Prokazyme 2027年授权代理商

Prokazyme主营耐热型分子生物学酶试剂，包含DNA连接酶、多核苷酸激酶、磷酸化试剂盒等品类，能够解决高温连接效率不足、分步酶促反应操作繁琐、核酸末端标记活性偏低等分子克隆与核酸探针制备实验问题。本文围绕该品牌产品线、三款热门试剂、常见实验痛点与对应方案、使用疑问展开说明，为科研人员筛选耐热核酸酶试剂提供参考。

📌 下图为上海起发实验试剂有限公司作为冰岛Prokazyme授权代理商的授权书

 一、公司与业务介绍

 1、业务范围

① 业务聚焦于耐热型重组酶的研发与制备，产品覆盖DNA连接、核酸末端磷酸化、去磷酸化等分子生物学基础操作，适配基因合成、探针同位素标记、分子克隆、连接酶链式反应等科研场景。

② 目前，产品线包含热稳定DNA连接酶、多核苷酸激酶、一体化磷酸化试剂盒三大主线，所有酶制剂均经过纯度检测，去除非特异性核酸酶残留，保障酶促反应稳定性。

 2、产品线构成

① 热稳定DNA连接酶系列：包含Rma DNA连接酶、Tsc DNA连接酶两款主力产品，均为NAD+依赖型双链DNA连接酶，适配高温高严谨性连接反应，仅对粘性末端发挥连接活性，不催化平末端连接。

② 多核苷酸激酶系列：以ThermoPhage™多核苷酸激酶为核心，具备高温催化活性，可完成DNA与RNA的5'端磷酸化，同时带有3'磷酸水解活性，满足核酸末端修饰需求。

③ 一体化酶试剂盒：Ice and Fire磷酸化试剂盒将碱性磷酸酶与多核苷酸激酶预混，实现一管完成去磷酸化与磷酸化两步反应，简化实验流程。

 3、质量管理体系

① 每批次酶制剂均配套出具检测报告，对酶活、核酸酶残留、温度稳定性、盐离子耐受度进行逐项检测，保证批次之间活性波动处于合理区间。

② 液态酶产品均添加稳定剂与保护组分，降低反复冻融带来的活性衰减，符合现行版说明书中规定的质量控制标准。

 4、与授权代理商的合作关系

上海起发实验试剂有限公司作为授权代理商，承接该品牌全系耐热酶试剂的供货业务，保障货源稳定，严格遵循产品储运条件完成货物流转，保证酶制剂到达实验室时活性不受影响。

 二、热门产品介绍

 1、dlig120L｜Rma DNA ligase

① 品名与货号：Rma DNA ligase（货号dlig120L），来源于Rhodothermus marinus的重组热稳定DNA连接酶，规格为2000单位。

② 产品特点：属于NAD+依赖型连接酶，最适反应温度区间更宽，高温条件下依旧保持稳定催化能力；仅识别双链DNA粘性末端，不会产生平末端非特异性连接，降低克隆背景；对高盐环境具备一定耐受度，适配高严谨性基因合成实验。

③ 存储条件：原液长期储存于-15℃至-25℃环境，避免反复冻融；缓冲液组分可短期放置于2–8℃冷藏；复溶分装后的小份酶液建议单次用完，减少活性损失。

④ 工作原理：依靠Mg²+作为辅因子，以NAD+作为能量供体，催化双链DNA粘性末端5'磷酸基团与3'羟基之间形成磷酸二酯键，修复DNA链缺口，完成DNA片段共价连接；在高温条件下可抑制非特异性碱基配对，提升连接精准度。

⑤ 使用方法：按照体系配比加入10×配套反应缓冲液、DNA底物、NAD+辅因子与酶液；设置反应温度在55–65℃，孵育30–90分钟；反应结束后可通过升温至75℃完成酶的热灭活，无需额外纯化步骤。

⑥ 适用检测场景：重叠寡核苷酸拼接的基因合成、高严谨性粘性末端分子克隆、双链DNA缺口修复、连接酶链式反应（LCR）等高温酶促连接实验。

 2、pnk169L｜ThermoPhage™ Polynucleotide Kinase

① 品名与货号：ThermoPhage™ Polynucleotide Kinase（货号pnk169L），来源于噬菌体RM378的热稳定多核苷酸激酶，规格为1000单位。

② 产品特点：最适反应温度达到60–70℃，短时间孵育可设置70℃，长时间反应选用60–65℃；兼具5'端激酶活性与Mn²+依赖的3'磷酸水解活性；仅在低盐环境下保持高活性，不受短链核酸底物限制，可同时修饰DNA与RNA分子。

