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xpressbio XPEH0852

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产品型号:
2'-5'-寡腺苷酸合成酶
产品报价:
产品特点:
xpressbio XPEH0852说明书

Human OAS1 (2'-5'-oligoadenylate synthase 1) ELISA Kit

人OAS1(2'-5'-寡腺苷酸合成酶1)ELISA试剂盒
目录号:XPEH0852
尺寸:48t/ 96t
反应性:人
范围:1.56-100ng/ml
灵敏度:<0.938ng/ml
应用:用于血清、血浆、组织匀浆等中OAS1的定量检测
  2'-5'-寡腺苷酸合成酶xpressbio XPEH0852的详细资料:

xpressbio XPEH0852说明书

Human OAS1 (2'-5'-oligoadenylate synthase 1) ELISA Kit

人OAS1(2'-5'-寡腺苷酸合成酶1)ELISA试剂盒

目录号:XPEH0852
尺寸:48t/ 96t
反应性:人
范围:1.56-100ng/ml
灵敏度:<0.938ng/ml
应用:用于血清、血浆、组织匀浆等中OAS1的定量检测
生物流体。
储存:4°C,6个月
注:仅供研究使用。
xpressbio XPEH0852成套元件

 

化验原理
本试剂盒基于三明治酶联免疫吸附测定技术。将抗OAS1抗体预涂于96孔板上。生物素结合抗OAS1抗体
用作检测抗体。标准品、试样及生物素共轭检测添加和未结合的结合物用洗涤缓冲液洗涤掉。TMB基板
用于观察HRP酶促反应。TMB被HRP催化产生蓝色。
添加酸性停止溶液后变为黄色的产品。黄色的密度是
与盘中采集的OAS1样本量成比例。读取O.D.吸光度
在微板阅读器中450纳米,然后可以计算出OAS1的浓度。
使用注意事项
1。检验实验操作的有效性和样品稀释的适宜性
比例、中试使用标准和少量样品
推荐。
2。打开后和使用前,保持板干燥。
三。在使用该套件之前,旋转管并将所有部件降到管底部。
4。储存TMB试剂时要避光。
5。洗涤过程非常重要,不充分洗涤容易造成假阳性。
6。建议对标准测试和样品测试进行重复试井。
7。不要让微量板在分析时干燥,因为干板会使活性成分失活。
板。
8。不要重复使用尖端和管子以避免交叉污染。
9。避免同时使用不同批次的试剂。
所需但未提供的材料
1。微板阅读器(波长:450纳米)
2。37°C培养箱
三。自动洗板机
4。精密单通道和多通道移液管及一次性针头
5。清洁管和eppendorf管
6。去离子水或蒸馏水
手洗
在不接触侧壁的情况下丢弃板中的溶液。把盘子拍打在吸收剂上
滤纸或其他吸收性材料。用350ul洗涤缓冲液完全填充每口井,并
浸泡1至2分钟,然后从盘子中吸取内容物,然后将盘子拍打在吸收剂上。
滤纸或其他吸收性材料。再重复此步骤两次,总共
三洗。

 

