MEDNA Bio 杆状病毒颗粒（BVPs）E3001 中文说明书

一、产品描述

货号：E3001

英文名：Baculovirus particles（简称 BVPs）

中文名：杆状病毒颗粒 / 杆状病毒粒子

品牌：MEDNA Bio

规格：100 µL/支

产品浓度：1 × 10^12 - 1 × 10^13 pfu/mL（以实际批次 COA 为准）

配方：磷酸盐缓冲液（PBS）

产品形态：病毒颗粒悬浮液，呈轻微乳光或悬浊状态，不含荧光标记、酶标记或人源蛋白添加剂。

用途：本产品仅限体外研究使用，适用于治疗性抗体候选分子的多特异性评估、非特异性结合筛查及抗体可开发性早期风险分层。不可用于人体治疗、诊断或体内实验。

包装与用量：100 µL 规格按最终 1:200 稀释计算，可满足约 4 块 96 孔板的包被需求。实际用量会因包被浓度、每孔体积、洗板损耗及预实验优化而有所浮动。

配套文件：产品页面提供 Product Sheet 与 SDS。实验前需仔细阅读 SDS 中的生物安全、个人防护及废液处理要求；Product Sheet 用于核对浓度区间、推荐稀释比例、包被条件与储存温度。在受控实验室环境中，建议将 COA、SDS 与批次记录统一归档。

二、产品特点

本产品基于杆状病毒颗粒表面结构复杂、蛋白组成丰富的特性，为治疗性抗体提供了一种统一的非特异性结合评估界面。其特点包括：

• 与常规 ELISA 平台兼容，可直接使用酶标仪、洗板机及通用缓冲液体系开展实验。

• 提供明确的工作浓度范围与完整操作路线，便于实验室快速建立标准化 SOP。

• 结果可量化，通过无测试抗体对照孔进行归一化计算，获得 BVP score，适合不同候选分子、不同批次间的横向比较。

• 用量设计兼顾初筛通量，100 µL 装量可支持多块 96 孔板，适合抗体发现早期的大量克隆评估。

• 作为体外替代工具，可辅助预测抗体在体内的快速清除风险，降低后期开发失败概率。

三、储存条件

• 运输与接收：产品采用干冰运输。到货后应检查包装完整性、干冰残留量及瓶身是否破损。若发现标签脱落、解冻泄漏或货号不符，应暂停使用并联系供应商。

• 长期储存：建议于 -80℃ 条件下保存。避免长期置于 -20℃ 或 4℃，以免影响病毒颗粒稳定性。

• 分装建议：为避免反复冻融，可根据单次实验用量进行分装。分装操作应在生物安全柜中进行，使用耐 -80℃ 的密封管，并清晰标注货号、批次、分装日期、分装人及建议稀释范围。

• 安全防护：本产品属于病毒颗粒类试剂，应按生物危害物料管理。储存冰箱宜专用或分区，操作人员需配备手套、实验服及护目镜，大量分装时应在生物安全柜内操作。

• 保质期与验收：具体有效期以 COA 标注为准。超过建议期限后，建议先进行小体积包被对照实验，确认信号正常后再投入正式筛选。若出现异常背景升高或空白孔偏高，应停止使用并留样复检。

四、工作原理

治疗性抗体理想状态下应特异性识别预定抗原。但部分抗体由于可变区电荷分布、疏水暴露、CDR 构象不稳定等因素，可能对非目标表面产生低亲和力、多价性或广谱结合，这种现象称为多特异性或广义的非特异性黏附。此类特性可能导致抗体在体内与细胞膜、病毒样颗粒或其他无关配体发生作用，进而影响分布与清除。

杆状病毒颗粒具有复杂的蛋白外壳和膜样表面结构，可作为统一的固相载体，用于捕捉抗体对“混杂表面"的黏附倾向。实验中，将 BVP 用 50 mM 碳酸钠缓冲液（pH 9.6）稀释后包被于微孔板，使其吸附于孔壁。经封闭减少裸面后，加入待测抗体。若抗体存在针对 BVP 表面成分的非特异性结合，则会保留在孔中。随后加入抗人 IgG-HRP 二抗，通过 HRP 催化 TMB 底物产生可溶性显色产物。用 2 M 硫酸终止反应后，于 450 nm 波长下测定吸光度。以无测试抗体对照孔的吸光度进行归一化，计算得到 BVP score。