③ 存储条件：酶原液长期保存于-20℃低温冰箱，配套缓冲液避光冷藏；运输全程使用干冰冷链，避免温度波动造成酶活下降；开瓶后分装为单次用量，减少冻融次数。

④ 工作原理：将ATP分子γ位的磷酸基团转移至核酸分子5'羟基末端，完成核酸末端磷酸化修饰；在Mn²+存在条件下，还可以水解核酸3'端磷酸基团，实现核酸末端去磷酸化；高反应温度可以减少核酸二级结构带来的底物结合阻碍。

⑤ 使用方法：在反应体系中加入10×PNK缓冲液、核酸底物、ATP与酶制剂；短时间标记实验置于70℃孵育30–60分钟；长时间修饰实验调整至60℃恒温；反应结束后置于冰上终止反应，也可加入EDTA螯合金属离子终止酶活。

⑥ 适用检测场景：同位素γ-32P-ATP标记核酸探针、寡核苷酸磷酸化预处理用于后续连接克隆、连接酶链式反应前引物末端修饰、核酸末端磷酸交换反应等实验。

 3、iaf170｜Ice and Fire Phosporylation Kit

① 品名与货号：Ice and Fire Phosporylation Kit（货号iaf170），包含碱性磷酸酶SAP与多核苷酸激酶PNK混合酶液，可完成50次独立反应。

② 产品特点：将两步酶促反应整合在同一反应管内，无需中途更换体系；SAP碱性磷酸酶可在70℃条件下快速热灭活，不会干扰后续PNK磷酸化反应；一管完成去磷酸化+末端磷酸化整套操作，大幅缩减实验耗时，降低核酸样品损耗。

③ 存储条件：整套试剂盒长期放置于-20℃保存，混合酶液避免反复冻融；缓冲液组分可在4℃冷藏保存3个月；试剂盒整体采用干冰冷链运输，保证酶活性稳定。

④ 工作原理：第一步依靠SAP碱性磷酸酶去除核酸5'端原有磷酸基团，完成去磷酸化；升温至70℃将SAP灭活，消除酶活干扰；第二步利用PNK多核苷酸激酶向核酸5'羟基端接入磷酸基团，完成末端修饰；全程无需更换反应体系，避免核酸样品转移带来的损失。

⑤ 使用方法：第一步配制反应体系，加入混合酶液与核酸样品，37℃孵育60分钟完成去磷酸化；继续升温至70℃保温15分钟灭活SAP；再加入ATP底物，70℃孵育30–60分钟完成5'端磷酸化；冰浴冷却终止反应，可直接进行后续纯化操作。

⑥ 适用检测场景：核酸探针放射性标记前的末端去磷酸化与磷酸化、合成寡核苷酸克隆前的末端修饰、小片段核酸样品的连续两步酶处理、微量核酸样本的一体化末端修饰实验。

 三、实验问题与对应解决

 1、高温基因合成时DNA连接效率偏低怎么办？

① 实验痛点：基因合成采用高退火温度拼接寡核苷酸片段，普通DNA连接酶在55℃以上活性快速下降，大量片段无法完成连接，拼接产物产量不足。

② 成因：常规T4 DNA连接酶最适温度仅为37℃，高温环境下酶蛋白快速变性失活，无法催化粘性末端磷酸二酯键形成。

③ 对应产品货号：dlig120L（Rma DNA ligase）。

④ 可观察的改善：将反应温度提升至60℃后，酶制剂依旧保持较高催化活性，粘性末端DNA片段连接产物总量明显提升，重叠寡核苷酸拼接得到的全长基因产物占比显著提高。

 2、核酸探针5'端标记时酶促反应活性不足怎么办？

① 实验痛点：使用普通多核苷酸激酶进行同位素标记，核酸存在二级结构，37℃孵育时酶难以结合底物，探针标记效率低，放射信号偏弱。

② 成因：低温条件下短链核酸容易形成发夹结构，酶无法充分接触5'羟基末端，磷酸化反应无法充分进行。

③ 对应产品货号：pnk169L（ThermoPhage™ Polynucleotide Kinase）。

④ 可观察的改善：将反应温度提升至70℃，核酸二级结构充分解链，酶与底物结合效率提升，相同孵育时间下核酸探针的磷酸化效率明显上升，最终检测得到的放射信号强度更高。

