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一、 产品基础信息描述
• 产品货号：ab150077
• 英文全称：Goat anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 488)
• 中文命名：Alexa Fluor® 488标记的山羊抗兔IgG二抗（H+L）
• 品牌归属：Abcam
• 宿主来源：山羊（Goat）
• 靶向种属：兔（Rabbit）
• 抗体特异性：靶向IgG的重链（Heavy Chain）与轻链（Light Chain），即H+L
• 偶联荧光基团：Alexa Fluor® 488
• 纯化方式：抗原亲和纯化（Immunogen affinity purified）
• 抗体克隆性：多克隆抗体（Polyclonal），同型为IgG
• 物理形态：液体（含23%甘油、PBS、1% BSA以及0.02%叠氮钠防腐剂）
• 激发/发射波长：Ex/Em = 495 nm / 519 nm
• 推荐规格：常见规格为500 μL（具体以实际采购包装为准）
二、 核心产品特点与优势剖析
1. 明亮且稳定的荧光输出
借助经典的Alexa Fluor® 488荧光染料，ab150077展现出出色的摩尔消光系数与荧光量子产率。与传统FITC相比，其光稳定性显著提升，这意味着在激光照射下不易发生光漂白，为您争取了更充裕的图像采集与观察时间，尤其适合低丰度靶点的微弱信号捕获。
2. 宽泛的pH耐受性
实验环境的酸碱度往往会影响荧光集团的发光效率。Alexa Fluor® 488在pH 4.0至10.0的区间内均能保持良好的荧光强度，最佳表现区间为pH 6.5-8.5，这赋予了其实验条件普适性。
3. 极低的种属交叉反应
作为经过严格亲和纯化的山羊源二抗，ab150077对人、小鼠、大鼠、仓鼠、牛、马、猪、猴等多种常见实验动物的IgG均表现出极低的交叉吸附（Pre-adsorbed），极大程度地压低了非特异性结合的背景噪音。
4. 多平台应用的“多面手"
无论是在细胞水平进行精细定位，还是在悬液体系中分析细胞亚群，亦或是在组织切片上探寻抗原分布，这款二抗均能提供稳健可靠的信号放大作用。
三、 工作原理与信号放大机制
要驾驭好一款工具，首先要洞悉它的底层逻辑。ab150077的工作原理建立在免疫学抗原-抗体特异性结合的基础之上。
在一抗（Primary Antibody）与目标抗原（Target Antigen）发生特异性结合后，一抗的恒定区（Fc段）或可变区（Fab段）会成为新的抗原表位。此时，带有荧光标签的ab150077作为二抗，能够精准识别并结合一抗的IgG骨架。由于每个一抗分子上可以结合多个二抗分子，这种级联放大效应使得初始的抗原信号得到了指数级的增强。
具体而言，当使用488 nm波长的激光（如流式细胞仪的氩离子激光器）或汞/氙灯光源激发时，ab150077上的Alexa Fluor® 488染料吸收光子能量，其电子跃迁至激发态。当电子回落至基态时，便会释放出波长为519 nm的光子，即我们肉眼所见的明亮绿光。通过检测器或滤光片（如流式常用的525/30 nm带通滤光片），即可将这种光信号转化为定量数据或可视化图像。
四、 攻克实验痛点：它能为您解决哪些问题？
• 痛点一：信号太弱，找不到阳性细胞
对策：得益于高亮度的Alexa Fluor® 488标签，ab150077能够敏锐捕捉低表达量的目标蛋白，让微弱信号无所遁形。
• 痛点二：背景太高，特异性差
对策：通过优化的纯化工艺，该二抗有效去除了杂抗体和非特异性结合位点，配合其极低的种属交叉反应，能够帮助您获得高信噪比的干净图谱。
• 痛点三：拍照时荧光猝灭太快
对策：其光稳定性允许您进行长时间的共聚焦Z-stack扫描或3D重构，而不必担心信号在拍摄过程中迅速衰减。
• 痛点四：多色panel设计困难，光谱串色严重
对策：Alexa Fluor® 488的光谱峰形尖锐，与常见的细胞核染料（如DAPI）以及橙/红色染料（如Alexa Fluor® 594、Texas Red）的光谱重叠极小，是构建多色实验体系的理想之选。
五、 全流程使用方法与操作建议
1. 免疫荧光 / 免疫细胞化学 (ICC/IF)
• 推荐稀释比例：1/200 - 1/1000（例如：1 µg/mL - 2 µg/mL的工作浓度）
• 操作步骤：
1. 样本固定与透化：根据目标蛋白的亚细胞定位，选择合适的固定剂（如4%多聚甲醛）和透化剂（如0.1% Triton X-100）。
2. 封闭：使用含1%-3% BSA或正常山羊血清的PBS溶液封闭30-60分钟，以阻断非特异性结合位点。
3. 一抗孵育：弃去封闭液，加入用封闭液稀释好的一抗，4℃过夜孵育。
4. 二抗孵育：PBST洗涤三次后，加入用封闭液稀释的ab150077，室温下避光孵育1小时。
5. 复染与封片：再次洗涤后，使用DAPI进行细胞核复染，然后用抗荧光猝灭封片剂封片观察。
2. 流式细胞术 (Flow Cytometry)
• 推荐稀释比例：1/2000 - 1/4000
• 操作步骤：
1. 细胞制备：获取单细胞悬液，用4%多聚甲醛进行表面抗原固定。
2. 透化（针对胞内标志物）：若检测胞内因子，需用90%预冷甲醇或专用透化剂处理。
3. 封闭与一抗孵育：用含10%正常血清的PBS封闭15分钟，随后加入一抗，室温避光孵育30-60分钟。
4. 二抗孵育：PBS洗涤后，加入稀释好的ab150077，室温避光孵育20-30分钟。
5. 上机分析：最后用PBS洗涤1-2次，重悬于500 µL PBS中，转移至流式管中上机检测（FITC通道）。
3. 免疫组织化学 (IHC-Fr / IHC-P)
