美国Activity Signaling公司重组抗Npas4兔单克隆抗体介绍

一、基础信息

1. 核心产品参数  

- 货号：AS-AB18A-100（100μl）、AS-AB18A-300（300μl）  

-英文名：Anti-Npas4 Recombinant Rabbit Monoclonal Antibody

-中文名：重组抗Npas4兔单克隆抗体

- 品牌：Activity Signaling

- 宿主与类型：重组兔单克隆抗体，通过基因工程技术构建，避免动物个体差异  

- 形态与保存：液体形式，1mg/ml浓度溶于PBS，短期4℃保存，长期-20℃分装冻存  

2. 靶标蛋白Npas4的生物学意义  

Npas4（Neuronal PAS Domain Protein 4）属于bHLH-PAS转录因子家族，是神经元活动依赖性的即早基因（IEG）产物。其表达具有高度神经元特异性，仅在突触活动激活后数分钟内迅速上调，且持续时间短暂（约1-2小时），被认为神经元活性的黄金标志物。Npas4的核心功能包括：  

- 调控突触可塑性：通过激活BDNF等下游基因，平衡兴奋性与抑制性突触（E/I平衡），参与学习记忆和恐惧消退。  

- DNA损伤修复：与NuA4复合物结合，在神经元活动诱导的DNA断裂位点募集修复蛋白，维持基因组稳定性，延缓神经退行性变。  

- 昼夜节律调节：与BMAL1等时钟基因互作，调控视交叉上核（SCN）对光信号的响应。  

- 疾病关联：其异常表达与精神分裂症、自闭症、癫痫及阿尔茨海默病等密切相关。  

二、作用原理

1. 抗体设计与制备  

该抗体通过重组DNA技术构建，具体流程包括：  

- 抗原筛选：以Npas4蛋白C端保守区域（人源氨基酸597-802）为免疫原，确保跨物种识别（小鼠、大鼠、人类）。  

- 单B细胞克隆：从免疫兔外周血分离特异性B细胞，测序获取抗体可变区基因。  

- 哺乳动物细胞表达：将抗体基因导入HEK293细胞，通过无血清悬浮培养大规模生产，避免动物源污染。  

- 严格纯化：经Protein A亲和层析和SEC分子筛纯化，纯度>95%，内毒素水平<0.1EU/μg。  

2. 作用机制  

抗体通过双价Fab片段特异性结合Npas4蛋白的PAS结构域，阻断其与ARNT等伴侣蛋白的相互作用，从而抑制转录活性。该结合具有高度选择性：  

- 种属交叉反应性：通过小鼠、大鼠及人类脑组织样本验证，在WB中均显示单一87kDa条带。  

- 亚细胞定位：免疫荧光（IF）实验证实其与DAPI共定位，提示抗体可穿透细胞核膜，识别内源性Npas4。  

- 功能验证：在Npas4基因敲除（KO）小鼠中无信号，证明抗体无交叉反应。

三、实验痛点解决方案

1. 传统抗体的局限性  

- 特异性不足：多克隆抗体因识别多个表位，易与PAS家族其他成员（如NPAS1、NPAS3）交叉反应，导致WB背景高或IHC假阳性。  

- 批次间差异：杂交瘤技术生产的小鼠单抗可能因细胞株遗传漂变，导致不同批次效价波动。  

- 验证困难：缺乏KO模型验证的抗体难以排除非特异性结合，影响实验结论可信度。  

2. 本产品的针对性优化  

- KO验证黄金标准：在Npas4 KO小鼠脑裂解液中无信号，排除与其他bHLH-PAS蛋白的交叉反应。  

- 多应用场景适配：支持WB（1:500-1:2000）、IHC（1:100-1:500）、ICC/IF（1:200-1:1000），满足从分子到组织水平的检测需求。  

- 即用型设计：1mg/ml高浓度溶液可直接使用，避免反复冻融导致的抗体降解。  

- 兼容性扩展：可与cFos、Arc等其他IEG抗体联用，实现多标记神经元活动分析。

四、核心优势

1. 特异性与灵敏度的双重提升  

- 高亲和力结合：通过表面等离子共振（SPR）测定，抗体与Npas4的KD值达10⁻⁹ M级，可检测低至0.1ng的重组蛋白。  

- 背景信号抑制：在IHC实验中，对小鼠睾丸等非表达组织无染色，证明其严格的组织特异性。  

2. 批次稳定性与生产可靠性  

- 基因层面一致性：重组抗体的DNA序列恒定，避免杂交瘤细胞突变导致的批次差异。  

- 规模化生产能力：哺乳动物细胞培养系统可实现快速扩产，供货周期短至2周。  

3. 实验效率优化  

- 省时省力：无需预实验优化稀释度，推荐起始浓度直接适用于大多数实验条件。  

- 兼容多种检测平台：与HRP、Alexa Fluor等标记二抗配合，支持化学发光、荧光显微镜及流式细胞术。  

4. 应用领域扩展  

- 神经科学研究：用于神经元活动图谱绘制、突触可塑性机制解析及神经退行性疾病模型验证。  

- 药物研发：作为靶点验证工具，评估候选化合物对Npas4通路的调控作用。  

- 高级成像技术：与组织透明化试剂盒（如CLARITY）联用，实现全脑3D成像。  

五、客户群体与典型应用案例

1. 核心用户

- 神经科学实验室：研究突触可塑性、学习记忆及神经退行性疾病的机制。  

- 精神疾病研究机构：探索Npas4在自闭症、抑郁症等中的分子病理。  

- 药物研发企业：开发靶向Npas4通路的小分子抑制剂或基因疗法。  

- 细胞生物学实验室：研究神经元活动诱导的基因表达动态变化。  

2. 代表性实验方案  

- WB检测神经元激活：  

 - 样本：小鼠海马组织裂解液（35μg蛋白/泳道）。  

 - 条件：抗体稀释1:1000，4℃孵育过夜，HRP标记二抗1:5000，ECL显影曝光30秒。  

 - 结果：在野生型小鼠中显示清晰87kDa条带，KO小鼠无信号。  

- IHC定位Npas4表达：  

 - 样本：大鼠脑冠状切片（4%多聚甲醛固定）。  

 - 条件：抗体稀释1:200，37℃孵育2小时，DAB显色后苏木精复染。  

 - 结果：特异性染色集中于海马CA1区神经元细胞核，背景极低。  

- IF检测原代神经元激活：  

 - 样本：体外培养的小鼠皮层神经元（经KCl刺激30分钟）。  

 - 条件：抗体稀释1:500，与MAP2抗体共染，Alexa Fluor 488标记二抗，激光共聚焦显微镜观察。  

 - 结果：Npas4信号与MAP2阳性神经元共定位，且刺激组荧光强度显著高于对照组。

六、订货信息与技术支持

1. 产品规格与价格  

- 100μl装：AS-AB18A-100

- 300μl装：AS-AB18A-300

- 定制服务：提供HRP、Biotin等标记偶联抗体，及大包装批量采购优惠。  

2. 订购流程  

-供应商：上海起发

七、总结

Anti-Npas4重组兔单克隆抗体（AS-AB18A系列）凭借重组技术的精准性、严格的KO验证及多场景兼容性，成为神经科学研究的工具。其高特异性、批次稳定性及实验效率，不仅解决了传统抗体的痛点，更助力研究者在神经元活动机制、神经退行性疾病及药物研发领域取得突破性进展。选择该抗体，即选择了可靠、高效、前沿的实验解决方案。  

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（注：本文内容基于品牌公开资料及行业常规信息整理，具体以品牌信息文档为准。）