德国凯杰QIAGEN DNeasy Blood & Tissue Kit (货号 69506)中文说明书

一、 产品基础信息描述

本说明书针对的产品为 Qiagen 品牌旗下的经典分子生物学提取试剂盒——DNeasy Blood & Tissue Kit。该产品在国际生物科研领域被广泛应用于各类动物源性样本的基因组DNA提取。

•   产品英文全称：DNeasy Blood & Tissue Kit

•   产品中文译名：DNeasy 血液与组织DNA提取试剂盒

•   国际货号 (Cat. No.)：69506

•   品牌归属：Qiagen (凯杰)

•   核心规格：标准版提供50次或250次样本提取体系 (以250次为例，货号69506)

•   提取技术：基于硅胶膜离心柱技术 (Silica-Membrane Spin-Column Technology)

•   样本兼容性：专为动物血液、新鲜/冷冻动物组织、培养细胞、细菌 (革兰氏阳性/阴性)、昆虫及毛发等特殊样本优化

•   下游应用验证：成功应用于常规PCR、多重PCR (Multiplex PCR)、荧光定量PCR (qPCR)、数字PCR (dPCR) 以及新一代测序 (NGS)

此试剂盒提供了一种快速、便捷且无需使用酚氯仿等有毒有机试剂的DNA提取方案。其核心优势在于通过蛋白酶K在优化的裂解缓冲液中直接裂解样本，绕过了传统的机械破碎步骤，极大地缩短了手动操作时间并降低了气溶胶污染的风险。此外，整个提取流程高度契合Qiagen QIAcube Connect自动化平台，可实现从样本裂解到DNA洗脱的全自动化操作，满足现代实验室对高通量与标准化的严苛需求。

二、 产品核心特点与技术优势

1. 操作简洁且高度优化：对于绝大多数动物组织及血液样本，该试剂盒仅需加入蛋白酶K与特定缓冲液，在56℃条件下孵育即可完成裂解。这种酶解主导的裂解方式避免了使用匀浆仪或液氮研磨带来的样本间交叉污染风险，尤其适合大批量临床或兽医样本的快速前处理。

2. 广泛的样本普适性：无论是高含量的肝脏组织，还是富含胶原蛋白的皮肤、肌腱，亦或是极难裂解的革兰氏阳性菌和真菌细胞壁，该试剂盒均提供了经过验证的标准化或补充操作方案，确保从不同生物学材料中均能稳定获取高质量基因组DNA。

3. 抑制剂去除能力：试剂盒内置的专属缓冲液体系与洗涤步骤，能有效去除样本中的多糖、蛋白及PCR反应抑制因子。提取出的DNA纯度高，无需额外纯化步骤即可直接作为模板用于各类下游酶学反应。

4. 灵活的通量适配性：除了常规的单次样本离心柱操作，该系列还提供DNeasy 96 Blood & Tissue Kit版本，配合Qiagen 96孔板离心系统，可一次性处理96至192个样本，契合药物筛选或群体遗传学的高通量需求。

5. 环保升级选项的兼容性：虽然本货号 (69506) 为标准版，但值得一提的是，Qiagen同期推出了QIAwave DNA Blood & Tissue Kit作为可持续替代方案。QIAwave版本在保持与本产品全一致的化学成分与提取性能的前提下，大幅减少了塑料与纸板的消耗。这展现了该提取技术体系的成熟与环保潜力。

三、 工作原理的深度科学解析

DNeasy Blood & Tissue Kit 的核心提取机制建立在高离液盐 (Chaotropic salts) 存在下的硅胶膜特异性吸附技术之上。这一物理化学过程高效且具选择性。

1. 细胞裂解与蛋白质消化：在含有高浓度异硫氰酸胍 (Guanidine thiocyanate) 等离液剂的裂解缓冲液中，细胞或细菌壁被迅速破坏，释放出内部的核酸分子。同时，加入的蛋白酶K (Proteinase K) 在还原剂存在的环境下，能够迅速切断组蛋白与核酸之间的结合，并将大部分蛋白质降解为小肽段或氨基酸。

2. 核酸的选择性吸附：当溶液中的离液盐浓度达到临界值时，水分子会被高浓度的盐离子所占据（即脱水作用）。此时，呈负电的DNA磷酸骨架暴露出来，与硅胶膜上带正电荷的官能团发生强烈的静电相互作用，从而使DNA被牢固地吸附在离心柱的硅胶膜上。

3. 严格的杂质清洗阶段：在DNA结合后，通过短暂的离心，含有细胞碎片、多糖、代谢废物及有机溶剂的废液被甩入收集管底部。随后加入的洗涤缓冲液I和II，进一步在高盐环境下清除硅胶膜上残留的蛋白质、脂质及其他细胞代谢物，确保最终的DNA产物纯净无污染。