• 推荐稀释比例：需根据具体组织及一抗效价进行预实验摸索（常规范围多在1/200 - 1/1000）。
• 操作要点：石蜡切片需先进行脱蜡、水化及高温抗原修复（如柠檬酸钠缓冲液，pH 6.0或Tris/EDTA缓冲液，pH 9.0）。后续封闭、一抗/二抗孵育及复染流程与IF类似，需注意全程避光操作。
(注：以上稀释比例仅供参考，实际最佳工作浓度需根据一抗的效价及具体实验体系通过滴定实验确定。)
六、 储存条件与试剂养护指南
荧光试剂极其脆弱，科学的储存方式直接关系到试剂的寿命与实验的成败。
• 运输条件：产品通常采用蓝冰（Blue Ice）冷链运输，以防温度波动造成抗体变性或荧光淬灭。
• 短期储存（1-2周内）：置于2°C - 8°C冰箱冷藏即可。
• 长期储存：收到产品后，建议根据单次实验用量进行分装（Aliquot），保存于-20°C。在此条件下，试剂可稳定保存12个月。
• 避光要求：Alexa Fluor® 488对光敏感，无论在液态储存还是实验操作过程中，均需严格避光（可包裹铝箔纸或使用棕色管）。
• 禁忌事项：绝对避免反复冻融！反复冻融会导致抗体蛋白聚集变性，不仅严重削弱结合能力，还会增加非特异性背景。
七、 常见问题排查与解决方案 (Troubleshooting)
问题一：背景信号过高，整个视野一片绿（高背景）
原因分析与对策：这可能是二抗浓度过高导致的。建议进行浓度梯度摸索，降低二抗稀释比例（如从1:200降至1:500或更低）。另外，封闭不充分也是罪魁祸首，可适当延长封闭时间至1-2小时，或提高封闭液中BSA/血清的浓度。此外，洗涤不够极易残留游离二抗，务必增加洗涤次数（如增至5次）并延长每次浸泡洗涤的时间。
问题二：阳性信号微弱甚至检测不到
原因分析与对策：首先确认一抗是否有效结合，可设置一抗阳性对照。其次，检查二抗是否失活，避免将其长时间暴露在强光或高温环境下。如果细胞/组织通透不足，一抗无法进入，也会导致信号缺失，此时需优化透化剂（如Triton X-100）的作用时间与浓度。
问题三：流式检测时出现大量双峰或异常高值
原因分析与对策：这往往是因为细胞成团或未充分吹打为单细胞悬液所致。在加入二抗前，务必确保细胞经过充分的过滤（如使用40 µm细胞筛）或轻柔吹打。同时，检查二抗是否发生聚集，若长期储存不当，高浓度的甘油可能导致试剂析出，上机前可进行短暂离心（10,000 g, 5分钟）取上清使用。
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货号 | 品名 | 规格 | 品牌 |
ab150077 | Goat Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 488) | 500ug | Abcam |
ab6721 | Goat Anti-Rabbit IgG H&L (HRP) (ab6721) | 1mg | Abcam |
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ISB1L(ab119211) | InstantBlue | 1L | Abcam |
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ab205719 | Goat Anti-Mouse IgG H&L (HRP) | 500ug | Abcam |
ab150116 | Goat Anti-Mouse IgG H&L (Alexa Fluor® 594) | 500ug | Abcam |
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ab32072-100ul | Recombinant Anti-c-Myc antibody [Y69] (ab32072) | 100ul | Abcam |
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ab51995 | AGE-BSA | 10mg | Abcam |
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ab104139 | Mounting Medium With DAPI - Aqueous, Fluoroshield (ab104139) | 20ml | Abcam |
ab215715 | Recombinant Anti-TGF beta 1 antibody [EPR21143] | 100ul | Abcam |
ab150073 | Donkey Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 488) (ab150073) | 500ug | Abcam |
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ab150079 | Goat Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 647) (ab150079) | 500ug | Abcam |
ab5076 | Anti-Iba1 antibody (ab5076) | 100ug | Abcam |
ab15580 | Anti-Ki67 antibody (ab15580) | 100ug | Abcam |
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ab108823-1x96tests | Human Complement C3 ELISA Kit | 1x96tests | Abcam |
