arcticzymes 80400-100说明书

PCR Decontamination Kit

PCR去污试剂盒

PCR去污试剂盒可去除PCR预混液中的污染DNA，而不会降低PCR灵敏度。

• dsDNase的双链特异性允许用引物和探针进行净化。
• 有效用于终点PCR和基于探针的qPCR。
• 污染细菌DNA降至检测限以下。
• 快速简便的协议。

在不降低灵敏度的情况下对主混合物进行净化一直是一个挑战。特别是当靶向少量DNA时，污染DNA是一个主要问题。由去污方案引起的qPCR测定中的任何灵敏度损失都是不可接受的。

套件内容：

• DTT（灭活援助）
• dsDNase

协议

图1：PCR去污试剂盒方案

1. 将引物和探针与主混合物和试剂盒内容混合
2. 在37˚C孵育20分钟
3. 在60˚C下灭活20分钟
4. 添加模板并运行qPCR

在DTT存在下，dsDNase在60℃时不可逆地失活，确保灭活后添加的任何模板都能安全地消化。

从20μl反应中去除污染DNA的方案，但可以通过调整试剂盒内容物的体积来放大或缩小。

500 pg untreated50 pg untreated5 pg untreated500 fg untreated50 fg untreatedNTC untreated500 pg decontaminated50 pg decontaminated5 pg decontaminated500 fg decontaminated50 fg decontaminatedNTC decontaminated5101520253035404502,5005,0007,50010,00012,50015,000Cycles14500 pg untreated:3450 pg untreated:-45 pg untreated:-5500 fg untreated:-1350 fg untreated:12NTC untreated:1500 pg decontaminated:1650 pg decontaminated:-125 pg decontaminated:-750 fg decontaminated:-9NTC decontaminated:22

图2：未处理和去污染的qPCR 2x主混合物用于分析具有5个步骤的大肠杆菌gDNA 10倍系列稀释。包括NTC样品，并且连续稀释的所有图显示平均三次重复。

使用PCR去污试剂盒进行治疗不会降低PCR的灵敏度。即使稀释DNA，Cq水平也没有显着改变（图2）。

套件内容

• DTT（灭活援助）
• dsDNase（100个反应）

储存条件：储存在-20˚C。
样品材料：该试剂盒可用于减少普通PCR和基于探针的qPCR混合物中的污染DNA。对于一些基于SYBR的qPCR混合物也是有效的。
质量控制：测试试剂盒中是否存在RNase。

出版物

1. 使用二元脱氧核糖核酸酶传感器多重检测广泛耐药结核病。
   Bengtson，HN; Homolka，S。; Niemann，S。; Reis，AJ; 达席尔瓦，PE; Gerasimova，YV; Kolpashchikov，DM; Rohde，KH（2017）
   Biosens Bioelectron 2017,94,176-183。