓度。（下表中的 Cs1、Cs2 和 Cs3）

• 使用空白溶液和 4-硝基苯酚溶液作为样品进行自己的测定，并测定各吸光度。      (n=5;      Ab,      Ab1,      Ab2,      和       Ab3       in       的       以下       表）   (在此检测中，您必须使用 R2A 而非 R2。然而，当您估计样本时，请在检测中使用 R2。R2 表示 R2A-R2B 混合物比例为 19:1。）

(3) 计算 Ab、Ab1、Ab2 和 Ab3 的平均值。

(4) 空白校正（-空白）：分别从 Ab1、Ab2、Ab3 的平均值中减去 Ab 的平均值。

(5) 计算 Cs2 和 Cs3 的相对吸光度（空白校正后），其中 Cs1（空白校正后）视为 100。使用以下公式。

Cs2（或 Cs3）的相对 Abs = [Cs1/Cs2（或 Cs3）] X [Cs2（或 Cs3）的 Abs/Cs1 的 Abs] X 100

(6) 计算 Cs1、Cs2 和 Cs3 的 K 系数

例如。Cs1 的 K 系数 = [Cs1 浓度 (mmol/L)/空白校正后 Cs1 的平均 Abs] X 10⁷

(7) 确定 K 系数（上述 K 系数的平均值）

计算 Cs1、Cs2 和 Cs3 的平均 K 系数，并将其用作终 K 系数。但是，如果步骤 6 中计算的任何相对吸光度不在 100.0±3.0% 范围内，则从平均计算中排除该 K 系数，以获得终 K 系数。

通常，K 系数必须为 11,000-13,000。（光路 = 1 cm，样品：R1:R2

体积比 = 2:240:80）

示例

K = (11987+12188+12038)/3 = 12071