自动清洗
抽干所有井,然后用350ul洗涤缓冲液清洗三次。最后一次清洗后,
将板倒置,并将板拍打在吸收性滤纸或其他吸收性材料上。它是
建议将垫圈设置为浸泡1分钟。
样品收集和储存
收集后立即隔离试样,然后立即分析(2小时内)。或
等分并长期保存在-20°C。避免多次冻融循环。
血清:允许样品在室温下凝块2小时或在4℃前过夜。
以大约1000×g的速度离心20分钟。收集上清液并携带
马上化验出来。采血管应是一次性的、非致热的,并且
非内毒素。
血浆:用EDTA-NA2作为抗凝剂收集血浆。离心样品15个
在收集后30分钟内,在2-8°C下在1000×g条件下保持分钟。收集上清液
立即进行化验。避免溶血,高胆固醇样品。
组织匀浆:一般情况下,溶血性血液可能会影响结果,因此
应该用冰冷的PBS(0.01m,ph=7.4)冲洗组织,以清除多余的血液。
彻底地。纸巾应称重,然后切碎成小块。
在PBS中均匀化(体积取决于组织的重量。9毫升PBS
适用于1克组织块。建议加入一些蛋白酶抑制剂
在冰上放一个玻璃均质器。为了进一步破坏细胞,你可以用超声波
悬浮液用超声波细胞破坏或使其经受冻融循环。这个
然后匀浆以5000×g的速度离心5分钟,得到上清液。
细胞培养上清液:离心上清液20分钟,去除不溶性杂质
在2-8°C的温度下,在1000×g的温度下收集细胞碎片。收集干净的上清液并进行分析。
立即。
其他生物液体:在2-8°C下以1000×g的速度离心样品20分钟。收集
上清液,立即进行化验。
样品制备:样品应清晰透明,离心去除。
悬浮固体。
注:5天内使用的样品可在4°C下储存,否则必须储存样品。
在-20°C(≤1个月)或-80°C(≤2个月)下,以避免生物活性和污染的损失。
溶血样品不适用于本试验。
样品稀释指南
最终用户应首先估计试验样品中目标蛋白的浓度,以及
选择适当的稀释因子,使稀释后的目标蛋白浓度降到最宜。
套件的检测范围。用提供的稀释缓冲液稀释样品,并进行几次试验
在实践中可能是必要的。试样必须与稀释缓冲液充分混合。和
在实验前,还应制作标准曲线和样品。

 

高目标蛋白浓度(1000-10000ng/ml):稀释度:1:100。(即加入1μl
样品放入99μl样品/标准稀释缓冲液中。)
培养基靶蛋白浓度(100-1000ng/ml):稀释:1:10(即加入10μl
样品放入90μl样品/标准稀释缓冲液中。)
低靶蛋白浓度(1.56-100ng/ml):稀释:1:2(即加入50μl样品)
放入50μl样品/标准稀释缓冲液中。)
目标蛋白浓度极低(≤1.56ng/ml):不需要稀释,或1:2稀释。
试剂制备与贮存
使用前将所有试剂置于室温。
1,Wash Buffer:
用去离子或蒸馏法将30毫升浓缩洗涤液稀释至750毫升洗涤液中。
水。将未使用的溶液放回4°C。如果浓缩液中形成晶体,可以加热。
与40°C水浴(加热温度不应超过50°C)混合,轻轻搅拌至
晶体完全溶解了。溶液应冷却至室温,然后
使用。
2、标准:
1)。100ng/ml标准溶液:将1 ml样品/标准稀释缓冲液加入其中
标准管,保持室温10分钟,并充分混合。
2)。50ng/ml→1.56ng/ml标准溶液:用50ng/ml、25ng/ml标记6个eppendorf管,
分别为12.5ng/ml、6.25ng/ml、3.125ng/ml、1.56ng/ml。分份0.3毫升样品/
标准稀释缓冲液进入每个试管。将0.3ml上述100ng/ml标准溶液加入
第1管并彻底混合。将0.3毫升从第一管转移到第二管,并彻底混合。
将0.3ml从第二管转移到第三管,并彻底混合,依此类推。
注:标准溶液最宜在2小时内使用。标准溶液应为
4°C,最多12小时。或在-20°C下储存48小时。避免反复的冻融循环。
3、生物素检测抗体工作液的制备
实验前1小时内准备。
1)计算工作液总体积:0.1 ml/井×井数。(允许)
比总体积多0.1-0.2毫升)
2)用抗体稀释液1:100稀释生物素检测抗体,混合
彻底地。(即在99μl抗体稀释液中加入1μl生物素检测抗体。)

 