ab51257 | Anti-Polyethylene glycol antibody [PEG-B-47 | 100ug | Abcam |
ab6673-100ug | Anti-GFP antibody | 100ug | Abcam |
ab65329-100tests | Total Antioxidant Capacity Assay Kit | 100tests | Abcam |
ab316860-100ul | 重组Anti-EBV核Antigen/EBNA1抗体[EPR28706-78] (ab316860) | 100ul | Abcam |
ab179515 | 重组Anti-pro Caspase-1 + p10 + p12抗体[EPR16883] | 100ul | Abcam |
ab6326 | Anti-BrdU antibody [BU1/75 (ICR1)] - Proliferation Marker (ab6326) | 100ug | Abcam |
ab7403 | Streptavidin (HRP) | 500ug | Abcam |
ab209845 | Recombinant Anti-GSDMD antibody [EPR19828] (ab209845) | 100ul | Abcam |
ab51608 | Recombinant Anti-HIF-1 alpha antibody [EP1215Y] (ab51608) | 100ul | Abcam |
ab192890 | Recombinant Anti-LC3B antibody [EPR18709] - Autophagosome Marker | 100ul | Abcam |
ab53090 | Anti-Metabotropic Glutamate Receptor 5 antibody (ab53090) | 100ug | Abcam |
ab182422 | 重组Anti-CD163抗体[EPR19518] | 100uL | Abcam |
ab32503 | Recombinant Anti-Bax antibody [E63] (ab32503) | 10ul | Abcam |
ab125066-100ul | Recombinant Anti-Glutathione Peroxidase 4 antibody [EPNCIR144] (ab125066) | 100ul | Abcam |
ab108319 | Recombinant Anti-BDNF antibody [EPR1292] (ab108319) | 100ul | Abcam |
ab181421 | Human TNF alpha ELISA Kit | 1 x 96 tests | Abcam |
ab141704 | Clozapine N-oxide, Metabolite of Clozapine (ab141704) | 100mg | Abcam |
ab16667-500ul | Recombinant Anti-Ki67 antibody [SP6] (ab16667) | 500ul | Abcam |
ab98596 | Goat F(ab')2 Anti-Human IgG - Fc (PE), pre-adsorbed | 500ug | Abcam |
ab208942 | Anti-c-Fos antibody [2H2] (ab208942) | 100ul | Abcam |
ab272686-100ug | Anti-VZV gE蛋白抗体[#9] | 100ug | Abcam |
ab125963-1x96tests | Human Complement C5 ELISA Kit | 1x96tests | Abcam |
ab209959-100ul | Alexa Fluor? 488 Anti-PD-L1 antibody [28-8] | 100ul | Abcam |
ab171529-1000ml | 450 nm Stop Solution for TMB底物 | 1000ml | Abcam |
ab6728 | Rabbit Anti-Mouse IgG H&L (HRP) | 1mg | Abcam |
ab125243 | Anti-DDDDK tag (Binds to FLAG® tag sequence) antibody [FG4R] | 100ug | Abcam |
ab102890 | HRP Conjugation Kit - Lightning-Link® | 3x 100 ug | Abcam |
ab81289-100ul | Anti-CD34 antibody [EP373Y] | 100ul | Abcam |
ab219800-100ul | Recombinant Anti-GSDMD antibody [EPR20859] (ab219800) | 100ul | Abcam |
ab150081 | Goat Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 488) preadsorbed (ab150081) | 500ug | Abcam |
ab7260 | Anti-GFAP antibody (ab7260) | 50ul | Abcam |
AB32503-100 | Recombinant Anti-Bax antibody [E63] (ab32503) | 100ul | Abcam |
ab184857 | Human GLP1 (7-36) ELISA Kit | 1 x 96 tests | Abcam |
