3'-BHQ-2 CPG - (20-5932)Glen Research产品说明书

一、产品描述

• 产品货号：20-5932

• 英文名称：3'-BHQ-2 CPG

• 中文名称：3'-黑洞淬灭剂-2 可控孔度玻璃载体

• 品牌：Glen Research

• 化学名称：4'-(4-硝基苯基二氮烯基)-2'-甲氧基-5'-甲氧基偶氮苯-4''-(N-乙基-2-O-(4,4'-二甲氧基三苯甲基))-N-乙基-2-O-乙醇酸-CPG

• 分子量：556.47

• 孔径：1000Å

• 规格选项：1.0 g、0.1 g、1 x 10 µmol、1 x 15 µmol、4 x 1.0 µmol、4 x 0.2 µmol

• 产品类别：修饰与标记 / 荧光淬灭剂 / 淬灭剂固相载体

3'-BHQ-2 CPG 是 Glen Research 推出的一种用于寡核苷酸固相合成的专用淬灭剂载体，适用于需要将淬灭基团固定在寡核苷酸 3' 末端的实验设计。该产品将 BHQ-2 淬灭染料通过连接臂共价结合在高分子量的可控孔度玻璃（CPG）载体上，可在标准亚磷酰胺固相合成流程中直接使用。其结构设计使 BHQ-2 基团在合成过程中保持稳定，同时保留良好的反应活性，有利于获得高质量的荧光探针寡核苷酸。

二、产品特点

1. 与常规亚磷酰胺合成兼容：该载体含有 DMT（二甲氧基三苯甲基）保护基，使用方式与常规受保护的核苷 CPG 载体一致，无需对合成仪程序作特殊调整。

2. 适用于氨解脱保护流程：产品可在室温下用氨水完成从载体上的切割，切割时间建议不少于 20 分钟，之后按碱基保护基的要求完成脱保护。

3. 具有较大的消光系数：BHQ-2 淬灭基团具有较高的消光系数，能够在特定波长范围内有效吸收荧光染料发出的能量。

4. 非荧光性质：BHQ-2 属于暗淬灭剂，本身不产生明显的荧光背景，有助于降低探针的本底信号。

5. 适用范围较广：BHQ 系列淬灭剂可配合多种荧光染料使用，包括一些发射波长较长的红色或近红外染料，如 Cy3 和 Cy5。

6. 适合分子信标等探针设计：该产品可用于构建具有荧光共振能量转移或近距离淬灭机制的核酸探针。

7. 保存条件明确：建议在 -10℃ 至 -30℃ 的低温环境中干燥保存，并避免强光照射。

三、储存条件

3'-BHQ-2 CPG 应置于低温冷冻环境中保存，推荐温度为 -10℃ 至 -30℃，同时须保持干燥。产品对光较为敏感，操作及存放时应尽量避免长时间光照。开封后应注意密封，防止吸潮和污染。使用前可从低温环境中取出，在适宜条件下平衡至操作温度后再进行称量或装柱，以减少因温差造成的 condensation 或材料性质变化。具体储存期限可参考随产品提供的分析证书或质量文件。

四、工作原理

荧光探针通常由荧光基团和淬灭基团共同构成。当荧光基团与淬灭基团之间的距离足够近时，荧光基团受到激发后释放的能量可被淬灭基团吸收，从而使体系在初始状态下保持较低的荧光信号。若探针与靶序列结合，探针的空间构象发生改变，使荧光基团与淬灭基团分离，荧光信号随之增强。BHQ-2 是一种暗淬灭剂，其吸收谱覆盖较宽的波长范围，能够与多种荧光基团配合使用。由于部分 BHQ 体系的淬灭机制不全依赖传统的荧光共振能量转移，其淬灭效果对供体与受体光谱重叠程度的依赖相对较低。将 BHQ-2 固定在 3'-CPG 上后，可在合成时直接形成具有 3' 端淬灭基团的寡核苷酸，适用于分子信标、TaqMan 探针及其他需要末端淬灭功能的核酸探针。