该方法并非用于确认某一个具体脱靶抗原，而是整体评估抗体对复杂生物表面的黏附倾向，适合作为早期风险分层和可开发性评估的辅助工具。其结果需结合其他实验综合判断，不可替代药代动力学或体内安全性研究。

五、解决实验中哪些问题

• 早期识别多特异性候选分子：在抗体发现阶段，通过 BVP ELISA 对大量克隆进行统一打分，可提前剔除高黏附倾向的分子，减少后期无效投入。

• 降低快速清除项目进入动物 PK 的比例：体外 BVP score 可作为预测体内快速清除的参考指标之一，在投入食蟹猴、小鼠等动物实验前进行风险过滤。

• 比较不同抗体版本的黏附特性：同一母体抗体经过人源化、去岩藻糖、突变或双抗构建后，非特异倾向可能改变。BVP 提供相同固相，便于配对比较改造效果。

• 辅助排查实验背景高、信号不稳等问题：若某抗体在流式、免疫荧光等实验中背景异常，但在纯抗原 ELISA 中表现正常，可用 BVP 评估是否存在广谱膜样结合，再结合其他替代实验综合判断。

• 建立实验室统一的可开发性档案：将 BVP score 与纯度、热稳定性、自相互作用等数据整合，为候选分子立项讨论提供更全面的依据。

六、使用方法

以下操作步骤基于产品公开 protocol，适用于 96 孔板，最终包被稀释参考值为 1:200。实际包被稀释可根据滴度、板型及预实验调整，厂家建议总体可探索 1:100 至 1:200 范围。

1. 包被液准备：取 BVP 原液，用 50 mM 碳酸钠缓冲液（pH 9.6）按所需倍数稀释。若计划最终工作液接近 1:200，应先进行小样验证，确保孔间 CV 符合要求。高背景时可提高稀释比例，信号不足时降低稀释比例，但同批所有测试板条件需保持一致。

2. 加样包被：每孔加入 50 µL 稀释后的 BVP 工作液。设置空白包被对照、无抗体二抗本底孔、阳性多特异性参照孔及待测抗体孔。置于 4℃ 孵育 16 至 24 小时。包被时间过短可能导致表面覆盖不足，过长可能增加本底，建议通过预实验确定稳定区间。

3. 弃液与后续操作：包被结束后，吸弃未结合的 BVP。后续封闭、洗涤、加样等步骤均在室温进行。若实验室室温低于 18℃ 或高于 26℃，应记录温度并对信号进行批次校正。

4. 封闭：每孔加入 100 µL 封闭液（PBS 含 0.5% BSA），孵育 1 小时。封闭不足会增加非特异性吸附，封闭过度可能掩盖弱信号。更换 BSA 批号时应重新优化封闭条件。

5. 洗板：用 100 µL PBS 洗涤 3 次。洗板机应设定合理的吸干与浸泡时间；手动洗板需防止孔间交叉污染。若实验体系对背景敏感，可评估含低浓度 Tween 的 PBS，但变更后需重新验证基线。

6. 一抗孵育：每孔加入 50 µL 待测抗体，公开方案推荐起始浓度为 1 µM。实际可根据抗体可得量、预期亲和力设置浓度梯度，如 0.25、0.5、1、2 µM。室温孵育 1 小时。平行设置无测试抗体孔，用于后续归一化计算。

7. 洗板：用 PBS 洗涤 6 次，每次 100 µL。多特异性检测对洗板次数较敏感，洗次不足会导致背景升高，洗次过多可能丢失弱信号。使用自动洗板机时应定期检查残液量。

8. 二抗孵育：每孔加入 50 µL 抗人 IgG-HRP 二抗，室温孵育 1 小时。二抗的种属、亚类反应性应与待测抗体匹配。若检测非人源抗体，需更换对应二抗。HRP 二抗应避免长时间光照和叠氮污染。

9. 洗板：用 PBS 再洗涤 6 次。HRP 残留会显著提高空白值，洗板质量直接影响 BVP score 的可靠性。

10. 显色：每孔加入 50 µL TMB 底物，避光室温孵育 10 至 15 分钟。显色时间应根据目标 OD 范围调整，不同 TMB 品牌、二抗效价和包被密度会影响显色斜率。建议在同一板内设置时间点预读，避免过显色进入平台期或产生沉淀。

11. 终止：每孔加入 50 µL 2 M 硫酸终止反应。终止后溶液变黄，应在规定时间内读取吸光度，避免颜色回退或背景漂移。

12. 读数：使用酶标仪在 450 nm 波长下测定吸光度。若仪器支持双波长，可设置参考波长以校正孔间液体光学差异。记录每个孔的原始 OD、平均本底、CV 及稀释信息。

