proaxsis PA004-1操作指南

1. 试验原理

NEATstik®利用ProteaseTag®技术特异性检测痰液样本中的活性NE。

NEATstik®由封装在塑料盒内的侧流试纸组成。试纸条由膜和垫组成，置于固体载体上，应用结合物和两条反应线：供试(T)线和对照线

(C)线。结合物是ProteaseTag®（旨在与活性NE特异性相互作用）和有色金颗粒的混合物。供试(T)细胞系由可检测NE的抗体和对照(C)细胞系可检测结合物组成。

样品稀释后，向NEATstik®的样品端口加入小体积，开始检测过程。稀释样本沿试纸移动，并与结合物相互作用。结合物中的ProteaseTag®将与样本中存在的活性NE结合，沿试纸上行并与供试品结合

(T)线。过量结合物将与对照(C)线结合。

检测线的外观确认了样品中存在的活性NE高于预先设定的阈值。

质控线的外观证实检测正确进行。

2. 试剂盒组分

每个复合包装盒包含10个套件。

每个试剂盒包含：

密封箔袋中的1×NEATstik®侧流检测

1 xNEATstik®样本稀释缓冲液(20 mL)1 x痰液稀释罐

1 x双球吸管1 x刻度吸管1 x说明书

需要但未提供的材料

痰液收集罐称量秤或天平秒表/计时器

4. 试验程序

收集样品

采集样本进行检测时，要求患者将痰液（不是唾液）咳入痰液采集壶（未提供）。建议立即检测样品。

样品制备

加入NEATstik®前，必须稀释痰液样本。

1. 将痰液稀释罐的底部放在称量天平上。称量天平去皮重（零）。

2. 将痰液稀释罐保持在称量天平上，使用抹刀（连接在痰液稀释罐的盖子上）将1-2 g痰液从痰液收集罐中转移到痰液稀释罐中。
3. 记录转移痰液的重量(g)。痰液稀释罐应保持在称量天平上。
4. 使用以下计算公式计算NEATstik®样品稀释缓冲液产生10倍稀释所需的量：

痰液重量 = g

x 9

= g NEATstik®

样品稀释缓冲液

5. 称量天平去皮重（零）。
6. 使用刻度移液管，将NEATstik®样本稀释缓冲液转移至痰液稀释罐中，直至计算重量。
7. 将盖子放在痰液稀释罐上，并确保其拧紧。
8. 倒置痰液稀释槽，使痰液与缓冲液混合

10次。

6. 检测方法（续）

执行测试

1. 从铝箔包装中取出NEATstik®，置于水平面上，观察窗朝上。
2. 取下痰液稀释罐的盖子。
3. 使用双球吸管吸取稀释痰液样本。尽量确保

读取结果和质量控制

如果检测成功完成，对照(C)线将以红线显示（颜色强度可能不同）。如果质控(C)线不可见，则结果无效，应使用新样本和新的检测试剂盒重复检测。

如果TEST(T)线可见，则确认痰液样本中存在大于预设阈值的活性NE。

7. 性能特征

使用58份冷冻痰液样本评估NEATstik®检测的性能。使用ProteaseTag®Active NE免疫测定法(ProAxsis Ltd)定量测定活性NE。

• 42份样本有痰液NE浓度

< 8µg/mL = 阴性

• 16份样本有痰液NE浓度

> 8µg/mL = 阳性

该检测对16份NE定量高于8µg/mL的痰液样本中的16份给出了阳性结果（100%灵敏度），对42份NE定量低于8µg/mL的痰液样本中的36份给出了阴性结果（86%特异性）。

8. 使用限制

仅用于稀释痰液样本

为获得准确结果，请遵循提供的说明

NEATstik®结果必须结合其他临床和患者进行评价

13. 处置

痰液样本和使用的检测组分具有潜在生物危害性。根据当地临床废物指南适当处置使用过的检测试剂盒和痰液样本。

14. 参考文献

1. Pham,C.(2008)International Journal of Biochemistry&Cell Biology,40(6-7),1317-1333.
2. Sandhaus,R.&Turino,G.(2013)COPD,10(S1):60-63.
3. Sagel,S. et al(2012)American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine,186(9):857-865
4. Mayer-Hamblett,N. et al(2007)美国呼吸与重症医学杂志，175:822-828
5. Chalmers,J.D. et al(2016)American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine 195:1384–1393.

仅溶液-无痰液“结块”。

医疗保健专业人员可获得的数据。

NEATstik®不能定量痰液样本中的活性NE。

9. 定量活性中性粒细胞弹性蛋白酶