Rapid GolgiStain™ Kit中文说明书

 一、基础信息

- 货号：PK401  

- 英文名称：Rapid GolgiStain™ Kit  

- 中文名称：快速高尔基染色试剂盒  

- 规格：kit 

  本试剂盒为科研级产品，包含染色全流程所需试剂及耗材，适用于哺乳动物脑组织切片、原代神经元培养及细胞爬片的高尔基体染色。具体组分包括固定液、染色液A、染色液B、显色底物、洗涤缓冲液及封片剂，可满足30-50次实验需求。  

- 品牌：FD Neuroo Technologies  

- 适用领域：神经科学、药物研发及发育生物学研究，专用于神经元和胶质细胞的高尔基体形态学分析。  

 二、产品概述  

Rapid GolgiStain™ Kit 是基于改良Golgi-Cox技术的创新性染色试剂盒，旨在解决传统高尔基染色法耗时长、操作复杂、染色率低等痛点。通过优化试剂配方与工艺流程，本产品将染色周期缩短至1.5-2小时（传统方法需6-8小时），同时显著提升染色特异性与信号稳定性。其核心优势包括：  

1. 快速高效：全流程仅需1.5-2小时，支持高通量样本处理。  

2. 高灵敏度：可清晰显示直径≥5μm的神经元突触结构，树突棘分辨率达0.2μm。  

3. 兼容性广：适用于冷冻切片、振动切片、原代神经元培养及细胞爬片。  

4. 稳定性强：染色结果在避光条件下可保存6个月，无褪色或背景干扰。  

5. 安全性优化：采用低毒试剂配方，操作安全性显著提升。  

 三、成分组成与技术参数  

 1. 试剂组分  

- 固定液：由4%多聚甲醛与0.2%戊二醛组成的混合溶液，用于快速固定细胞结构，防止高尔基体形态降解。  

- 染色液A：含银氨络合物与氧化剂，选择性沉积银颗粒于高尔基体膜表面，增强结构对比度。  

- 染色液B：含还原剂（如对苯二酚）与稳定剂，催化银离子还原为金属银，形成高分辨率黑色沉淀。  

- 显色底物：含镍盐与缓冲体系，优化显色反应速率与终点控制。  

- 洗涤缓冲液：pH 7.4磷酸盐缓冲液（PBS），用于去除未结合试剂，减少背景干扰。  

- 封片剂：含抗荧光淬灭剂的甘油凝胶，适用于长期显微镜观察。  

 2. 技术参数  

- 染色时间：  

  - 固定：15分钟（室温避光）。  

  - 染色：45分钟（避光）。  

  - 显色：10分钟（避光）。  

- 样本兼容性：  

  - 脑组织切片：厚度50-100μm，推荐使用振动切片机或冷冻切片机制备。  

  - 原代神经元培养：培养3-7天的神经元，贴壁状态良好。  

  - 细胞爬片：需经多聚赖氨酸预处理以增强细胞贴壁。  

- 检测灵敏度：  

  - 高尔基体结构：可检测直径≥5μm的完整结构。  

  - 树突棘：分辨率达0.2μm，支持单细胞水平分析。  

- 保存条件：  

  - 试剂：2-8℃避光保存，避免冷冻，有效期12个月。  

  - 封片剂：-20℃冷冻保存，避免反复冻融。  

 四、使用方法  

 1. 样本制备  

- 脑组织切片：  

  1. 实验动物经深度麻醉后快速取脑，避免机械损伤。  

  2. 用预冷PBS冲洗表面血液，转移至含固定液的容器中，室温固定15分钟。  

  3. 弃固定液，PBS漂洗3次（5分钟/次）。  

- 原代神经元培养：  

  1. 弃培养基，PBS轻柔冲洗细胞2次。  

  2. 加入预冷4%多聚甲醛固定液，室温固定15分钟。  

 2. 染色流程  

1. 固定：  

   - 弃PBS，加入固定液（100μL/样本），室温孵育15分钟。  

   - 弃固定液，PBS漂洗3次（5分钟/次）。  

2. 染色液A处理：  

   - 加入染色液A（100μL/样本），避光孵育45分钟（室温）。  

   - 弃染色液A，PBS漂洗3次（5分钟/次）。  