4. 低盐环境下的温和洗脱：最后一步，使用低盐或无盐的洗脱缓冲液 (如Buffer AE或无菌水) 平衡硅胶膜的电荷环境，中和静电引力，从而使吸附在膜上的纯净基因组DNA重新溶解在洗脱液中，便于后续实验取用。

四、 解决的实验痛点与实际应用场景

在日常的分子生物学、兽医病理学及转基因动物研究中，科研人员常常面临诸多棘手的样本处理难题，而本产品正是为了解决以下核心痛点而设计的：

1. 解决了微量及非标准样本的提取困境

  在进行大型家畜（如猪、牛）的基因分型或野生动物（如马匹）的系谱鉴定时，往往只能获取到极少量的样本（如一根毛发、少许干燥血液斑点或微量皮肤活检组织）。本试剂盒凭借其高灵敏度的载体DNA可选添加方案及高效的微量核酸回收技术，能够从这些“非标准"样本中提取出足以为下游基因分型提供可靠数据的基因组DNA。

2. 攻克了高难度样本的裂解壁垒

  某些特殊样本（如昆虫外骨骼、酵母细胞壁、某些顽固的革兰氏阳性菌）具有极其坚韧的细胞壁结构，常规的SDS裂解或碱裂解法难以奏效。该试剂盒通过提供特定的补充操作方案（如延长蛋白酶K孵育时间、调整离液盐浓度），在不依赖昂贵机械破壁设备的前提下，实现了对这些硬核样本的充分酶解。

3. 消除了复杂样本中的PCR抑制效应

  在转基因小鼠的常规实验室分析或肉类加工食品的转基因成分检测中，样本常含有大量的血红素、胶原蛋白、多糖或食品防腐剂，这些物质会严重抑制Taq DNA聚合酶的活性。本试剂盒的多步洗涤缓冲液系统能针对性地去除这些抑制因子，提取出的DNA即使在多重荧光定量PCR中也能展现出佳的反应曲线。

4. 满足了食品安全与成分鉴定的合规需求

  针对植物性食品（如大豆、豆腐、饼干）或深加工肉制品（如香肠、巧克力），该试剂盒可与Qiagen其他专用试剂盒互补，为食品中的外源基因（如Roundup Ready Soybean和MON810 Maize）检测提供合格的模板DNA，助力食品安全的合规筛查。

五、 详细实验操作流程 (以标准动物血液/组织为例)

为了确保每一次提取都能获得稳定、高质量的DNA，请务必严格按照以下步骤进行操作。实验前，请确保所有缓冲液已达到室温，并在Buffer AW1和AW2中加入指定体积的乙醇。

第一步：样本的预处理与裂解

•   动物组织：取25-30 mg新鲜或冷冻的组织块。为避免DNA剪切，请勿使用高速匀浆机。直接将组织块放入1.5 ml离心管中，加入180 µl Buffer ATL和20 µl Proteinase K (10 mg/ml)，涡旋混匀。

•   动物全血：取20-100 µl抗凝血，加入180 µl Buffer ATL和20 µl Proteinase K，充分混匀。

•   孵育裂解：将离心管置于56℃水浴箱中孵育。对于软组织（如肝脏、脾脏），通常1-3小时即可全消化；对于硬组织（如皮肤、肌肉）或血液中白细胞沉淀，建议延长孵育时间至 overnight（过夜），期间可轻轻振荡混匀以加速裂解。

第二步：调整结合条件与上柱

•   裂解全后，短暂离心将管盖上的液滴甩下。加入200 µl Buffer AL，涡旋15秒使其与裂解液充分混合。此时溶液应变得清亮。

•   加入200 µl无水乙醇 (Ethanol)，再次涡旋混匀。此时可能会出现白色沉淀，属正常现象。

•   将DNeasy Mini离心柱放入收集管中，将样本-缓冲液混合液全部转移至离心柱内（若体积过大，可分两次转移）。

•   12000 rpm (~13400 x g) 离心1分钟。将流出液倒入废液缸，再将离心柱放回收集管。

第三步：杂质洗涤与去除

•   向离心柱内加入500 µl Buffer AW1。12000 rpm 离心1分钟，弃去收集管底部的废液。

•   向离心柱内加入500 µl Buffer AW2。13000 rpm (~17900 x g) 离心3分钟，这一步的目的是去除残留的乙醇和盐离子。

•   关键提示：为防止乙醇残留影响后续酶切或PCR反应，建议将离心柱开盖，在室温下静置5-10分钟，使硅胶膜全干燥。

第四步：DNA的洗脱与保存

•   将离心柱转移至一个新的1.5 ml干净离心管中。

•   向硅胶膜中央悬空滴加50-200 µl 预热至55℃的Buffer AE或无菌蒸馏水。室温静置1-5分钟，让DNA充分溶解。

•   12000 rpm 离心1分钟，管底即为提取完成的基因组DNA。

•   提取的DNA可立即用于下游实验，或于-20℃/-80℃长期保存。

六、 针对不同样本类型的专项优化建议

为了帮助您应对更复杂的实验材料，以下是基于大量实验数据总结的特殊样本处理建议：

1. 细菌样本 (革兰氏阳性/阴性菌)