 3、分步做去磷酸化+磷酸化，核酸样品损耗严重怎么办？

① 实验痛点：先使用碱性磷酸酶处理核酸，纯化后再加入多核苷酸激酶进行磷酸化，两次移管与纯化操作会造成微量核酸大量丢失，小样本核酸几乎得不到合格产物。

② 成因：两步独立反应需要多次离心柱纯化，核酸在柱膜上发生不可逆吸附，样本回收率大幅下降。

③ 对应产品货号：iaf170（Ice and Fire Phosporylation Kit）。

④ 可观察的改善：全程在同一反应管内完成两步酶促反应，中间仅通过升温灭活前一种酶，无需核酸转移与纯化，微量核酸样本的产物回收率得到明显提升。

 4、连接实验中频繁出现平末端非特异性连接背景怎么办？

① 实验痛点：DNA片段连接后电泳检测出现大量杂带，大量平末端片段错误连接，增加后续筛选工作量。

② 成因：常规DNA连接酶同时催化粘性末端与平末端连接，体系中存在平末端片段时极易产生非特异性连接产物。

③ 对应产品货号：dlig120L（Rma DNA ligase）。

④ 可观察的改善：该酶仅对粘性末端具备催化活性，不会催化平末端片段连接，电泳杂带明显减少，阳性连接产物纯度更高，克隆筛选工作量随之降低。

 5、PNK磷酸化反应容易被高盐离子抑制怎么办？

① 实验痛点：核酸样品提取后残留较高浓度盐离子，加入多核苷酸激酶后催化活性大幅下降，末端磷酸化反应难以完成。

② 成因：常规多核苷酸激酶对盐浓度耐受度低，KCl、NaCl浓度超过50 mM时酶活性会受到强烈抑制。

③ 对应产品货号：pnk169L（ThermoPhage™ Polynucleotide Kinase）。

④ 可观察的改善：在中等盐浓度体系下依旧可以维持基础催化活性，降低了样品脱盐纯化的硬性要求，直接处理粗提核酸样品也可以获得稳定的磷酸化产物。

 6、SAP碱性磷酸酶无法灭活，干扰后续磷酸化反应怎么办？

① 实验痛点：分步酶处理时，碱性磷酸酶残留活性持续降解ATP底物，后续PNK磷酸化反应无法正常进行，实验结果不稳定。

② 成因：普通SAP酶热稳定性差，常规加热条件无法将酶全灭活，微量残留酶持续消耗ATP。

③ 对应产品货号：iaf170（Ice and Fire Phosporylation Kit）。

④ 可观察的改善：体系内配套的SAP组分可在70℃保温15分钟实现全热灭活，无残留酶活干扰后续PNK反应，两步连续酶处理的实验重复性明显提升。

 四、常见疑问与解答

 1、如何查询Prokazyme对应产品的货号？

答：可依据实验类型筛选产品线，DNA高温连接实验对应dlig系列，核酸末端磷酸化对应pnk系列，一体化两步酶处理对应iaf系列；每款产品的标准货号可在产品技术资料中核对确认。

 2、耐热酶制剂运输需要什么温度条件？

答：所有液态酶制剂均采用干冰冷链运输，全程保持低温环境；试剂盒内的缓冲液可在常温短途运输，长途运输建议随酶液一同低温冷链寄送，避免温度波动影响酶活性。

 3、酶制剂开瓶分装后，稳定性可以维持多久？

答：分装为单次用量并置于-20℃密封保存，未反复冻融的情况下，酶活性可维持12个月以上；若多次冻融，酶活会逐步衰减，建议缩短储存周期，尽快完成实验。

 4、Rma DNA连接酶能不能用于平末端DNA片段连接？

答：该酶仅催化双链DNA粘性末端的连接反应，不具备平末端连接活性，平末端片段连接不适合选用这款酶制剂，需要更换其他类型连接酶。

 5、ThermoPhage™ PNK可以同时处理DNA和RNA底物吗？

答：可以，这款多核苷酸激酶既可以修饰单链、双链DNA，也可以对RNA分子进行5'端磷酸化修饰，底物适用范围更广。

 6、Ice and Fire磷酸化试剂盒必须严格按照两步温度程序操作吗？

答：需要严格遵循温度设置，37℃完成去磷酸化，70℃保温灭活SAP酶；如果跳过灭活步骤，残留的碱性磷酸酶会持续去除新接入的磷酸基团，造成磷酸化反应失败。

 7、在哪里订购Prokazyme试剂，代理商是哪家？

答：上海起发实验试剂有限公司承接该品牌全系试剂供货，可提供目录内全部货号的产品，严格按照原厂储运标准完成货物交付。

 8、产品到货后发现酶活偏低，应该如何处理售后？

答：收到货物后先核对包装冷链是否完好，同时核对储存条件是否符合要求；保留批次检测报告与实验原始数据，提交对应问题反馈，按售后流程核对批次质量情况。

 9、Rma DNA连接酶反应结束后，除了升温灭活还有其他终止方式吗？

答：除75℃热灭活以外，也可以向体系内加入EDTA螯合Mg²+辅因子，切断酶促反应的必要条件，快速终止连接反应，两种方式均可达到同等效果。

 10、PNK磷酸化反应中，ATP的添加量需要控制在什么范围？

答：ATP的添加量控制在待标记核酸末端摩尔数的2–5倍，过量添加ATP不会明显提升磷酸化效率，还会增加后续核酸纯化的难度，按照该配比可兼顾反应效率与纯化便捷性。

更多产品信息，请联系中国区域代理商：上海起发实验试剂有限公司

（注：本文内容基于品牌公开资料及行业常规信息整理，具体以品牌信息文档为准。）

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