Pfu DNA 聚合酶

· Pfu DNA 聚合酶说明
本酶为Pyrococcus furiosus中分离的pfu DNA pol 基因在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得。Pfu DNA聚合酶具有3’-5’外切酶（校正）活性，当聚合反应发生碱基错配时，聚合酶的校正活性可将错配的碱基切除。Pfu DNA聚合酶为使用范围zui广的高保真DNA聚合酶，其错误率仅为1.3x10-6，推荐Pfu DNA聚合酶用于需高保真的PCR反应。

· 用途
用于要求保真度比较高的PCR反应，包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成等（参见 Sinobio 实验方案）。

· 产品特点
高保真：Pfu DNA聚合酶是使用zui广泛的高保真酶，其保真度为普通Taq酶的10倍。
灵敏：可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段（图例一）。
快捷：PCR反应所必需试剂全集于一管之中，数分钟即可完成反应体系配置。
便利：10μl, 25μl 或50μl体系全部适用。

· 质量保证
经多次柱纯化，SDS-PAGE检测纯度大于95%；
PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内、外切酶污染。

· 使用建议

Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平滑末端，无3’端"A"突出，其PCR产物的克隆有两种方案。
1. PCR前引物进行5’端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平滑末端的载体中（参见 Sinobio实验方案）。
2. 将产物3’末端加A后再与T-Vector连接（参见 Sinobio 实验方案）。
3. 由于Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3′端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度，理想的引物长度为20-30碱基。另外为了减少由3′-5′外切酶活性引起的引物降解，尽量在冰上配置反应体系，并zui后加入Pfu酶。

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· 其他说明