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 新闻动态
上海起发--trilink新技术CRISPR-Cas9的改良
点击次数:522 发布时间:2017-11-06
 

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CRISPR-Cas9的改良技术

                                -- 细胞特异性敲除与miNRA-Cas9开关

 

    近日,日本实验室发表了有关miRNA-Cas9开关与细胞特异性敲除的报告,他们将Trilink的修饰NTPs 结合到定制的Cas9 mRNA中,用于优化CRISPR Cas9 基因编辑在细胞特异性中的应用。

    目前,以DNA为基础的基因编辑发展迅速,尤其是CAR-T疗法Novartis’ Kymriah 和 Gilead’s Yescarta。但在某些应用程序中,成功的限制性因素在于其以细胞类型特有的方式运作的能力。研究小组选择了一种基于RNA的传递系统,以克服一些以DNA为基础的系统相关的安全问题,包括基因组整合系统的安全问题等。

    研究报道:为了调控Cas9的核酸内切酶活性,已几种方法,括光或小分子蛋白诱导系统、组织特异性启动子系统,和采用split-cas9转录调节电路。这些报导主要都是使用DNA传递方法。

    该研究团队设计一个基于mRNA的Cas9开关该开关是由细胞特异性microRNA(miRNA)调。具体来说,他们引进了miRNA互补序列Cas9 mRNA的5'端非编码区(见图1),假设通过检测异质性细胞内的内源性miRNA水平可以选择性地控制基因组编辑基因miRNA缺乏时,Cas9蛋白被翻译表达,当基因miRNA存在时,该蛋白翻译表达被抑制。

      研究报告显示,他们miRNA-cas9开关有效地和选择性地响应了HeLa细胞中的miRNA。同时,使用不同的标记mRNA,在人类诱导多能干细胞(hiPSCs)中都可看到类似的结果。      

    另外,使得惊喜的是,此系统也能够区分诱导和分化的神经元细胞胞,此功能可能将在临床应用中起重要作用。

    同时,为进一步优化相关领域,他们提出,可通过含有多个miRNA开关的Cas9系统实现,例如减少泄漏表达等。

     研究小组得出结论:系统应适用于其他Cas9变异(例如同源基因工程蛋白Cas9 / dCas9)和其他miRNA的即插即用方式。”这个功能和易用性可以很好地改良CRISPR-Cas9技术。

     特色产品: 5 -甲基, 假尿苷,和 反盖模拟(ARCA)看看trilink新产品ARCA, cleancap™在更多生物活性mRNA中具体比50%更高的封盖效率。

    后续将持续介绍Trilink相关CRISPR-Cas9技术产品资料,新产品ARCA, cleancap™相关信息。特别是zui爱欢迎的CleanCap™ Cas9 mRNA (modified)产品L-7206等介绍。

 

 

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