Glen-Pak™ 150 mg（60-5100）Glen Research纯化柱中文说明书

一、产品描述

1. 基本信息

• 产品英文名：Glen-Pak™ 150 mg Purification Cartridge

• 产品中文名：Glen-Pak™ 150毫克反相寡核苷酸纯化柱（实验室常简称为“Glen-Pak 150 mg DNA/RNA纯化柱"）

• 品牌：Glen Research

• 所属系列：Glen-Pak™ Reverse Phase Oligonucleotide Purification Products（反相寡核苷酸纯化产品）

• 主页面货号：60-5100 系列

• 相关兼容货号：60-5200 系列（标注为“for use with disposable syringes"，即配合一次性注射器使用）

2. 规格与包装

本产品为单次使用的固相萃取柱，每柱装填约 150 mg Glen-Pak 专用树脂。根据实验室通量需求，提供多种包装规格选项，包括：

• Pk/10（10支装）

• Pk/30（30支装）

• Pk/96（96支装）

具体货号后缀与接口格式（如适配真空歧管或鲁尔注射器）需在下单页面的兼容表中选择确认。

3. 适用范围与合成规模

Glen-Pak 150 mg 纯化柱适用于 DMT-on（5'端保留二甲氧基三苯甲基） 的常规 DNA 寡核苷酸纯化，同时可依据 User Guide 拓展至 RNA 及多种修饰寡核苷酸的纯化。建议的合成规模兼容性为 10 nmole 至 1.0 µmole。该规格在 Glen-Pak 产品矩阵中位于 50 mg 柱与 3 g 柱之间，适合单个引物、探针、修饰寡核苷酸的中小体量处理，也适合多项目轮换的常规实验室。

4. 产品定位

本产品为反相/离子对协同的 trityl-on 固相纯化耗材，承接从合成柱脱保护后的粗液，通过稀释、上样、盐洗、脱 DMT、水洗和有机相洗脱，获得全长比例改善、盐类减少的寡核苷酸溶液，是连接化学合成与后续生物实验的关键中间环节。

二、产品特点

1. 单次稀释上样，操作简化：相比传统需要多步预处理或部分重溶的体系，Glen-Pak 可将氨水、AMA 等脱保护后的粗液按盐浓度要求稀释后直接上样，减少冻干、转移和重复溶解次数，降低样品损失风险。

2. DMT-on 全长选择性：依靠 5' 端 DMT 基团的疏水性和离子对作用，树脂对全长产物产生强保留；失败序列、提前终止链、部分短杂链在盐洗阶段被去除。资料显示，其纯化范围可拓展至 100+ mer 级别。

3. 不依赖氟代 DMT 基团：与 Fluoro-Pak 需使用氟代 DMT 和专用亚磷酰胺不同，Glen-Pak 采用常规 DMT 标签，无需额外采购特殊单体，在常规合成路线中更容易衔接，物料与工艺成本相对可控。

4. 广泛的修饰与染料兼容性：经技术报告验证，该产品可适用于多种氨基修饰、生物素及生物素 TEG、磷酸化、部分硫醇/二硫修饰前体，以及对 Cy 系列、FAM、HEX、TAMRA 等常见荧光染料的标记寡核苷酸纯化。

5. DNA 与 RNA 双路线支持：提供面向 DNA 和 RNA 的专用配方与协议。RNA 粗品因二级结构和碱敏感性，可通过预热、调整盐洗和乙腈比例等方案优化结合与洗脱。

6. 规格梯度完整：除 150 mg 外，同系列还有 50 mg 柱、3 g 柱、30 mg 96孔板、3 mg 384孔板，用户可根据合成量和通量灵活选择。

三、储存条件

Glen-Pak 150 mg 纯化柱建议在 受控室温（Controlled room temperature） 环境下储存，避免长期暴露于高温、直接日晒、强酸碱蒸气和强有机溶剂蒸气。未开封柱体应保持原包装密封，防止树脂吸湿或受外源污染。

实验室操作环境宜保持清洁，避免粉尘进入鲁尔口或管路。若当地法规或内部质量体系对“受控室温"另有数值定义，应按本单位仓储 SOP 执行。产品技术文档未要求冷链或冷冻储存时，不建议自行改为冷藏；若柱体已用有机溶剂条件化或接触样品，则按化学废物和实验室安全规则处理，不再作为未使用耗材储存。

四、工作原理

Glen-Pak 纯化柱属于反相保留结合离子对助留的固相萃取系统，其核心流程分为以下步骤：

1. 条件化：使用乙腈与 TEAA（三乙胺乙酸缓冲液，常用 2.0 M，pH 约7）润湿疏水树脂，去除干柱孔隙空气，并建立离子对环境，使后续寡核苷酸磷酸骨架能与试剂形成稳定配对。