ab223582 | 重组Anti-EpCAM抗体[EPR20532-225] | 100ul | Abcam |
ab5103 | Anti-Histone H3 (citrulline R2 + R8 + R17) antibody | 100ug | Abcam |
ab97225 | Goat Anti-Human IgG Fc (HRP) | 1mg | Abcam |
ab48394 | Anti-LC3B antibody - Autophagosome Marker (ab48394) | 100ul | Abcam |
ab5929 | Goat F(ab')2 Anti-Mouse IgM mu chain (Biotin) | 250ug | Abcam |
ab18207 | Anti-beta III Tubulin antibody - Neuronal Marker (ab18207) | 100ug | Abcam |
ab64693 | Anti-Mannose Receptor antibody | 100ug | Abcam |
ab179483 | Recombinant Anti-HIF-1 alpha antibody [EPR16897] | 100Ul | Abcam |
ab244926 | 重组Anti-Thymidine Kinase 1/TK1抗体- BSA and Azide free (Detector) | 100ug | Abcam |
ab8245 | Anti-GAPDH antibody [6C5] - Loading Control (ab8245) | 100ug | Abcam |
ab214488-100ul | Recombinant Anti-TROP2 antibody [EPR20043] | 100ul | Abcam |
ab20425-250ul | HRP Anti-E. coli antibody | 250ul | Abcam |
ab106749-100ul | HRP Anti-Growth Hormone antibody [KT34] | 100ul | Abcam |
ab65336-100tests | Triglyceride Assay Kit - Quantification | 100tests | Abcam |
ab213524 | Recombinant Anti-PD-L1 antibody [EPR19759] (ab213524) | 100ul | Abcam |
ab6858 | Goat Anti-Human IgG H&L (HRP) (ab6858) | 1mg | Abcam |
ab197244 | Glycolysis Assay [Extracellular acidification] (ab197244) | 96 tests | Abcam |
ab34710 | Anti-Collagen I antibody (ab34710) | 100ug | Abcam |
ab178945-10ul | Recombinant Anti-iNOS antibody [EPR16635] (ab178945) | 10ul | Abcam |
ab76003-40ul | Recombinant Anti-MMP9 antibody [EP1254] (ab76003) | 40ul | Abcam |
ab68477-10ul | Recombinant Anti-Heme Oxygenase 1 antibody [EPR1390Y] (ab68477) | 10ul | Abcam |
Ab52987 | Recombinant Anti-p75 NGF Receptor antibody [EP1039Y] (ab52987) | 100ul | Abcam |
ab137869 | Recombinant Anti-Tyrosine Hydroxylase antibody [EP1532Y] (ab137869) | 100ul | Abcam |
ab8227 | Anti-beta Actin antibody (ab8227) | 50ug | Abcam |
ab108821 | Corticosterone ELISA试剂盒(ab108821) | 1 x 96 tests | Abcam |
ab1791 | Anti-Histone H3 antibody - Nuclear Marker and ChIP Grade (ab1791) | 100ug | Abcam |
ab183628 | Anti-mCherry antibody (ab183628) | 100ul | Abcam |
ab243379 | Anti-ZNF18 antibody (ab243379) | 100ul | Abcam |
ab217344 | Recombinant Anti-CD8 alpha antibody [EPR21769] (ab217344) | 10Ul | Abcam |
ab150105 | Donkey Anti-Mouse IgG H&L (Alexa Fluor® 488) (ab150105) | 500ug | Abcam |
ab76302 | 重组Anti-NF-kB p65 (phospho S536)抗体[EP2294Y] (ab76302) | 10ul | Abcam |
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