  在处理细菌时，预期得率约为每2x10^9个细胞提取10 µg基因组DNA。由于细菌细胞壁的坚韧程度差异巨大，对于革兰氏阳性菌（如葡萄球菌、链球菌），建议在Buffer ATL中加入蛋白酶K后，适当提高孵育温度至70℃并延长消化时间；或者在56℃过夜孵育后，补加一次蛋白酶K继续消化，这能显著提升破壁效率及最终的DNA得率。

2. 酵母与真菌样本

  酵母细胞壁含有大量几丁质和葡聚糖，常规蛋白酶K难以快速穿透。针对此类样本，请务必参照本产品专门的补充操作方案《Purification of total DNA from yeast using the DNeasy Blood & Tissue Kit》(DY13)。通常需要预先使用机械力（如玻璃珠震荡破碎）或加入特定的破壁酶（如Lyticase）进行预处理，然后再衔接标准的DNeasy提取流程。

3. 昆虫样本

  昆虫的硬壳和外骨骼极易在提取过程中引入大量的几丁质和黑色素，这些物质具有强烈的PCR抑制效应。请遵循专门的补充方案《Purification of total DNA from insects using the DNeasy Blood & Tissue Kit》(DY14)。在裂解阶段，增加蛋白酶K的用量并延长孵育时间至过夜是确保充分消化的关键。同时，在洗涤步骤中确保Buffer AW2去除残留的杂质。

4. 微量与痕量样本 (如单根毛发、唾液、粗提裂解液)

  当处理预期DNA含量低于10 ng的微量样本时，强烈建议在裂解或结合步骤中加入载体DNA（如poly-dA、poly-dT或鲱鱼精DNA），其终浓度应不低于10 µg/ml。这能为微量核酸提供结合位点，防止其在纯化过程中因吸附损耗而丢失。但需注意，若后续实验涉及寡核苷酸引物（如oligo-dT）的使用，则不能使用poly-dA作为载体，以免引发非特异性结合干扰实验结果。

5. 植物细胞与食品基质

  虽然本试剂盒主要针对动物样本优化，但在处理转基因大豆、玉米或深加工食品（如巧克力、香肠）时同样表现优异。对于富含多糖的植物组织，可参考《Purification of total DNA from crude lysates using the DNeasy Blood & Tissue Kit》(DY15) 方案，即先使用SDS或CTAB法自行裂解植物样本，去除多糖和次生代谢物后，取上清液接入DNeasy流程进行硅胶膜纯化。

七、 下游应用表现与核酸质控标准

提取的基因组DNA质量直接决定了后续分子生物学实验的成败。使用DNeasy Blood & Tissue Kit提取的DNA，在各项下游应用中均展现出高度的可靠性：

1. PCR与多重PCR应用

  提取的DNA不含血红素或其他蛋白酶抑制剂，能够作为理想的模板用于标准PCR扩增。在需要同时扩增多个位点的高效16重PCR体系中，使用该试剂盒提取的模板依然能够支持所有靶点呈现出均匀、清晰的扩增条带，无明显的偏好性或抑制现象。

2. 荧光定量PCR (qPCR) 与数字PCR (dPCR)

  在需要高灵敏度和精准定量的应用中（如转基因小鼠的拷贝数分析、病原载量测定），DNA的纯度至关重要。该试剂盒提取的DNA在qPCR中展现出极低的Ct值背景噪音和扩增效率曲线。同时，其也全兼容高灵敏度的dPCR和NGS建库需求。

3. 浓度测定与质控建议

  •   光谱光度法：使用NanoDrop等分光光度计检测时，纯的基因组DNA在260 nm处有吸收峰，A260/A280比值应在1.8-2.0之间，A260/A230应大于2.0。

  •   荧光定量法：对于低浓度样本（如毛发或微量血），分光光度计往往无法给出准确数值。此时，推荐使用PicoGreen等DNA特异性荧光染料进行定量，该方法灵敏度高，可准确测定pg级别的核酸。