2. 上样结合：将脱保护粗液与氯化钠溶液混合至合适盐浓度后上样。全长 DMT-on 寡核苷酸因强疏水性被树脂保留；多数失败序列因 5' 无 DMT 或亲水性强，随流出液排出。

3. 盐洗除杂：用含低盐和少量乙腈的洗涤液去除未被强保留的短链、盐类和极性杂质。

4. 脱 DMT：用低浓度三氟酸（常用 2% TFA/水）酸化并裂解 5' DMT 基团，生成三苯甲基阳离子（柱内可能出现淡橙或粉红色带）。脱除 DMT 后，全长寡核苷酸失去主要疏水标签，转为更易被水洗脱的状态。

5. 水洗去酸：用去离子水洗涤，去除残余 TFA、TEAA 和氯化钠，为洗脱创造低离子环境。

6. 洗脱收集：用含少量氨水的 50% 乙腈水溶液洗脱，弱碱性环境中和前序酸性残留，使产物从树脂解吸附，收集后得到较纯净的寡核苷酸溶液。

五、解决实验中哪些问题

1. 减少失败序列干扰：化学合成产生的封端失败、缺失、提前终止等杂质，若直接进入 PCR、qPCR、测序或 siRNA 组装，会竞争酶活、影响熔解曲线。本产品通过 DMT-on 选择性富集全长产物。

2. 降低盐与脱保护剂残留：氨水、AMA 等脱保护液盐度高、碱性强，直接用于酶反应会抑制活性。过柱后可替换成低盐水/有机洗脱体系，再经冻干或转盐获得洁净寡核苷酸。

3. 提升荧光与生物修饰寡核苷酸可用性：粗品中常混有自由染料、未反应修饰前体。Glen-Pak 对多种染料和修饰有兼容方案，可减少背景干扰，提高后续偶联、固定化或成像定量的准确性。

4. 支持长寡与高 GC 纯化：大于 40 mer 或 G-四链体倾向序列在常规柱上易结合不均，本产品通过盐浓度和有机相比例调整，改善长链回收。

5. 简化 RNA 与敏感修饰流程：RNA 粗品对碱和热更敏感，DMT-on 路线可在不全暴露全长亲水态前完成保留和除杂；硫醇二硫类可先以 DMT-on 全长度过第一柱，再按需还原。

六、使用方法

以下为 150 mg 柱 DMT-on DNA 标准参考流程，实际体积可根据合成量、序列长度和 User Guide 调整。使用真空歧管或注射器时，均应避免流速过快。

1. 样品准备

合成结束后，按所用支持物与碱基保护基进行脱保护。常规 DMT-on DNA 可用浓氨水或 AMA 在建议温度和时间下裂解；RNA 必须使用 RNA 兼容脱保护液。脱保护后通常不必冻干，保留在水相碱液中。

2. 盐浓度调整

将脱保护液与 100 mg/mL 氯化钠按比例混合，使上样总液终盐接近约 50 mg/mL。标准 150 mg 协议示例：1 mL 脱保护液加 1 mL 100 mg/mL NaCl，总体积 2 mL。上样量低于 10 nmole 可评估 50 mg 柱；高于 1.0 µmole 应考虑 3 g 柱或多柱分流。

3. 柱子条件化

将柱装入真空歧管鲁尔口或连接注射器适配器。先后用约 0.5 mL HPLC 级乙腈、约 1 mL 2.0 M TEAA（pH约7）条件化。真空系统可参考 12口歧管、压力约 7 mmHg；若无压力阀，用注射器或重力控制为每秒约 1–2 滴。

4. 上样结合

将盐/粗寡混合液分次加到柱床顶部，收集穿过液以备异常时返工。若样品较浓、体积较大或易形成二级结构，可分多批上样。长寡、高 CG、发夹序列可参考预热方案：将混合液在约 55℃ 加热约 15 分钟并趁温上样。

5. 盐洗除杂

用 2 次约 1 mL 盐洗液（5% 乙腈溶于 100 mg/mL 氯化钠）洗涤。此步去除残余失败序列和极性杂质。若流出液仍浑浊或 UV 显示大量物质，可增加盐洗次数，但应避免过度洗涤导致全长损失。

6. 脱 DMT

用 2 次约 1 mL 2% TFA/水通过柱床。DMT 被酸切下，柱内或废液可呈淡橙红色。含酸敏感修饰时，应先查技术报告确认兼容性。

7. 水洗去酸去盐

用 2 次约 1 mL 去离子水洗涤，去除 TFA、残余 TEAA 和氯化钠。水洗后柱床应为低离子、低有机状态。

8. 洗脱收集

用约 1 mL 50% 乙腈/水并含约 0.5% 氨水的洗脱液通过柱床，收集洗脱峰。需要更高回收可再做一次同体系洗脱并合并。收集后可用紫外 260 nm 定量，按 OD、序列长度和消光系数计算 nmole 数。若需长期保存，可冻干后重悬于无 RNase 水、TE 或专用缓冲。