4、法制备辣根过氧化物酶标记链霉亲和素的共轭(SABC)工作的解决方案:
准备在30min,之前的实验。
1)calculate总卷在工作的解决方案:0.1毫升/(×)井的数量。(allow
0.1~0.2毫升以上的总卷)
2)的稀释SABC用SABC稀释缓冲AT 1∶100和thoroughly混音。(即增加1μL,SABC法检测
激情99μL,SABC法检测稀释缓冲)。
检测程序
在增的井,equilibrate SABC法对工作液和底物TMB方法至少30
在最小的房间的温度(37°C)。当diluting样品和reagents,他们必须是混合
完全和evenly。。。。。。。这是推荐的标准曲线图A for each试验。
1。的标准集,测试样本和控制(零)井的预涂板分别为,和
然后,记录他们的位置。这是推荐的测量的标准和样品中的每
重复的。洗板2时代前的综合标准,抽样和控制(零)井!!!!!!!
2。aliquot 0.1ml(100ng/ml,50ng/ml,25ng /毫升,12.5ng /毫升,6.25ng /毫升,3.125ng /毫升,1.56ng /毫升,
标准溶液的入井的标准。
3。添加0.1毫升/标准样品的稀释缓冲的激情控制(零)的话。
4。添加0.1毫升恰当稀疏抽样(人体血清、血浆、组织匀浆和其他
生物流体的热情。)抽样试验井。
5。。。。。。。该密封板与A和incubate覆盖在37°C为90分钟。
6。remove的封面上,必须在内容和板,洗板和2与华盛顿时报的缓冲。
不要让井干式化外,在任何时间。
7。添加0.1毫升的生物素标记的检测抗体工作液入井(以上的标准,
试验样品与零井)。添加的溶液,在底部每井无接触加热的
侧壁。
8。该密封板与A和incubate覆盖在37°C(60分钟。
9。remove的封面,和洗板3时代与洗的缓冲。
10。添加0.1毫升,SABC法检测溶液工作热情,每孔,在盖板和incubate在37°C的方法
30分钟。
11。remove的覆盖和洗板5与华盛顿时报的缓冲,和每一次让洗
缓冲停留在井的方法1~2分钟。
12。添加90μL(TMB底物的热情,每孔,在盖板和incubate 37°C,在黑暗的.
在15到30分钟。(注:这incubation时参考使用的方法是只读的,优化的时
应该由用户端的决心。)和shades蓝可以在第一个3~4口井
(与最集中的标准溶液中OAS1),其他井秀好obvious色彩。
13。。。。。。。添加50μL大学停止溶液的热情和thoroughly每好的混合。激情黄色颜色的变化
立即。
14。读《absorbance外径在450 nm的微孔板读者立即后的增
停止的溶液。

 

注:如果测量的样品被稀释,将稀释系数乘以浓度。
从插值得到稀释前的浓度。
总结
1。在添加标准、样品和控制(零)井之前,清洗2次平板!
2。在37°C下向每个孔中添加100μl标准或样品90分钟。
三。在37°C下每孔加入100μL生物素检测抗体工作液60分钟。
4。吸洗3次
5。每口井加入100μL SABC工作液。在37°C下培养30分钟
6。吸洗5次
7。添加90μl TMB基板。在37°C下培养15-30分钟
8。加入50μl停止溶液。立即在450牛米处读取
9。计算结果
典型数据和标准曲线
OAS1酶联免疫吸附测定试剂盒的典型标准运行结果如下所示。这个标准曲线是
在实验室生成,仅供演示。每个用户都应该获得自己的标准
按实验曲线。(不适用)

 

 

 

 

特异性
该方法灵敏度高,对OAS1的检测有很好的特异性。未观察到OAS1与类似物之间存在明显的交叉反应或干扰。
注:受现有技能和知识的限制,我们无法完成OAS1与所有类似物之间的交叉反应检测,因此交叉反应可能仍然存在。
恢复
下面列出的基质中加入一定水平的OAS1,回收率为
通过将测量值与样品中预期的OAS1量进行比较计算。

 

线性度
通过加入适当浓度的
OA1及其系列稀释剂。通过计算的百分比来证明结果。
集中到预期

 

精密度
分析内精密度(分析内精密度):低、中、高3个样品
分别在一个平板上测试OAS1 20次。
分析间精密度(分析间精密度):低、中、高3个样品
在3个不同的平板上测试OAS1,每个平板上重复8次。
cv(%)=sd/平均x100
内分析:cv<8%
化验间:CV<10%
稳定性
酶联免疫吸附测定试剂盒的稳定性取决于活性损失率。这个工具的损耗率比较低
在适当的储存条件下,在有效期内不得超过10%。

 

 

为了尽量减少对性能、操作程序和实验室条件的额外影响,
尤其要严格控制室温、空气湿度、培养箱温度。
也强烈建议由同一个操作员从
从开始到结束。

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