  •   完整性检测：通过0.8%琼脂糖凝胶电泳检测，完整的基因组DNA应呈现一条位于胶孔附近的高分子量条带。若发生降解，会出现拖尾现象。

八、 常见问题排查与解决方案 (Troubleshooting)

在实验过程中遇到问题时，请参考以下排查指南进行优化：

1.如果遇到 DNA 得率极低或无 DNA 的情况，可能的原因包括样本未充分裂解、乙醇忘记加入 Buffer AW1/AW2 导致结合失败、洗脱体积过小或 pH 值不当、以及微量样本未发生载体 DNA 沉淀。对应的解决方案为：延长蛋白酶 K 孵育时间，或提前液氮研磨以增加接触面积；检查洗涤缓冲液配制过程，确保加入了正确体积的乙醇；使用 pH 7.5-8.0 的 Buffer AE 洗脱，可适当加热至 55℃ 以促进溶解；在微量样本中加入 poly-dA 等载体 DNA 辅助沉淀。

2.如果 DNA 纯度差，导致 PCR 无扩增，这通常是因为洗涤不充分导致蛋白酶 K 残留，或者乙醇残留抑制了 Taq 酶活性，也可能是样本本身含有多糖或色素抑制剂。建议严格按规程加入 Buffer AW1 和 AW2，并执行高转速离心；增加一次无水乙醇洗涤步骤，或延长离心柱干燥时间；针对特殊样本参考补充方案，必要时增加苯酚/氯仿抽提前处理步骤。

3.如果 DNA 在洗脱液中不溶解或呈粘稠状，可能是因为洗脱缓冲液体积过少，或者基因组 DNA 分子量过大发生剪切困难。建议增加洗脱缓冲液体积至 100-200 µl。洗脱时置于 55℃ 水浴 1-2 小时并轻柔摇晃，切勿剧烈震荡，以免造成 DNA 断裂。

4.如果 A260/A230 比值过低（小于 1.8），表明离液盐或乙醇未洗净，或者样本中含有较多多糖或蛋白杂质。应严格执行 Buffer AW2 的高转速 (13000 rpm) 离心步骤；样本裂解后，可先 8000 rpm 离心 5 分钟，取上清液进行过柱操作，以去除不溶性杂质。

九、 试剂组分、储存条件与实验室安全规范

1. 试剂盒组成 (以50次规格为例)

  货号69506试剂盒通常包含：DNeasy Mini离心柱 (50个)、2 ml收集管 (50个)、Buffer ATL (50 ml)、Buffer AL (50 ml)、Buffer AW1 (15 ml，使用前按指示加乙醇)、Buffer AW2 (18 ml，使用前按指示加乙醇)、Buffer AE (15 ml)、蛋白酶K (10 mg/ml, 1.5 ml)。

2. 储存与保质期

  •   蛋白酶K (Proteinase K)：收货后可室温稳定保存1年。为延长其活性寿命，建议储存于2-8℃。

  •   其他缓冲液 (Buffer ATL, AL, AW1, AW2, AE)：室温 (15-25℃) 密封储存。一旦开启，建议在1年内使用完毕以保证最佳效果。

  •   DNeasy Mini离心柱：室温干燥避光保存。

3. 废液处理与实验室安全

  •   本试剂盒中的裂解液和结合缓冲液含有异硫氰酸胍等离液盐成分，具有一定的生物灭活能力，可降解部分有害生物材料。

  •   所有接触过生物样本的废液（特别是含有离液盐和蛋白酶K的废液）绝对不能直接与漂白剂或酸性溶液混合，否则会产生剧毒的气体。

  •   实验过程中产生的固体废物（如Tip头、离心管），以及未处理完的生物样本残渣，必须根据您所在机构的生物危害废物处置指南进行分类和高压灭菌处理。

  •   操作全程请穿戴实验服、佩戴防护手套和护目镜，在通风橱内处理挥发性试剂。

关键词：DNeasy Blood & Tissue Kit、QIAGEN 69506、动物组织DNA提取试剂盒、血液基因组提取试剂、硅胶膜离心柱DNA提取、蛋白酶K裂解法、兽医病原体基因检测、转基因小鼠基因分型、多重PCR模板制备、荧光定量PCR DNA提取、QIAGEN自动化提取、96孔板高通量DNA纯化、酵母基因组DNA提取、昆虫DNA提取试剂盒、微量毛发DNA提取、载体DNA使用指南、异丙醇沉淀法浓缩DNA、Buffer AE配方用途、实验室生物危害废液处理、环保型QIAwave DNA提取

更多产品信息，请联系中国区域代理商：上海起发实验试剂有限公司

（注：本文内容基于品牌公开资料及行业常规信息整理，具体以品牌信息文档为准。）

🔖热卖产品