9. 特殊修饰处理

• 硫醇/二硫类：可按首柱 DMT-on 保留并洗脱全长，再按需用 DTT 还原二硫并脱 DMT，用另一支柱脱盐。

• 荧光 5' 标记：参考 6-FAM 等技术简报，优化盐洗乙腈比例、TFA 接触时间和洗脱次数，避光操作。

• RNA DMT-on：必须采用 RNA User Guide，不将 DNA 盐洗体积直接套用。

七、常见问题与解决方案

1. 上样后穿过液 OD 过高、回收偏低

  • 原因：盐浓度不合适、样品未充分 DMT-on、流速过快或柱饱和。

  • 处理：重新确认合成为 5' DMT-on；按协议调整终盐浓度；降低真空压力或推速；若合成量接近上限，评估分流或换 3 g 柱。保留穿过液以备返工。

2. 盐洗后仍有大量杂质

  • 处理：增加盐洗次数或微调盐洗中乙腈比例；对疏水染料或长链高 GC，按对应技术报告小试。平衡盐浓度与洗涤体积，避免全长损失。

3. TFA 脱 DMT 后颜色不明显

  • 处理：DMT 阳离子颜色受浓度和观察条件影响，不一定肉眼可见。应结合 HPLC、质谱或 IE-HPLC 判断；若怀疑脱除不全，可在确认序列稳定后补少量 2% TFA 接触。

4. 洗脱产量低但纯度尚可

  • 处理：可能是洗脱体积不足或乙腈比例偏低。可尝试第二次 50% 乙腈含稀氨水洗脱并合并；长寡可适当提高乙腈比例或延长温热洗脱，但需先验证稳定性。

5. 洗脱液偏酸或后续酶反应受抑

  • 处理：保证水洗充分、洗脱液含规定氨水，收集后立即测 pH 或用弱碱缓冲中和。酶学用途建议将洗脱液脱盐或换 TE/水后再做功能验证。

6. RNA 纯化不稳定、降解或结合差

  • 处理：使用专用脱保护、条件化和盐洗协议；操作全程防 RNase。高二级结构 RNA 可评估预热、变性剂兼容性和低盐缓流上样。

7. 荧光标记寡核苷酸背景高

  • 处理：优化上样盐浓度、盐洗乙腈比例和 TFA 时间；对光敏感染料避光操作；自由染料疏水很强时，先小柱试验确定盐洗强度。

8. 硫醇/二硫修饰氧化或偶联差

  • 处理：二硫前体可在首柱保持 DMT-on 完整洗脱，后续用还原剂处理并及时脱盐；自由硫醇产物避免与金属、空气长时间接触。

9. 柱体干裂或流速异常

  • 处理：重新用乙腈润湿，检查鲁尔接口和歧管密封；注射器操作避免强力推压。若树脂明显干涸且无法再润湿，不建议继续用于定量纯化。

10. 多项目轮换、批次一致性要求高

   ◦ 处理：记录每批合成量、脱保护液体积、盐浓度、条件化试剂批号、洗涤体积、洗脱体积、OD 和质控结果，便于追溯回收率和纯度波动。

八、产品推荐与替代选择

对于单个引物、探针、修饰 oligo 在 10 nmole–1.0 µmole 区间，可优先评估 60-5100 系列 150 mg 柱；若主要用手动注射器小量处理，可评估 60-5200 系列 150 mg 注射器款。低于约 200 nmole 且通量小，可查看 50 mg 柱（货号 60-5000）；高于 1 µmole 到数十 µmole，评估 3 g 柱（货号 60-5300）；96 孔并行 10–50 nmole 看 30 mg 板（货号 60-5400）；384 兼容到约 20 nmole 看 3 mg 板（货号 60-5500）。用户应根据实际合成规模、自动化程度和接口类型选择，无需表格对比即可明确适配方向。

关键词：Glen-Pak 150mg纯化柱、Glen Research寡核苷酸纯化、DNA引物反相纯化、RNA寡核苷酸DMT-on纯化、引物探针去盐脱保护、长寡核苷酸纯化柱、荧光标记寡核苷酸纯化、Cy3 Cy5 FAM引物纯化、生物素氨基寡核苷酸纯化、硫醇二硫修饰纯化、5'磷酸化寡核苷酸纯化、CRISPR sgRNA纯化、qPCR探针纯化、固相萃取trityl-on柱、TEAA条件化纯化、TFA脱DMT流程、Glen-Pak 60-5100采购、Glen-Pak 60-5200注射器柱、实验室引物粗品除杂、寡核苷酸全长回收纯化

更多产品信息，请联系Glen Research中国区域代理商：上海起发实验试剂有限公司

（注：本文内容基于品牌公开资料及行业常规信息整理，具体以品牌信息文档为准。）