【Abcam实验支持】如何确定蛋白浓度？

确定溶液中蛋白含量最快的方法是使用 UV-vis 直接测定吸光度，但是通常这种方法不够准确或者不够灵敏。 

使用 Bradford 或 BCA 检测可以对大多数蛋白质进行高度准确的定量。

如何使用 UV-vis 确定蛋白质浓度？

蛋白浓度可通过测量 280 nm 处的 UV 吸光度来估算；蛋白质因其色氨酸和酪氨酸残基的吸光作用而在此处出现一个高吸收峰（通常称为 A280）。 使用比尔-兰伯特定律（见下方公式）可以轻松将该峰值转化为蛋白浓度。 这种方法主要用于粗略估计浓度，例如验证纯化是否成功。

A = ɛcl

●A 代表吸光度（如 A280）

● 代表摩尔消光系数 (Mɛ-1cm-1)，可从文献中查到 

●c 代表浓度（单位为 M）

●l 代表路径长度，即比色皿/微孔板的长度，单位为 cm

如何使用 Bradford 检测确定蛋白质浓度？

Bradford 检测是一种比色法检测，需要借助蛋白质与考马斯亮蓝的结合。

●当染料在酸性介质中与蛋白质结合时，最大吸收波长从 465 nm 变为 595 nm，颜色从棕色变为蓝色。

●未知的蛋白质浓度是通过参考浓度已知的蛋白质（通常是牛血清白蛋白 [BSA]）的标准曲线估算得到的。

如何使用 BCA 检测确定蛋白质浓度？

BCA 检测是一种比色法检测，其原理是，Cu2  离子被蛋白质还原，随后与 BCA 相结合。

●生成的 Cu+ 离子与 BCA 试剂形成深色复合物，其在 562 nm 处具有很强的吸光度。

●未知的蛋白质浓度是通过参考浓度已知的蛋白质（通常是牛血清白蛋白 [BSA]）的标准曲线估算得到的。

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