3. 染色液B处理：  

   - 加入染色液B（100μL/样本），避光孵育10分钟（室温）。  

   - 弃染色液B，PBS漂洗3次（5分钟/次）。  

4. 显色：  

   - 加入显色底物（50μL/样本），避光孵育10分钟（室温）。  

   - 弃显色液，PBS漂洗3次（5分钟/次）。  

5. 封片：  

   - 滴加封片剂（50μL/样本），盖上盖玻片，室温固化1小时。  

 3. 显微镜观察  

- 使用普通光学显微镜（400×放大倍数）观察高尔基体结构。  

- 典型染色结果：高尔基体呈黑色颗粒状，突触结构清晰可见。  

 五、注意事项  

1. 操作安全：  

   - 染色液A含银盐，避免直接接触皮肤或吸入气溶胶。  

   - 实验全程需佩戴手套及护目镜，建议在化学通风橱内操作。  

2. 样本处理：  

   - 组织切片厚度需严格控制在50-100μm，过厚会导致染色不均。  

   - 固定时间不可超过20分钟，否则影响染色特异性。  

3. 试剂保存：  

   - 染色液B需避光保存，开封后建议分装冷冻以延长有效期。  

4. 质量控制：  

   - 每批次试剂附带阳性对照样本（含已知高尔基体密度的细胞系），用于验证染色效果。  

 六、应用场景  

1. 神经退行性疾病研究：  

   - 检测阿尔茨海默病、帕金森病模型中神经元高尔基体碎裂程度，评估疾病进展。  

2. 药物筛选：  

   - 评估化合物对神经元分泌功能的影响（如锂盐对双相情感障碍模型的疗效）。  

3. 发育生物学：  

   - 观察胚胎期神经元迁移过程中高尔基体动态变化，揭示神经发育机制。  

4. 环境毒理学：  

   - 分析重金属暴露对神经元高尔基体超微结构的损伤，评估环境毒素风险。  

 七、技术优势对比  

传统高尔基染色法与Rapid GolgiStain™ Kit的核心差异如下：  

- 染色时间：传统方法需6-8小时，本试剂盒仅需1.5-2小时。  

- 样本兼容性：传统方法仅限冷冻切片，本试剂盒支持脑切片、培养细胞及活体组织。  

- 信号稳定性：传统染色结果1周内褪色，本试剂盒染色结果6个月无褪色。  

- 操作复杂度：传统方法需多步手工操作，本试剂盒提供标准化流程。  

- 成本效益：传统试剂种类繁多，本试剂盒一体化设计降低成本。  

 八、常见问题解答  

Q1：染色后高尔基体信号弱怎么办？  

- 可能原因：固定时间过长或样本脱片。  

- 解决方案：缩短固定时间至15分钟内，使用多聚赖氨酸预处理载玻片增强细胞贴壁。  

Q2：背景染色过高如何解决？  

- 可能原因：洗涤不够或显色时间过长。  

- 解决方案：增加PBS漂洗次数至5次，严格控制显色时间（≤15分钟）。  

Q3：封片后出现气泡如何处理？  

- 建议：使用移液枪轻吹封片剂表面，或延长封片固化时间至2小时。  

 九、供应信息

供货商：上海起发

 十、储存与运输  

- 储存条件：  

  - 试剂：2-8℃避光保存，避免冷冻。  

  - 封片剂：-20℃冷冻保存，运输时需使用干冰。  

- 运输时效：  

  - 国内订单：3个工作日内送达（顺丰冷链）。  

  - 国际订单：7-10个工作日（DHL国际快递）。  

 十一、环保与安全  

- 废弃物处理：  

  - 含银废液需按《危险废物名录》分类收集，交由专业机构处理。  

  - 废弃试剂瓶使用后需清洗，避免残留污染。  

- 生物安全：  

  - 操作活体样本时需在生物安全柜内进行，遵循BSL-2级防护标准。  

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（注：本文内容基于品牌公开资料及行业常规信息整理，具体以品牌信息文档为准。）