五、解决实验中的哪些问题

1. 解决探针背景信号偏高的问题：通过将非荧光淬灭基团直接引入寡核苷酸 3' 端，可降低未结合探针的荧光本底，从而提高信号与背景之间的比值。

2. 解决长波长染料难以有效淬灭的问题：BHQ-2 的吸收范围可覆盖部分红色和近红外染料的发射区域，为 Cy3、Cy5 等染料提供更匹配的淬灭选择。

3. 解决探针构建步骤复杂的问题：由于该产品为末端功能化 CPG 载体，可在常规固相合成流程中直接引入 3' 端 BHQ-2，减少额外偶联或后修饰步骤。

4. 满足分子信标等空间构象型探针需求：3' 端淬灭基团可与 5' 端荧光基团形成空间上的邻近关系，在探针构象改变时实现“关闭—开启"型信号变化。

5. 适配标准化合成平台：产品使用方式与常见核苷 CPG 载体相似，有助于减少合成工艺调整。

六、使用方法

1. 合成前准备：根据目标寡核苷酸序列和探针结构选择相应规格的 3'-BHQ-2 CPG。确认合成柱、合成仪程序及亚磷酰胺、活化剂、氧化剂、封闭剂等试剂齐全。

2. 装柱与活化：按合成仪操作规范将 CPG 载体装入合成柱，并检查装置密封性和试剂通路。该载体含有 DMT 保护基，通常无需额外脱保护处理即可进入标准偶联流程。

3. 固相合成：按照常规寡核苷酸合成步骤依次完成脱保护、偶联、氧化或硫化、封闭等循环。BHQ-2 基团已结合于 CPG 上，因此应将其视为序列合成的起始载体，而不是单独加入的亚磷酰胺试剂。

4. 载体切割与脱保护：使用氨水在室温下处理，切割时间不得少于 20 分钟；随后按照碱基保护基所要求的方法完成充分脱保护。产品说明指出，不建议在超快速脱保护方案中使用甲胺，因为甲胺可能导致染料降解。

5. 纯化与鉴定：根据实验需要选择反相色谱、凝胶过滤或其他适合含染料寡核苷酸的纯化方式。纯化后应检测序列、修饰引入情况和荧光/淬灭性能，并尽快分装保存。

七、常见问题与解决方案

1. 荧光本底仍然较高：可检查荧光基团与 BHQ-2 之间的距离及探针二级结构，同时确认探针序列、纯化程度及缓冲体系是否合适。

2. 淬灭效率未达到预期：应核对荧光染料与 BHQ-2 的吸收/发射匹配关系，检查探针浓度、构象和空间距离，并确认 BHQ 基团是否成功接入。

3. 脱保护后出现异常：应严格避免将甲胺用于超快速脱保护，并按照推荐的氨水处理时间和温度操作，以减少染料或寡核苷酸降解。

4. 偶联或合成效率偏低：应检查 CPG 装载量、合成柱装填情况、试剂活性及合成仪参数，并确认实验流程是否与常规亚磷酰胺合成条件一致。

5. 产品难以溶解或分散：应结合后续纯化步骤进行操作，避免仅凭表观分散状态判断产物质量；必要时可参考含染料寡核苷酸的相关技术资料。

6. 冻存后性能出现疑问：应检查保存温度、避光情况、密封性和冻融次数，并尽量按照一次用量分装保存。

7. 纯化后染料信号异常：建议通过分光光度法、质谱或其他适用于染料标记寡核苷酸的方法确认产物质量，并排除副反应和纯化损失。

八、注意事项

该产品属于实验用化学原料，仅限于科学研究和合法合规的实验用途。操作人员应阅读并理解相关安全数据表，并在适当防护条件下使用。不同实验平台、合成仪型号和脱保护方案可能存在差异，建议在实际使用前根据实验体系进行方法验证。产品的具体规格、纯度、批号及分析数据应以随货文件为准。

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（注：本文内容基于品牌公开资料及行业常规信息整理，具体以品牌信息文档为准。）