DNA残留检测试剂盒

疫苗DNA残留对人体的潜在危害

对所使用的疫苗，我们zui关心的是疫苗的效果和其安全性。现在很多疫苗是细胞培养疫苗，比如重组（CHO细胞）乙肝疫苗，Vero细胞狂犬病疫苗等大多数疫苗都是用细胞培养的方法生产，而对疫苗的纯化是关键问题，我们要尽可能的去除宿主细胞DNA和宿主蛋白。假若宿主细胞的DNA和蛋白同疫苗一起注入人体将会产生不可预料的后果。就以疫苗DNA残留为例，疫苗DNA残留可能造成插入突变﹑导致抑癌基因失活﹑癌基因被激活等，zui终造成疫苗使用者致癌。

疫苗DNA残留的相关法规

由于有如此潜在的危险性，所以许多机构对疫苗DNA残留制定了相关标准，1986年世界卫生组织规定用细胞系生产的疫苗DNA残留不能超过100 pg /支 ，而在1998年世界卫生组织认为细胞系生产的疫苗DNA残留不能超过10 ng /支，而在1997年美国药品食品卫生监督局规定在美国使用的细胞系疫苗DNA残留不能超过10 pg /支，中国规定的细胞系疫苗DNA残留不能超过100 pg /支。

所以在疫苗生产中要随时对DNA残留进行检测，以便知道每个过程除掉DNA残留的能力。在每一批产品中我们必须检测DNA残留，所以我们必须运用敏感且行之有效的对DNA残留定量的检测方法。通常规定每支疫苗DNA残留不能超过100 pg，也就大约等同于17个甚至更少CHO细胞基因组DNA的含量，对如此微量的DNA残留进行检测，所用的技术方法就必须相当敏感和稳定，现在对DNA残留定量的方法主要有以下三种：
1、分子杂交技术检测DNA残留
2、基于DNA结合蛋白的方法（Threshold® immunoassay）检测DNA残留
3、实时定量PCR法检测DNA残留

分子杂交技术检测DNA残留的原理和方法

分子杂交分析的基本原理是基于DNA探针检测变性而且固定在硝-酸纤维素膜上的宿主细胞DNA。这些探针可以不依赖宿主细胞DNA来制备，例如用随机引物制备探针。探针上标记酶﹑生物素﹑放射性同位素﹑地高辛（Dig）等。由于地高辛标记核酸探针，操作方便、灵敏度高，已标记的探针在4℃贮存可达两年之久，方便随时应用，所以现在常采用地高辛标记核酸探针，用光标记法将光敏Dig标记到探针上，制成光敏-Dig-核酸探针，再与固定在硝--酸膜上的靶核酸进行靶DNA分子杂交，使之与抗Dig-碱性磷酸酶结合，zui后可用不同的检测方式进行检测，发光检测和显色检测均可，灵敏度可达10pg以下（表 1  三种DNA残留检测方法的比较）。

基于DNA结合蛋白的方法（Threshold® Immunoassay）检测DNA残留的原理和方法

Threshold® Immunoassay分析系统是基于两种DNA序列非特异性蛋白，单链DNA（ssDNA）结合蛋白（SSB）和抗ssDNA 的单抗。检测的基本过程是当生物素—DNA单链结合蛋白和尿素酶—抗ssDNA 的单抗与变性的宿主细胞DNA结合zui终形成复合物，通过亲合素将此复合物连接到生物素—硝--酸纤维素膜，在通过洗涤所有非特异性的被洗脱掉，zui后放于有尿素溶液的读数仪，尿素酶催化尿素分解成NH3和CO2 导致PH值发生变化，读数仪根据PH值的变化换算成DNA的量，从而达到检测DNA残留含量的目的。

实时定量PCR法检测DNA残留的原理和方法

荧光定量PCR是基于PCR扩增时，在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，产物的增加可以通过荧光信号指示，通过实时监控PCR体系中的荧光信号，对样本中初始模板进行定量分析。定量PCR可实时检测产物量，通过加入已知浓度的标准样品绘制标准曲线，然后根据待测样品在标准曲线中的位置推算初始模板的浓度，从而达到检测DNA残留含量的目的。

三种检测DNA残留方法的比较

3种方法用来检测疫苗DNA残留都要对样品进行相应的处理，这对zui终的结果的准确性至关重要。而杂交相对对样品DNA的损失小，而用Q-PCR需要提取样品的DNA，损失较大。在我们选择那种方法时我们要考虑它的稳定性，敏感性，成本等以至找到*的性价比的方法（表 1），从表1 我们不难发现使用分子杂交的方法是一种比较可行经济实用的方法，目前国内也主要是用此方法。

表 1  三种DNA残留检测方法的比较

罗氏Roche DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit II试剂盒产品简介

产品中文名称：高效DNA地高辛标记和检测试剂盒II

罗氏应用科学部（Roche Applied Science）是zui早致力于向用户提供非放射标记技术的公司之一，让更多的科研工作者们可以避免使用危险的放射性同位素。DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit II（第二代）是由罗氏公司研发，并且是在DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit I（*代）的基础上优化升级的，具有更高的准确性、更好的灵敏度、操作时间更短等特点。自1995年地高辛产品上市以来，尽管有定量PCR技术的应用，DIG系统仍然是非放射性高效标记—检测技术的*，被广泛地应用各种膜杂交及原位杂交技术中。

高效DNA地高辛标记和检测试剂盒II 图片

欲了解详细信息请咨询 

罗氏Roche DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit II检测原理

该产品是用地高辛（地高辛：英文名Digoxigenin，简称DIG；又称异羟基洋地黄毒甙元，是一种类固醇半抗原分子）标记的DNA探针，应用于分子杂交和随后的化学发光检测。检测主要分三阶段进行：1. DNA标记：根据随机引物标记技术，生成DIG地高辛标记的DNA探针。 2. 杂交：按照标准杂交方法进行，将地高辛标记的DNA探针用于核酸点杂交，可选择带正电的尼龙膜或纯硝--酸纤维素膜作为杂交膜。 3. 免疫学检测：首先将标记有AP的地高辛抗体与杂交探针免疫结合；然后在477 nm波长下，通过检测碱性磷酸酶与CSPD底物产生的化学发光反应的数值，从而达到免疫检测的目的。

罗氏Roche DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit II的显著特点

★ Accurate and fast-----使用预混合的高效地高辛（DIG）标记的随机引物可以缩短标记DNA探针的操作时间，提高标记物的产量。
★ Sensitive-----在人类DNA的复合物和植物基因组中，可以检测到单个拷贝的基因。
★ Time-saving-----地高辛（DIG）标记的探针可以储存一年以上，杂交液可以反复使用3～5次（具体要根据每次杂交过程中标记探针产生信号的强弱来确定）。

起福生物为您提供配套的产品

生物制品加工过程中培养物残留的污染物（Bioprocess Contaminant, BC）ELISA检测试剂盒

宿主细胞蛋白（Host Cell Protein, HCP）残留检测ELISA试剂盒

例如： Vero Cell HCP ELISA Kit
           CHO HCP ELISA Kit, 3G
           Pichia pastoris HCP ELISA Kit 
           E.coli HCP ELISA Kit
           Human Erythropoietin（EPO） Quantikine IVD ELISA Kit 

           更多相关产品请点击查看>>> Cygnus Biotech ELISA Kits

           尼龙膜
           PVDF膜
           硝--酸纤维素膜
           鱼精DNA
           蛋白酶K