13. 结果计算：BVP score 通过无测试抗体对照孔吸光度进行归一化。常见做法为测试孔 OD 减去空白 OD 后，除以无抗体对照孔相应 OD，得到相对指数。也可在多个无抗体本底孔取均值建立基线。实验室应预先定义低风险、中风险、高风险的 score 区间，而非仅凭单次绝对值判定候选优劣。所有 score 应结合抗体浓度、包被批号、板批号、二抗批号共同解释。

七、常见问题与解决方案

问题一：整体背景高。可能原因包括包被 BVP 浓度过高、封闭不充分、洗板次数不足、二抗浓度过高或 TMB 显色过久。解决方案：进行包被滴定，将稀释比例从 1:200 进一步调至 1:300 或更高；确认 BVP 原液未反复冻融导致聚集；延长或加强封闭，检查 BSA 质量；优化洗板程序；二抗按效价梯度重筛；显色时间控制在 10 至 12 分钟并预读。

问题二：测试孔信号全部偏低。可能原因包括一抗浓度不足、包被稀释过大、二抗失活、TMB 失效或酶标仪设置错误。解决方案：使用已知阳性多特异性抗体作为系统对照；检查一抗储存条件是否导致聚合或降解；更换二抗批号；用新鲜 TMB 验证显色能力；确认 450 nm 参数和空白孔基准。

问题三：孔间 CV 值过大。可能由包被不均、加样体积误差、洗板机针孔堵塞或微孔板边缘效应引起。解决方案：包被前充分混匀 BVP 但避免气泡；采用边缘孔加缓冲液或不参与判定的方式降低边缘影响；定期校准移液器；检查洗板机每针出液一致性；同一批次候选尽量随机布板。

问题四：无抗体对照孔 OD 偏高。可能是封闭不良、PBS 杂质、二抗直接黏附 BVP 或 TMB 自发显色导致。解决方案：更换 PBS 配方并做过滤除菌记录；提高 BSA 比例进行对比；设置仅二抗孔、仅 TMB 孔等对照；确认 HRP 二抗无交叉吸附。

问题五：不同批次 BVP score 不可比。可能因包被原液滴度、颗粒状态或冻融历史不同。解决方案：建立入库质检小板，每批到货用同一阳性参照、同一稀释、同一板型跑标准曲线；将新批 score 通过阳性校正因子转换；若偏差超过实验室 SOP 允许范围，暂停大批量筛选并联系供应商。

问题六：抗体来自非人源。产品公开 protocol 使用抗人 IgG-HRP，若检测小鼠、兔、驼源或双抗不同链，需更换对应抗物种 HRP 或通用抗 Fc、抗轻链二抗。更换后必须重新建立本底、阳性和稀释线性，不可直接套用人源体系 score 区间。

问题七：需要更高通量。96 孔板可扩展为自动化移液、洗板机和 LIMS 记录。若改为 384 孔板，需重新优化包被体积、BVP 浓度、洗液量和显色时间，不可直接套用 96 孔参数。

问题八：结果如何与体内 PK 关联。BVP score 是体外替代指标，可用于风险分层，但不单独预测人体半衰期。建议与动物 PK、FcRn pH 依赖结合、电荷分布、疏水色谱、自相互作用及其他非特异性结合实验共同建立判据。单指标高 score 仅提示需要进一步评估，不宜直接判定候选淘汰。

问题九：生物安全与废液处理。BVP 属于病毒颗粒类试剂，应按实验室生物安全规则操作。含病毒、HRP、TMB、硫酸的废液应分类收集，硫酸终止液按酸性废液中和或交危废处理，TMB 按化学废液管理，病毒废液按灭活规则处理后再排放。

问题十：如何编写 SOP 和验收标准。建议 SOP 包含货号 E3001、批号记录、-80℃ 储存、分装规则、包被 pH 与稀释、封闭 BSA、洗板次数、一抗浓度、二抗种属、TMB 品牌、终止酸浓度、450 nm 读数、无抗体本底归一公式、阳性参照、CV 上限、批次偏差处理和废弃规则。新员工作业前至少用已知高、中、低参照重复三次稳定结果，再进入正式筛选。

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更多产品信息，请联系中国区域代理商：上海起发实验试剂有限公司

（注：本文内容基于品牌公开资料及行业常规信息整理，具体以品牌信息文档为准。）