Collagenase, Type 2 (CLS-2)中文说明书

一、基础信息

货号：LS004176  

英文名称：Collagenase, Type 2 (CLS-2)  

中文名称：2型胶原酶  

CAS号：9001.12.1  

规格：  1g、15g、100mg  

品牌：Worthington-Biochem  

产品类别：组织解离酶  

应用领域：生物医学研究、细胞培养、单细胞悬液制备、原代细胞分离等  

二、产品特性

1. 酶活性与纯度  

  - 2型胶原酶是一种高纯度重组蛋白酶，特异性靶向胶原蛋白的三螺旋结构，尤其对Ⅰ型和Ⅳ型胶原纤维具有高效水解能力。  

  - 活性单位：≥150 units/mg（基于牛跟腱胶原降解标准测定）。  

  - 纯度≥95%（通过SDS-PAGE检测）。  

2. 酶组分特性  

  - 含梭菌蛋白酶（Clostripain）活性，可辅助消化结缔组织中的其他蛋白成分。  

  - 低蛋白酶活性，减少对细胞表面蛋白的非特异性切割，保护细胞膜完整性。  

3. 稳定性  

  - 固体酶粉在-20℃避光保存可达24个月，液体酶溶液（如10×浓缩液）需分装冻存（-80℃），避免反复冻融。  

  - 工作液（如含5 mM Ca²⁺的PBS缓冲液）在4℃可稳定保存1周。  

4. 兼容性  

  - 适用于哺乳动物组织（如心脏、骨、肌肉、胸腺、软骨等）的原代细胞分离。  

  - 与DNA酶（DNase I）联用可有效减少细胞团块形成，提升单细胞悬液质量。  

三、应用领域

1. 单细胞悬液制备  

  - 适用组织：心脏、骨骼肌、胸腺、甲状腺、唾液腺等富含胶原纤维的组织。  

  - 操作流程：  

    - 组织碎至2-4 mm³碎块。  

    - 加入含2型胶原酶的消化液（推荐浓度：0.5-2 mg/mL），37℃振荡孵育30-90分钟。  

    - 终止消化：加入含血清的培养基中和酶活性。  

    - 过滤（70-100 μm滤网）后离心收集细胞。  

2. 原代细胞培养  

  - 用于分离胰岛细胞、成纤维细胞、角质形成细胞等，尤其适用于对细胞活性要求高的实验。  

3. 肿瘤研究  

  - 分离肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）及实体瘤中的浸润免疫细胞。  

4. 类器官模型构建  

  - 支持乳腺、肺等类器官的体外培养，促进组织结构的重建。  

四、技术参数

1. 理化性质  

  - 外观：白色或类白色冻干粉。  

  - 溶解性：易溶于含Ca²⁺的缓冲液（如PBS）。  

  - pH适用范围：6.0-7.5（最佳pH 7.0-7.4）。  

2. 酶活定义  

  - 1单位酶活定义为：在37℃、pH 7.4条件下，每分钟水解1 μmol牛Ⅰ型胶原所需的酶量。  

3. 推荐缓冲体系  

  - 基础缓冲液：HBSS（含5 mM Ca²⁺、0.5 mM Mg²⁺）。  

  - 增强方案：添加0.1% BSA或5% FBS以降低酶对细胞的非特异性吸附。  

五、使用说明

1. 消化步骤  

  - 组织预处理：用PBS冲洗组织去除血液，剪碎至均匀碎块。  

  - 酶解反应：  

    - 按组织重量1:5-1:10比例加入酶溶液（如1 g组织加5-10 mL酶液）。  

    - 37℃恒温振荡（200-250 rpm），消化时间根据组织类型调整（心脏/骨：60-90分钟；甲状腺/唾液腺：30-60分钟）。  

  - 终止消化：加入含10% FBS的培养基终止反应，冰上静置5分钟。  

2. 细胞收集  

  - 使用40 μm滤网过滤细胞悬液，离心（300×g，5分钟）后重悬于培养基。  

  - 台盼蓝染色检测细胞活性（活细胞率应≥85%）。  

3. 常见问题与解决方案  

  - 消化不够：延长孵育时间或补充DNase I（终浓度5 U/mL）。  

  - 细胞碎片过多：增加过滤次数或使用低浓度酶（0.1-0.5 mg/mL）。  

  - 细胞活性低：缩短消化时间，避免高温操作。  

六、注意事项

1. 储存与使用  

  - 避免反复冻融，建议分装后-80℃保存。  

  - 液体酶需避光保存，防止光氧化失活。  

2. 安全操作  

  - 本产品为生物活性酶，操作时需佩戴手套和实验服。  

  - 废弃物按生物危害废物处理。  

3. 质量控制  

  - 每批次提供活性检测报告及SDS-PAGE纯度验证结果。  

七、储存条件

- 固体酶粉：-20℃避光保存，保质期24个月。  

- 液体酶液：-80℃短期保存（建议分装后使用），避免反复冻融。  

八、质量保证

1. 活性验证：每批次通过胶原降解实验验证酶活性。  

2. 纯度检测：SDS-PAGE分析显示主带清晰，无显著杂质。  

3. 批次一致性：严格遵循ISO 9001标准生产，确保性能稳定。  

九、供应信息

供货商：上海起发

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（注：本文内容基于品牌公开资料及行业常规信息整理，具体以品牌信息文档为准。）